Змз 409 википедия: УАЗ 3153 / 3159 Барс

Двигатели ЗМЗ: характеристика, описание

Двигатели ЗМЗ — это силовые агрегаты, которые производит и выпускает Заволжский моторный завод. Они стали довольно популярные за весь период производства. Завод ЗМЗ выпускает моторы, как для грузовых транспортных средств, так и для легковых автомобилей. Основная направленность деятельности завода — выпуск движков для автомобилей, выпускаемых Горьковским автомобильным заводом.

Краткое описание завода ЗМЗ

Заволжский моторный завод был основан в 1958 году. Располагаются основные производственные мощности в городе Заволжье, Нижегородской области, Российская Федерация. Завод производит двигатели ЗМЗ, которые на сегодня покупают ГАЗ, УАЗ и ПАЗ.

Заволжский завод производит на свет дизельные и бензиновые силовые агрегаты, которые славятся своей надёжностью и простотой на всей территории СНГ.

Выпускаемые двигатели

ОАО Заволжский моторный завод выпуская достаточно большой ассортимент бензиновых и дизельных моторов, которые получили широкое распространение на многих марках автомобилей отечественных автопроизводителей.

Так, за всю историю производства двигатель ЗМЗ устанавливался на такие легендарные автомобили, как — ГАЗ 24, ГАЗ 53, УАЗ 469, Газель, ГАЗ 66, УАЗ Патриот и другие.

Бензиновые моторы

По сравнению с дизельными вариантами силовых агрегатов, бензиновые модели получили большой модельный ряд и применение. Первым ярким представителем стал легендарный движок с маркировкой ЗМЗ 402, который был разработан для 24-й Волги, но позже получил широкое распространение на автомобили ГАЗ 3110 и семейство транспортных средств Газель.

Технические характеристики ЗМЗ 402:

Наименование	Характеристика
Изготовитель	ЗМЗ
Модель	ЗМЗ 24, ЗМЗ 24Д
Модификации	ЗМЗ 4021, ЗМЗ 4022, ЗМЗ 4025, ЗМЗ 24С
Тип мотора	Бензиновый
Тип впрыска	Карбюратор
Конфигурация	4-цилидровый рядный продольный ДВС
Мощность двигателя	95 л. с.
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	8
Диаметр поршня	92 мм
Ход поршня	92 мм
Охлаждение	Жидкостное
Материал блока и головки	Алюминий
Ресурс	300 000 км
Порядок работы цилиндров	1-2-4-3
Система зажигания	Контактная или бесконтактная

Мотор ЗМЗ 402 достаточно ремонтопригодный, чем полюбился многим автомобилистам. За счёт простой конструкции, его довольно легко обслужить и провести мелкий ремонт своими руками. Что касается конструкции, то мотор имеет нижнее расположение распределительного вала, что типично для силовых агрегатов 50-60-х годов. Вместо заднего сальника коленчатого вала установлена сальниковая набивка, что служило частой потерей масла.

Ещё один яркий представитель и схожий по конструкции с 402-м мотором — двигатель ЗМЗ 511/513. Эти силовые агрегаты устанавливались на легендарные грузовые автомобили ГАЗ 53.

Технические характеристики ЗМЗ 511/513:

Наименование	Характеристика
Завод производитель	ГАЗ
Марка двигателя	ЗМЗ
Модель	53, 511
Объем	4,3 литра (4250 см куб.)
Количество цилиндров	8
Конфигурация	V
Количество клапанов	16
Охлаждение	Жидкостное
Мощность	115 л.с.
Блок и головка, исполнение	алюминий
Порядок работы цилиндров	1-5-4-2-6-3-7-8
Топливо	А-76, А-80, Газ
Диаметр стандартного поршня	92 мм
Ход поршня	80 мм
Питание	Карбюратор К-126, К-126Б, К-126М

Кроме 53-й модели движок получил широкое распространение на такие не менее известные модели, как 66-й Газон, ГАЗ 3307, а также при самостоятельной установке и ЗИЛ-130.

Это V-образный силовой агрегат, который имеет некоторые характерные отличия — специфический поддон, большой воздушный и масляный фильтр. Его аналог 513 отличается только увеличенным весом на 275 кг.

Многие автолюбители помнят легендарный ЗМЗ-21, который производился и устанавливался на 21-е Волги. Этот движок является предшественником известного 402-го, но имеет ряд конструктивных отличий.

Фаски и ножки клапанов имеют меньший диаметр, помпа устанавливалась не на блоке цилиндров, а на головке, наличие двух масляных фильтров — тонкой и грубой очистки. Небольшой ресурс мотора создаёт некоторый дискомфорт. Кроме этого существует несколько модификаций данного мотора.

Технические характеристики ЗМЗ 21/21А:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Карбюратор
Объем	2,5 литра (2445 см. куб)
Мощность	69-76 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	8
Диаметр цилиндра	92 мм
Расход	13 литров на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное
Порядок работы цилиндров	1-2-4-3

Технические характеристики двигателя ЗМЗ 21Е/ 21Д

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Карбюратор
Объем	2,5 литра (2445 см. куб)
Мощность	80-85 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	8
Диаметр цилиндра	95 мм
Расход	13 литров на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное
Порядок работы цилиндров	1-2-4-3

Последователем двигателя ЗМЗ 402 стал мотор с маркировкой 406, который был предназначен для автомобилей Газель. Первое поколение силовых агрегатов выпускалось с карбюраторной системой впрыска топлива, а позже, когда конкурентные автопроизводители стали переходить на инжектор, данный вид ДВС также сделали с инжектором. Основное предназначение силового агрегата стала установка на автомобили производства Волга, Газель и Соболь.

Также, часть моторов закупил Ульяновский автомобильный завод для установки на свои транспортные средства. Большим конструктивным отличием от 402-го стало наличие 16 клапанов вместо 8-клапанного механизма. Это позволило повысить мощность и технические характеристики.

Технические характеристики двигателя ЗМЗ 406:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Карбюратор, пожзе инжектор
Объем	2,3 литра (2280 см. куб)
Мощность	145 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	16
Диаметр цилиндра	92 мм
Расход	11 литров на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-3-4-2

Преемником 406-го мотора стал ЗМЗ 405 и его модификации. Это чистый инжекторный двигатель с повышенными техническими характеристиками. По сравнению с предшественником, у 406-го была меньшая мощность и больший объем двигателя. Мотор получил экологическую норму — Евро-3, что позволило продавать автомобили за границу.

При этом конструкторы смогли устранить ряд недоработок, которые были обнаружены у ЗМЗ 405. В процессе разработки нового движка была модернизированная клапанная крышка, газораспределительный механизм, установленная двухслойная металлическая прокладка ГБЦ.

Технические характеристики двигателя ЗМЗ 405:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Инжектор
Объем	2,5 литра (2464 см. куб)
Мощность	140,5 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	16
Диаметр цилиндра	95,5 мм
Расход	9,6 литров на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-3-4-2

Двигатель ЗМЗ 410, который разрабатывался на базе 402-го мотора, был предназначен для установки на автомобили Волга и УАЗ. Данный силовой агрегат имеет существенные конструктивные отличия от своего отца, поскольку блок цилиндров имеет оригинальную структуру, а диаметр цилиндра составляет 100 мм, что повышает мощностные характеристики.

Этот двигатель многие автомеханики называют «УАЗ сотка», именно из-за диаметра цилиндра. Также, конструктивной переделке пришлось модернизировать коленчатый вал. Данный двигатель взаимозаменяется с УАЗ-421, и не требует дополнительных переделок или доработок.

Технические характеристики ЗМЗ 405:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Карбюратор
Объем	2,9 литра (2890 см. куб)
Мощность	96 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	8
Диаметр цилиндра	100,0 мм
Расход	11,2 литра на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-2-4-3

16-клапанный двигатель ЗМЗ 409 был разработан специально для установки на автомобили Ульяновского автомобильного завода. Этот силовой агрегат, что то среднее между 405 и 410 моторами, а точнее слияние их лучших компонентов и характеристик.

В случае, как и с 405, на 409-м установлены следующие доработки: модернизированная клапанная крышка, газораспределительный механизм, установленная двухслойная металлическая прокладка ГБЦ. Правда, отличием стало то, что объем силового агрегата увеличен до 2,7 литров, что потянуло за собой увеличенный расход.

Технические характеристики 409-го движка:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Инжектор
Объем	2,7 литра (2693 см. куб)
Мощность	128 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	16
Диаметр цилиндра	95,5 мм
Расход	13,2 литра на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-3-4-2

Последний представитель бензиновых силовых агрегатов производства ЗМЗ становится двигатель с маркировкой 523, который предназначен для установки на грузовые автомобили ГАЗ-3307 и автобусы ПАЗ. Это 8-цилиндровый V-образный мотор с повышенными техническими характеристиками. Правая и левая головки блока цилиндров идентичные, которые имеют высокотурбулентные камеры сгорания и впускные клапана винтового типа.

Двигатель сам по себе дешёвый, а за счёт простой конструкции, неприхотливый в обслуживании. Но, в связи с большим расходом горючего, считается, что данный движок морально устарел, поскольку в связи с высокой стоимостью ГСМ, его эксплуатация экономически нецелесообразна.

Технические характеристики 523-го:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Бензин
Система впрыска	Карбюратор
Объем	4,67 литра
Мощность	130 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Количество клапанов	16
Диаметр цилиндра	92,0 мм
Расход	20,4 литра на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-5-4-2-6-3-7-8

Дизельные моторы

Единственным представителем дизельного двигателя выпускаемого Заволжским заводом был силовой агрегат с маркировкой 514. Производился он для транспортных средств Ульяновского автомобильного завода — УАЗ Патриот (Дизель), Хантер, Пикап и Карго.

На двигатель устанавливалась модернизированная система подачи топлива Common Rail фирмы «BOSCH». Привод генератора, топливного насоса высокого давления, водяного насоса, осуществляется при помощи поликлинового ремня с автонатяжителем.

Технические характеристики 514-го:

Наименование	Характеристика
Тип	Рядный
Топливо	Дизель
Система впрыска	ТНВД Common Rail
Объем	2,2 (2235 см. куб.) литра
Мощность	130 лошадиных сил
Количество цилиндров	4
Диаметр цилиндра	87,0 мм
Расход	8,4 литра на 100 км
Система охлаждения	Жидкостное, принудительное
Порядок работы цилиндров	1-3-4-2

Вывод

Силовые агрегаты Заволжского моторного завода имеют достаточно большой модельный ряд за всю историю производства. За счёт простой, но надёжной конструкции ремонт двигателя ЗМЗ можно проводить самостоятельно. Обладая высокими техническими характеристиками, силовые агрегаты покорили сердца многих автолюбителей.

315195 — это… Что такое УАЗ-315195?

УАЗ-315195

УАЗ Хантер

Общие данные

Года пр-ва:

2003 — настоящее время

Тип кузова:

4 / 5-дверный универсал 4-дверный универсал-фаэтон

УМЗ-4213
Марка:	УМЗ-4213
Тип:	Бензиновый инжекторный
Объём:	2890 см3
Максимальная мощность:	104 л. с., при 4000 об/мин
Максимальный крутящий момент:	201 Н·м, при 3000 об/мин
Конфигурация:	рядный, четырёхцилиндровый
Цилиндров:	4
Макс. скорость:	125 км/час
Экологические нормы:	Евро-2
Ход поршня:	92 мм
Диаметр цилиндра:	100 мм
Cтепень сжатия:	8,2

ЗМЗ-409.10
Производитель:	Заволжский моторный завод
Марка:	ЗМЗ-409.10
Тип:	Бензиновый инжекторный
Объём:	2693 см3
Максимальная мощность:	128 л.с., при 4400 об/мин
Максимальный крутящий момент:	217,6 Н·м, при 2500 об/мин
Конфигурация:	рядный, четырёхцилиндровый
Цилиндров:	4
Макс. скорость:	130 км/час
Экологические нормы:	Евро-2
Ход поршня:	94 мм
Диаметр цилиндра:	95,5 мм
Cтепень сжатия:	9,0

ЗМЗ-5143.10
Производитель:	Заволжский моторный завод
Марка:	ЗМЗ-5143.10
Тип:	Дизельный
Объём:	2235 см3
Максимальная мощность:	96 л.с., при 4000 об/мин
Максимальный крутящий момент:	216 Н·м, при 2250 об/мин
Конфигурация:	рядный, четырёхцилиндровый
Цилиндров:	4
Макс. скорость:	120 км/час
Экологические нормы:	Евро-2
Ход поршня:	94 мм
Диаметр цилиндра:	87 мм
Cтепень сжатия:	19,5

Характеристики

Размеры

Колея задняя:

1445 мм

Колея передняя:

1445 мм

На рынке

Предшественник Предшественник

Другое

Грузоподъёмность:

750 кг

Объём бака:

2х39 л

УАЗ Хантер (УАЗ-315195) — полноприводный легковой автомобиль повышенной проходимости (внедорожник) для эксплуатации на дорогах всех категорий, а также по пересечённой местности.

УАЗ «Хантер» представляет собой дальнейшее развитие второго поколения ульяновских внедорожников УАЗ-469 и УАЗ-3151. В базовой версии автомобиль оснащён закрытым пятидверным кузовом с металлическим верхом, но в семействе предусмотрена и версия с кузовом универсал-фаэтон со складываемым матерчатым верхом на съёмных дугах.

Серийно выпускается Ульяновским автозаводом с декабря 2003 года. До этого в 1985—2007 производилась модель УАЗ-3151/ −31512/ −31514/ −31519/ −3153, а в 1972—1986 — УАЗ-469 и −469Б.

Технические характеристики UAZ Hunter (UAZ Hunter Classic)*

1. Колесная формула 4×4
2. Количество мест 5 (7*)
3. Габаритные размеры, мм 4170х1785х2020
4. Дорожный просвет, мм 210
5. Масса снаряжённого а/м, кг 1770
6. Полная масса, кг 2520
7. Грузоподьёмность, кг 675
8. Максимальная скорость, км/ч 120
9. Расход топлива при 90/120 км/ч 10,4 / 14,5 л/100 км
10. Двигатель ЗМЗ-409.10 (УМЗ-4213.10)
11. Топливо бензин Аи-92
12. Рабочий объем, л. 2,7 (2,89)
13. Макс. мощность, л.с./кВт/об/мин 128/ 94,1/ 4400 (99/ 72,8/ 4000)
14. Макс. крутящий момент, Нм/об/мин 217,6/2500 (201/ 2500)
15. Коробка передач механическая, 5-ступенчатая (4-ступенчатая)
16. Раздаточная коробка 2-ступенчатая: I — 1; II — 1,94
17. Передние тормоза дисковые вентилируемые, с двумя цилиндрами, с плавающей скобой
18. Задние тормоза барабанного типа, с одним цилиндром, с автоматическим регулированием зазора между накладками и барабаном
19. Передняя подвеска зависимая, пружинная со стабилизатором поперечной устойчивости, гидропневматическими амортизаторами телескопического типа двухстороннего действия, с двумя продольными рычагами и поперечной тягой
20. Задняя подвеска зависимая, на двух продольных полуэллиптических малолистовых рессорах и гидропневматических амортизаторах телескопического типа двухстороннего действия
21. Шины 225/75R16, 245/70R16

• Новая версия Hunter Classic укомплектована металлическими бамперами и задним откидным бортом, а также отличается отсутствием пластиковых накладок на кузове.

См. также

Ссылки

Wikimedia Foundation. 2010.

УАЗ Барс — это… Что такое УАЗ Барс?

УАЗ Барс

Общие данные

Годы пр-ва:

1999—настоящее время

ЗМЗ-409
Производитель:	Заволжский моторный завод
Марка:	ЗМЗ-409
Тип:	Бензиновый
Объём:	2,69 л см3
Максимальная мощность:	133 л.с., при 4400 об/мин
Максимальный крутящий момент:	224 Н·м, при 4000 об/мин
Цилиндров:	4
Клапанов:	8
Макс. скорость:	140 км/час
Разгон до 100 км/ч:	21,5 с
Расход топлива при городском цикле:	16,4 л/100 км
Система питания:	инжектор
Тактность (число тактов):	4
Рекомендованное топливо:	АИ-93

Механическая 5-ступ.
Тип:	Механическая
Число ступеней:	5-ступ.

Характеристики

Массово-габаритные

Колея задняя:

1600 мм

Колея передняя:

1600 мм

Полная масса:

2800 кг

Динамические

Разгон до 100 км/ч:

21,5

Макс. скорость:

140 км/ч

На рынке

Предшественник Предшественник

Другое

Расход топлива:

15,5

УАЗ Барс (УАЗ-3159) — полноприводный легковой автомобиль повышенной проходимости, выпускаемый Ульяновским автомобильным заводом с декабря 1999 года.

Технические характеристики

Барс является удлиненной модификацией УАЗ-3151 с двигателем ЗМЗ-409^[1].

См. также

Примечания

Ссылки

Двигатель змз-409 | LifeGaz

В этой статье вы найдёте:

В 2001 году Заволжским моторным заводом начат выпуск ЗМЗ 409. Это двигатель для практически всей современной линейки автомобилей Ульяновского автомобильного завода. Мотор является последователем двигателя ЗМЗ 406, хотя его нельзя рассматривать как эволюционный шаг. Скорее, правильно отнести его к параллельной ветке развития этой линейки двигателей ЗМЗ. В то же время, ряд решений, которые на впрысковом первенце проявили себя не с лучшей стороны, были доработаны. Двигатель имеет множество модификаций и постоянно модернизируется.

Конструкция и особенности

Уже на начальных этапах проектных работ над новым для тогда еще советской школы двигателестроения мотором ЗМЗ 406 было понятно, что получить мотор, который будет одинаково хорош для всех машин, не получится. Но это была цель, к которой стоило стремиться. Именно поэтому в новинку сразу закладывался очень серьезный потенциал не только для его совершенствования, но и для создания на его базе моторов для более тяжелых машин, требующих большого момента уже с самых низких оборотов, чего базовый четыреста шестой, будучи достаточно быстроходным, обеспечить уже не мог. Эта особенность дала возможность разработки двигателей ЗМЗ 405 и ЗМЗ 409 с увеличенными рабочими объемами.

Как и его предшественник, ЗМЗ 409 имеет шатровую камеру сгорания со свечами в центральной части, четыре клапана на цилиндр и микропроцессорное управление зажиганием и впрыском топлива. Бензин А92, степень сжатия — 9.

Головка блока из алюминиевого сплава, литая с запрессованными направляющими клапанов и чугунными жаропрочными седлами. Изначально головка всего семейства 406, 405, 409 была единой. Однако при модернизации двигателя до норм ЕВРО 3 она претерпела ряд изменений, и от унификации пришлось отказаться. Обновленная головка блока ЗМЗ 409 стала легче на 1,3 кг, в ней отсутствуют каналы холостого хода. В свою очередь, дроссель стал электронноуправляемым. Ушли в прошлое: регулятор холостого хода со своим каналом, дроссельный патрубок и датчик положения дроссельной заслонки. Отпала необходимость в подогреве корпуса дросселя, соответственно, убрали и патрубки, подводившие к дросселю охлаждающую жидкость. У переднего края головки появились дополнительные крепежные отверстия для передней крышки мотора.
Клапанный механизм имеет гидравлические компенсаторы тепловых зазоров, именуемые гидротолкателями. Соответственно, в регулировке клапана не нуждаются.
ГРМ двухвальный, за впуск и выпуск отвечают отдельные валы, отлитые из чугуна. Продольное перемещение распределительных валов ограничено упорными полукольцами из пластика установленными в передней опоре, выполненной общей для обоих валов. Крышки опор валов не взаимозаменяемы.
Привод распределительных валов осуществляется посредством двухступенчатой цепной передачи с промежуточным валом, как и на ЗМЗ 406, а вот гидронатяжители теперь выполнены звездочками. Решение долгожданное. Теперь у автовладельцев отпала нужда в поисках качественного набора для самостоятельного апгрейда этого узла. Впрочем, справедливости ради, стоит сказать о том, что и у башмачного натяжения достаточно много поклонников, так как такой вариант дешевле в ремонте и проще конструктивно.
Блок литой из серого чугуна с рядным расположением четырех цилиндров, проточенных непосредственно в теле. Диаметр цилиндра вырос с 92 мм у 406 до 95,5 у ЗМЗ 409. Рабочий объем увеличился до 2,693 литра при сохранении внешних размеров блока. Кстати, идентичный блок используется и для двигателя ЗМЗ 405 имеющего рабочий объем 2,46 литра. Увеличение рабочего объема достигнуто за счет изменения хода шатуна (в поршнях смещены пальцы, а шейки коленчатого вала разнесены сильнее). Так как ЗМЗ 405 появился раньше, на нем были обкатаны многие новые решения, и четыреста девятый имеет уже сравнительно мало детских болезней. Так, горизонтальные проточки между цилиндрами на верхней привалочной поверхности блока были убраны в пользу новых каналов в теле блока, что повысило геометрическую жесткость блока и избавило цилиндры от деформации при протяжке головки. Дополнительно этому способствовала замена мягкой безастбестовой прокладки головки на более тонкую (0,5 мм против 1,5), металлическую, двухслойную, которую уже не нужно протягивать с таким диким моментом. Болты крепления головки и их резьбовая часть стали более длинными. При переходе к ЕВРО 3 в начале 2008 года, изменена хонинговка поверхности цилиндров, что позволило снизить угар масла.
Коленчатый вал из высокопрочного чугуна марки ВЧ60, смонтирован на пяти опорах. Уплотнение обоих концов выполнено самоподжимающимися сальниками. К опорам крепятся крышки, обработанные заодно с опорами, потому они не взаимозаменяемы (при ремонте помечать и ставить строго на свои места). Подшипники скольжения сталеалюминиевые, существуют трех ремонтных размеров. Радиус кривошипов увеличен до 47 мм. В остальном вал идентичен применяемому на ЗМЗ 406. Для уменьшения воздействия на вал изгибающей и центробежной сил, напротив каждого кривошипа расположено по два противовеса. Коренные шейки номинального размера, имеют диаметр — 62 мм, шатунные — 56 мм.
Шатуны стальные кованые, двутаврового сечения, аналогичные для всех моторов линейки.
Поршни алюминиевые с двумя компрессионными и одним составным маслосъемным кольцом. В днищах выполнены выборки, исключающие встречу клапанов с поршнями в случае сбивания фаз ГРМ. Поршни не взаимозаменяемы с поршнями ЗМЗ 406 и ЗМЗ 405, так как у ЗМЗ 409 ось пальца смещена на 4 мм в сторону дна поршня, а само днище имеет выборку глубиной 4,1 мм. Поршневой палец плавающего типа (без фиксации), от продольных перемещений ограничен стопорными кольцами из пружинной стали, установленными в кольцевых канавках бобышек поршней.
Система смазки полнопоточная, комбинированная. Подшипники и втулки смазываются под давлением, а стенки цилиндров — разбрызгиванием. Масляный насос односекционный, шестереночный, аналогичен насосу ЗМЗ 406. Не претерпел изменений и его привод, реализованный от промежуточного вала ГРМ.
Система охлаждения жидкостная, закрытого типа, с расширительным бачком. Циркуляция жидкости принудительная. Конструктивно, повторяет систему ЗМЗ 406, но каналы в блоке выполнены иначе. Изменено их расположение и форма, окна в верхней привалочной плоскости стали треугольными (у 406 они круглые).
Вентиляция картера принудительная, закрытая, осуществляется за счет разрежения во впуске. На последних версиях мотора, газы втягиваются в ресивер.
Зажигание с микропроцессорным управлением. Порядок работы цилиндров — не привычный для волговодов 1-2-4-3, а 1-3-4-2.

Заявленный ресурс мотора составляет 200 — 250 тысяч километров пробега, но так как основным его носителем является внедорожник, режимы эксплуатации сложно назвать щадящими или хотя бы близкими к рекомендуемым, а значит, и ресурс вырабатывается несколько быстрее. Как и ЗМЗ 406, мотор допускает три капитальных ремонта.

Модификации и применяемость

К настоящему моменту ЗМЗ 409 — очень распространенный силовой агрегат. Основным его потребителем является ОАО УАЗ, наряду с другими двигателями устанавливающее его на всю линейку своих автомобилей:
УАЗ Барс;
УАЗ с вагонной компоновкой «Буханка»;
УАЗ 3163 «Патриот»;
УАЗ 3164 «Патриот» Спорт»;
УАЗ Хантер;
УАЗ 31632 «Пикап»;
УАЗ «Карго»;
УАЗ 3162 «Симбир»;
Кроме того, умельцами мотор успешно монтируется на автомобили ГАЗель.

За свою не такую уж и долгую, по меркам ЗМЗ, конвейерную жизнь, двигатель пережил достаточно много мелких и несколько серьезных модернизаций, в основном, направленных на устранение детских болезней и улучшение потребительских качеств. В результате последней доработки ЗМЗ 409 стал укладываться в экологические нормы ЕВРО 4. И, судя по тенденциям на рынке, вполне вероятна очередная доводка — теперь к нормам ЕВРО 5.

Выпускается в следующих модификациях:

ЗМЗ 409.10 — соответствует требованиям для экологического класса ЕВРО 2. Мощность 142,8 л.с.
ЗМЗ 4091.10 — выпускается с 2007 года. Соответствует требованиям для экологического класса ЕВРО 3. Предназначен для установки на автомобили УАЗ с вагонной компоновкой (в просторечии «Буханка»). Мощность 125 л.с.
ЗМЗ 4911.10 — выпускается с 2012 года. Разработан для тех же «Буханок» и «Головастиков». В конструкцию введен датчик абсолютного давления и зубчатые цепи привода ГРМ. Мощность 125 л.с.
ЗМЗ 40904.10 — устанавливается на Patriot, Hunter, Pickup и Cargo. Отличается применением датчика абсолютного давления. Форсунки двухпоточного распыления смонтированы на рампе. ГРМ приводится зубчатыми цепями. Картерные газы отсасываются в полость ресивера. Изменена крышка головки блока, на этом двигателе она из пластика. Мощность 142,8 л.с.
ЗМЗ 40905.10 — соответствует требованиям для экологического класса ЕВРО 4. В остальном аналогичен ЗМЗ 40904.10

Обобщение

Нового мотора с большим крутящим моментом поклонники марки УАЗ ждали очень давно, и отчасти ЗМЗ 409 эти ожидания оправдал. Конечно, он не оказался именно тем двигателем, которого хотелось, но со своими обязанностями он справляется очень недурно. Хороший крутящий момент, потрясающая ремонтопригодность, надежность, доступность запасных частей — это, безусловно, плюсы двигателя.
Ругают же его за недостаточную эластичность при езде по бездорожью, требовательность к качественным ГСМ (УАЗ теперь хочет 92 бензина и хорошего масла… мыслимое ли дело), обслуживание стало более сложным и более дорогим. Теперь ремонт в поле уже нельзя назвать плевым делом, хотя и невыполнимым не назовешь тоже. Чинятся же.

ЗМЗ 409 более экономичен, более предсказуем и, будучи своевременно обслуживаемым, не требует промежуточных регулировок и подстроек. У него очень хороший потенциал для модернизации (чаще всего, ее первой жертвой становится вся «мишура», связанная с повышением экологичности), широкая унификация с другими моторами линейки.

Безусловно это не идеальный мотор для тяжелого рамного внедорожника, он не совершенно избавлен от детских болезней, однако является достаточно удачным двигателем с хорошим соотношением большинства характеристик и приемлемой ценой. И, несмотря на значительную унификацию с предшественниками, он получился совершенно новым — как по паспортным показателям, так и по характеру.

Яндекс Дзен

УАЗ-3153

УАЗ-3153
Общие данные
Производитель	УАЗ
Годы производства	1996—2010
Сборка	УАЗ (Ульяновск, Россия)
Массово-габаритные характеристики
Длина	4514 мм
Ширина	2010 мм
Высота	2025 мм
Динамические характеристики
Разгон до 100 км/ч	30 с
Максимальная скорость	120 км/ч
Другая информация
Расход топлива	15,5 л
Медиафайлы на Викискладе

УАЗ-3153 — полноприводный грузопассажирский автомобиль повышенной проходимости с пятидверным девятиместным цельнометаллическим кузовом и увеличенной колесной базой, длиннобазная версия УАЗ-31514. На автомобиль устанавливали более мощный 2,89-литровый мотор мощностью в 84 лошадиных силы УМЗ-4218.

Выпускался с 1996 до 2010 года мелкосерийным производством.

УАЗ-3153 может применяться для буксировки прицепа, так как имеет тягово-сцепное устройство шарового типа. Допустимая полная масса буксируемого прицепа с тормозами 1500 кг, без тормозов 750 кг.

Подвеска или полностью пружинная, или же спереди пружинная, сзади на малолистовых рессорах. По сравнению с базовой версией была улучшена отделка салона. Во внешнем оформлении активно использовали пластик, зачастую в ущерб прочности. В стандартную комплектацию входил гидроусилитель руля, как и ремни безопасности с момента начала сборки.

УАЗ «Барс»

На базе УАЗ-3153 создан УАЗ-3159 «Барс», выпускаемый Ульяновским автомобильным заводом с декабря 1999.

«Барс» является удлинённой модификацией УАЗ-3151 с двигателем ЗМЗ-409^[1].

Примечания

Ссылки

Эволюция: Битва за Утопию Игра | История версий

3.

5.7.

8 февраля 2021

3.5.6.

6 октября 2020

3.5.5.

25 марта 2020

3.5.4.

4 февраля 2020

3.5.3.

12 ноября 2019

3.5.2.

5 октября 2019

3.5.1.

4 октября 2019

3.5.0.

10 сентября 2019

3.4.9.

22 июня 2019

3.4.8.

21 мая 2018

3.4.7.

2 июня 2017

3.4.6.

24 мая 2017

3.4.4.

23 сентября 2016

3.4.3.

2 августа 2016

3.4.0.

23 июня 2016
Командиры, мы рады объявить о выходе финального обновления игры «Эволюция: Битва за Утопию», которое завершает сюжетную линию этой эпической саги!
ИСХОД раскрывает главные сюжетные тайны и завершает историю самым неожиданным образом, заставляя по-новому посмотреть на пройденный путь и встреченных за время путешествия героев. В этом обновлении вам предстоит исследовать новые локации и столкнуться с невиданными до этого противниками, чтобы закончить свою миссию на этой далёкой планете.
Встречайте третье и заключительное сюжетное обновление игры!
Вас ждет кульминация и развязка всех открытых сюжетных линий, включая главную. Пристегните ремни: впереди грандиозный финал одной из самых эпических историй, когда-либо выходивших на портативных устройствах!
Того, кто пройдет игру до конца и разгадает загадку Утопии, ждет приятный бонус – новый режим «Колесница Перемен», позволяющий перепроходить игру в VIP-режиме.

3.3.0.

13 августа 2015
— Новые враги доминаторы — термиты;
— Новые миссии терроров начиная с 65 уровня;
— Исправление багов и мелкие доработки.

3.2.0.

23 апреля 2015
— Новая локация Ядро! Открывается после прохождения локации Инкубатор;
— Бонус «Боевой нож» теперь дополнительно наносит еще и двукратный урон;
— Исправление ошибок.

3.1.3.

8 апреля 2015
— Новый бонус «Боевой Нож», позволяющий получать очки мастерства при добивании монстров, атакующих базу.
— Ежедневные вознаграждения за серию отбитых терроров.
— Облачное хранилище, которое позволяет сохранять и переносить ваш игровой прогресс с устройства на устройство. Для этого нужно авторизоваться в одной из предложенных соц.сетей.
— Новая спецоперация «Уравнитель», доступная на 65 уровне.
— Технология Антигравитация теперь позволяет создать летательный аппарат УХ-1909
— Изменение в работе комплекса «Феникс»: теперь после каждого выстрела запускается 6-ти часовая задержка на следующий выстрел.
— Новый дробовик «Пума» у контрабандистки для игроков 15-23 уровня.
— Изменение в начислении очков за спецоперациии. Если разница между уровнем игрока и уровнем спецоперации будет очень большой, то очки будут начисляться с корректировкой на эту разницу.
— Новая, более удобная и функциональная форма для связи с техподдержой проекта.
— Правка багов.

3.0.0

21 февраля 2015

Наследие Доминиона — эпическое продолжение истории покорения Утопии!
Близится долгожданная развязка — битва за Утопию входит в решающую фазу! Черный легион Генерала Курбатова разгромлен…
— Новое противостояние с еще более опасным врагом — бесчеловечным Доминионом!
— Опасные бои с самыми смертоносными порождениями электронного гения
— Самое мощное оружие, новые технологии, опаснейшие враги и повышение максимального уровня

2.

4.0

13 ноября 2014
— Новый режим для PVP. Позволяет игрокам бороться между собой за командный пункт, контроль которого дает отличные бонусы. Режим доступен для игроков с рейтингом выше 500.
— Возможность перед покупкой протестировать предлагаемое контрабандистом оружие. Опция доступна для обладателей VIP 1.
— Исследования новых врагов в Штабе Разведки
— Оптимизация Посольства для более быстрой загрузки
— Оптимизация игры под iphone 6 и iphone 6+

2.3.0

28 октября 2014
— Ненужное оружие теперь можно разбирать на очки мастерства. Количество очков зависит от степени модернизации оружия
— Новое здание Штаб разведки. В нем вы можете анализировать уязвимости врагов и использовать эти преимущества в бою
— Возможность использовать Бонус-коды для получения специальных наград
— Правка зависания при входе в Посольство
— Другие исправления и оптимизации

2.2.1

26 сентября 2014
— Исправлена ошибка при запуске на IOS 6 и 7.
— Принудительная перезарядка союзника (для этого нужно тапнуть по нему)
— Возможность помечать боеприпасы, которые не надо брать в бой (осуществляется в профайле)
— Возможность улучшать все шахты и Реактор до 10 уровня
— В Посольстве можно посылать подарки с кристаллитом своим друзьям. Опция получения наград за бои друзей доступна при улучшении Посольства
— Новые ежедневные награды
— Золотые монетки конвертированы в новый ресурс Ускоритель времени (выглядит как часы). Этот ресурс является альтернативой самоцветам во всех процессах ускоряющих время
— Возможность ускорять появление дополнительных миссий
— Усиление союзника Терминатор и Бомболет. Ослабление союзника Матрешка и удешевление стоимости ее тренировки

2.2.0

20 сентября 2014
ВНИМАНИЕ! Для успешного запуска обновления вам потребуется установить IOS 8. Если вы используйте ранние версии IOS, воздержитесь от обновления игры и дождитесь следующего патча, в нем вернется поддержка всех IOS. Следующий патч ожидается в ближайшие несколько дней.
— Принудительная перезарядка союзника (для этого нужно тапнуть по нему)
— Возможность помечать боеприпасы, которые не надо брать в бой (осуществляется в профайле)
— Возможность улучшать все шахты и Реактор до 10 уровня
— В Посольстве можно посылать подарки с кристаллитом своим друзьям. Опция получения наград за бои друзей доступна при улучшении Посольства
— Новые ежедневные награды
— Золотые монетки конвертированы в новый ресурс Ускоритель времени (выглядит как часы). Этот ресурс является альтернативой самоцветам во всех процессах ускоряющих время
— Возможность ускорять появление дополнительных миссий
— Усиление союзника Терминатор и Бомболет. Ослабление союзника Матрешка и удешевление стоимости ее тренировки

2.1.0

21 августа 2014
— Новая локация: Кристаллитная жила. На локации есть возможностью построить шахту, добывающую кристаллит.
— Новый тип врагов, требующий пси- добивания в бою. При просмотре через бинокль, выделяется черепом.
— Новый бонус: Визор. Позволяет видеть детальную информацию о здоровье врага в бою.
— Новое оружие: Автомат Дракон.
— Новая броня: Избранный Кси. При одевании дает одно бесплатное воскрешение в PVE и требует пси- добивания при защите в PVP.
— Броня спартанца и легионера теперь дает пуленепробиваемость при защите в PVP.
— Урон от гранатомета теперь учитывает апгрейд дробовика.
— Задания на получения скидки в технологиях теперь корректно считаются при выполнении Спецопераций.
— Многочисленные багфиксы.

2.0.0

5 августа 2014

Встречайте долгожданное продолжение грандиозной истории! Сразитесь с Черным легионом — зловещей армией Генерала Курбатова! Новые союзники и новые враги, увлекательные мини- игры и зубодробильные головоломки, повышение максимального уровня, смертоносное оружие в ваш арсенал и разгадка тайн Утопии — все это ждет вас в дополнении Черный легион!

1.

6.0

6 июня 2014
— Возможность поделиться результатами побед с друзьями в FасеВоок
— Новая спецоперация (доступна с 25 уровня)
— Улучшение технологии Атакующий режим
— Новая мини игра (доступна с 11 уровня)
— Новый союзник (доступен с 39 уровня)
— Добавлена Немецкая локализация
— Обновлена стартовая локация
— В меню игры добавлен FAQ

1.5.1

14 мая 2014
— Исправлена ошибка, которая приводила к зависанию, если после обновления игры завершалось строительство здания.

1.5.0

30 апреля 2014
— Новое здание Радар — обеспечь свою базу максимальной обороной
— Новая спецоперация Берсерк (доступна с 18 уровня)
— Атакующий режим боя — повышает урон, но уменьшает защиту и выключает автоприседание после убийства
— Автоубирание интерфейса при атаке на базу для большого удобства
— Исправление известных ошибок и оптимизация

1.4.0

8 апреля 2014
— Магазин флагов
— Месть в ПВП
— Новый рейтинг
— Новое событие: Владыка
— Новое оружие
— Управляемое автолечение
— Новая турель
— Новый костюм
— Исправление известных ошибок

1.

3.0

20 марта 2014
— Новые локации
— Новые союзники
— Новая спец. операция
— Новое оружие и боеприпасы
— Новый костюм
— Новое здание
— Турели в ПВП
— Разведка ПВП целей
— Новая мини игра
— Исправлены известные ошибки

1.2.1

5 марта 2014

Исправлены ошибки:

• Не появляются акции
• Урон ККND- 130 не увеличивается по мере прокачки
• Игра зависает при загрузке на 83%
• Условия открытия дополнительных локаций
• Порядок технологий в магазине Тактика и Стратегия

* Уважаемые игроки! Если у Вас после обновления пропадают или не открываются локации, пожалуйста, обратитесь в техническую поддержку!

1.2.0

22 февраля 2014
— Спец-операции. Новая активность в игре, которая позволяет набирать очки мастерства, приобретать дополнительные технологии для развития базы и расширять возможности в бою.
— Зажигательный урон. Новый тип урона, который дает особые преимущества в сражениях с небронированными врагами.
— Новый класс врагов: Арлекины
— Возможность смотреть профайлы других игроков в рейтинге
— Флаги стран в рейтинге

Исправлены баги:

— Ежедневные задания
— Синхронизация с iCIoud
— Потеря цели и надпись New Label Недоступность PvP сражений на iPhone 4 Задержка восстановления здоровья

1.1.0

10 февраля 2014
— Ежедневные награды
— Новое оружие
— Исправлены ошибки
— Исправление проблемы запуска при плохом интернет соединении

1.0.3

28 января 2014
— Исправление ошибки с платежами

1.0.2

24 января 2014
— Исправлены ошибки

1.0.1

15 января 2014
— Исправлены ошибки

1.0.0

19 декабря 2013
— Первая версия новой экшн — игры
 

Если Вы нашли ошибку, выделите ее и нажмите Shift + Enter или кликните здесь, чтобы сообщить нам.

Технические характеристики УАЗ Патриот (UAZ 3163 Patriot) у официального дилера в Москве

ГЕОМЕТРИЯ И МАССА
	Стандарт	Комфорт	Привилегия	Стиль
Количество мест	5
Длина, мм	4750	4785
Ширина (с / без учета зеркал), мм	2110/1900
Высота, мм	1910	2005
Колесная база, мм	2760
Колея передних/задних колес, мм	1600	1610
Дорожный просвет (до моста), мм	210
Высота переднего бампера, мм	372
Высота заднего бампера, мм	378
Угол въезда, град	35
Угол съезда, град	30
Максимальный подъем, преодолеваемый автомобилем полной массой, град	31
Глубина преодолеваемого брода, мм	500
Объем багажного отделения рассчитанный по методике VDA, л (до шторки / до потолка / со сложенными задними сиденьями)	650/1130/2415
Снаряженная масса, кг	2125
Полная масса, кг	2650
Грузоподъемность, кг	525
ДВИГАТЕЛЬ И ТРАНСМИССИЯ
Двигатель	бензиновый инжекторный V = 2,7л ЗМЗ-40906, Евро-4
Топливо	бензин с октановым числом не менее 92
Рабочий объем, л	2 693
Максимальная мощность, л. с. (кВт)	134,6 (99,0) при 4600 об/мин
Максимальный крутящий момент, Н·м	217,0 при 3900 об/мин
Колесная формула	4×4
Трансмиссия	механическая, 5-ступенчатая
Раздаточная коробка	2-ступенчатая с электрическим приводом (передаточное число пониженной передачи i=2,542)
Передаточное отношение главной пары	i=4,625
Привод	Система подключаемого полного привода (Part-Time)
ПОДВЕСКА, ТОРМОЗА И ШИНЫ
Передние тормоза	дискового типа
Задние тормоза	барабанного типа
Передняя подвеска	зависимая, пружинная со стабилизатором
	поперечной устойчивости
Задняя подвеска	зависимая, на двух продольных полуэллиптических малолистовых рессорах, со стабилизатором поперечной устойчивости
Шины	225/75 R16, 245/70 R16, 245/60 R18
СКОРОСТЬ И ЭКОНОМИЧНОСТЬ
Максимальная скорость, км/ч	150
Городской цикл, л/100 км	14
Загородный цикл (при 90 км/ч), л/100 км	11,5
Объем топливного бака, л	68

SEC.

gov | Превышен порог скорости запросов

Чтобы обеспечить равный доступ для всех пользователей, SEC оставляет за собой право ограничивать запросы, исходящие от необъявленных автоматизированных инструментов. Ваш запрос был идентифицирован как часть сети автоматизированных инструментов за пределами допустимой политики и будет обрабатываться до тех пор, пока не будут приняты меры по объявлению вашего трафика.

Пожалуйста, объявите свой трафик, обновив свой пользовательский агент, чтобы включить в него информацию о компании.

Для лучших практик по эффективной загрузке информации из SEC.gov, включая последние документы EDGAR, посетите sec.gov/developer. Вы также можете подписаться на рассылку обновлений по электронной почте о программе открытых данных SEC, включая передовые методы, которые делают загрузку данных более эффективной, и улучшения SEC.gov, которые могут повлиять на процессы загрузки по сценарию. Для получения дополнительной информации обращайтесь по адресу opendata@sec. gov.

Для получения дополнительной информации см. Политику конфиденциальности и безопасности веб-сайта SEC. Благодарим вас за интерес к Комиссии по ценным бумагам и биржам США.

Идентификатор ссылки: 0.5dfd733e.16319.826a4129

Дополнительная информация

Политика безопасности в Интернете

Используя этот сайт, вы соглашаетесь на мониторинг и аудит безопасности. В целях безопасности и обеспечения того, чтобы общедоступная услуга оставалась доступной для пользователей, эта правительственная компьютерная система использует программы для мониторинга сетевого трафика для выявления несанкционированных попыток загрузки или изменения информации или иного причинения ущерба, включая попытки отказать пользователям в обслуживании.

Несанкционированные попытки загрузить информацию и / или изменить информацию в любой части этого сайта строго запрещены и подлежат судебному преследованию в соответствии с Законом о компьютерном мошенничестве и злоупотреблениях 1986 года и Законом о защите национальной информационной инфраструктуры 1996 года (см. Раздел 18 U.S.C. §§ 1001 и 1030).

Чтобы обеспечить хорошую работу нашего веб-сайта для всех пользователей, SEC отслеживает частоту запросов на контент SEC.gov, чтобы гарантировать, что автоматический поиск не влияет на возможность доступа других лиц к контенту SEC.gov. Мы оставляем за собой право блокировать IP-адреса, которые отправляют чрезмерное количество запросов. Текущие правила ограничивают пользователей до 10 запросов в секунду, независимо от количества машин, используемых для отправки запросов.

Если пользователь или приложение отправляет более 10 запросов в секунду, дальнейшие запросы с IP-адреса (-ов) могут быть ограничены на короткий период.Как только количество запросов упадет ниже порогового значения на 10 минут, пользователь может возобновить доступ к контенту на SEC.gov. Эта практика SEC предназначена для ограничения чрезмерного автоматического поиска на SEC.gov и не предназначена и не ожидается, чтобы повлиять на людей, просматривающих веб-сайт SEC. gov.

Обратите внимание, что эта политика может измениться, поскольку SEC управляет SEC.gov, чтобы гарантировать, что веб-сайт работает эффективно и остается доступным для всех пользователей.

Примечание: Мы не предлагаем техническую поддержку для разработки или отладки процессов загрузки по сценарию.

Определение интрона

и аденозин в месте ответвления на участке 385 Контрольная РНК-сплайсинг E6 * I HPV16 и экспрессия E7

Abstract

HPV16 E6 и E7, два вирусных онкогена, экспрессируются с одной бицистронной пре-мРНК. В этом отчете мы приводим доказательства того, что интрон 1 бицистронной пре-мРНК содержит три 5′-сайта сплайсинга (5′-ss) и три 3′-сайта сплайсинга (3′-ss), которые обычно используются при раке шейки матки ⁺ HPV16 и его производных. Сотовые линии. Выбор двух новых альтернативных 5 ‘ss (nt 221 5’ ss и nt 191 5 ‘ss) дает две новые изоформы мРНК E6E7 (E6 * V и E6 * VI).5 ‘ss nt 226 и 3’ ss nt 409 предпочтительно выбираются по сравнению с другими сайтами сплайсинга, пересекающими интрон, чтобы вырезать минимальную длину интрона при сплайсинге РНК. Мы определили AACAAAC как предпочтительную последовательность точки ветвления (BPS) и аденозин в нуклеотиде 385 (подчеркнут) в BPS в качестве сайта ветвления, чтобы диктовать выбор 3 ‘ss нуклеотидов 409 для сплайсинга E6 * I и экспрессии E7. Введение точечных мутаций в картированный BPS приводило к уменьшению связывания U2 с BPS и тем самым к ингибированию второй стадии сплайсинга E6E7 на 3 ‘ss nt 409.Важно отметить, что бицистронная РНК E6E7 с мутантным BPS и неэффективным сплайсингом практически не дает E7, а полученный E6 с мутациями ⁹¹ QYNK ⁹⁴ — ⁹¹ PSFW ⁹⁴ демонстрирует ослабленную активность в отношении деградации p53. Вместе наши данные обеспечивают структурную основу интрона 1 E6E7 для лучшего понимания того, как вирусная экспрессия E6 и E7 регулируется с помощью альтернативного сплайсинга РНК. Это исследование впервые проясняет картированную точку ветвления в геноме HPV16, участвующую в экспрессии вирусного онкогена.

Образец цитирования: Ajiro M, Jia R, Zhang L, Liu X, Zheng Z-M (2012) Определение интрона и ответвление аденозина на участке 385 Контрольная РНК-сплайсинг экспрессии E6 * I и E7 HPV16. PLoS ONE 7 (10): e46412. https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412

Редактор: Цзяньмин Цю, Медицинский центр Канзасского университета, Соединенные Штаты Америки

Поступила: 10.07.2012; Одобрена: 29 августа 2012 г .; Опубликовано: 4 октября 2012 г.

Это статья в открытом доступе, свободная от всех авторских прав, и ее можно свободно воспроизводить, распространять, передавать, модифицировать, строить или иным образом использовать в любых законных целях.Работа сделана доступной по лицензии Creative Commons CC0 как общественное достояние.

Финансирование: Исследование проводилось при поддержке Программы внутренних исследований Национального института здоровья, Центра исследований рака, Национального института здравоохранения и исследовательского сообщества JSPS для японских биомедицинских и поведенческих исследователей в Национальном институте здравоохранения. Финансирующие организации не играли никакой роли в дизайне исследования, сборе и анализе данных, принятии решения о публикации или подготовке рукописи.

Конкурирующие интересы: Авторы заявили об отсутствии конкурирующих интересов.

Введение

Вирусы папилломы человека (ВПЧ) представляют собой большую группу небольших опухолевых вирусов с двухцепочечной ДНК без оболочки, в общей сложности около 120 генотипов [1]. Подгруппа из них была охарактеризована как вызывающая доброкачественные бородавки (ВПЧ низкого риска) и рак человека (ВПЧ высокого риска) [2], [3]. Хроническая инфекция ВПЧ высокого риска ответственна за развитие более 95% рака шейки матки, 50–90% других аногенитальных форм рака и 20–30% рака полости рта и глотки [3] — [5].Среди ВПЧ высокого риска ВПЧ16 является наиболее распространенным генотипом, ответственным за ~ 60% случаев рака шейки матки [4], [6]. Вирусные E6 и E7 ВПЧ высокого риска являются вирусными онкобелками и соответственно разрушают р53 и pRB, два клеточных супрессора опухоли, тем самым внося свой вклад в канцерогенез ВПЧ [2].

Гены E6 и E7 HPV16 расположены бок о бок в начале генома папилломавируса и первоначально транскрибируются как единая бицистронная пре-мРНК с главного раннего промотора P97. Эта бицистронная пре-мРНК E6E7 содержит три экзона и два интрона, а его интрон 1 простирается от открытой рамки считывания E6 (ORF) до ORF E7 и содержит три альтернативных 3′-сайта сплайсинга (3′-ss) [7].Альтернативный сплайсинг интрона 1 HPV16 приводит к продукции трех видов мРНК E6: E6 * I (нуклеотид 226∧nt 409) и E6 * II (нуклеотид 226∧nt 526) для разрушения ORF E6 и E6∧E7 (нуклеотида). 226∧nt 742), чтобы разрушить ORF для E6 и ORF для E7 [8] — [10]. В то время как мРНК E6 * I HPV18 транслирует усеченный полипептид E6 [11], [12], мРНК E6 * I как HPV16, так и HPV18 в основном функционируют как мРНК E7 для трансляции белка E7 [8], [13]. Поскольку ORF E7 находится слишком близко к ORF выше по течению в бицистронном транскрипте E6E7, это положение структуры вирусных ORF E6 и E7 в несплицированной РНК не позволяет сканирующей рибосоме повторно инициировать следующий запуск трансляции E7 после завершения трансляции E6 [ 13].

Однако небольшая часть бицистронной РНК E6E7 с сохранением интрона 1 обнаруживается в тканях рака шейки матки и клеточных линиях, происходящих от рака шейки матки, и этот вид мРНК E6E7 отвечает за трансляцию полноразмерного E6. С механистической точки зрения в настоящее время доступны лишь ограниченные данные о том, как интрон 1 ускользает от распознавания аппаратом клеточного сплайсинга с образованием полноразмерного белка E6. Первоначально было обнаружено, что кэп-связывающий комплекс на 5′-конце РНК способствует сплайсингу интрона 1 транскриптов E6E7 HPV16, но усиленное кэпом сплайсинг интрона 1 может сдерживаться расстоянием между интроном 1 и его 5′-кэпом РНК. [8].В естественных условиях фактор роста эпителия (EGF), по-видимому, регулирует сплайсинг интрона 1 пре-мРНК HPV16 E6E7 посредством активации Erk1 / 2 [14]. Также возможно, что онкогенные ВПЧ сохраняют интрон, используя свои собственные белки для вмешательства в механизм сплайсинга. Открытие того, что E2 и E6 HPV16 являются РНК-связывающими белками и подавляют сплайсинг РНК [15], а вирусный E5 регулирует экспрессию рецептора EGF [16], может помочь нам понять этот поразительный феномен. Однако ни одно из этих исследований не рассматривало, как EGF или вирусные белки ингибируют сборку аппарата сплайсинга РНК на интроне 1.Чтобы ответить на этот вопрос, мы решили охарактеризовать интрон 1 HPV16 и его BPS, который может иметь важное значение для понимания этой сложной регуляции сплайсинга РНК E6E7.

В этом отчете мы тщательно охарактеризовали интрон 1 пре-мРНК E6E7 HPV16 и идентифицировали два новых 5′-сайта сплайсинга (5′-ss) и функциональный BPS, который контролирует выбор интрона 1 nt 409 3′-ss для продукции E6 * I. Наши данные показывают, что сплайсинг интрона 1 HPV16 согласован с простым принципом проксимального отбора по интрону для предпочтительного удаления интрона минимальной длины.

Материалы и методы

Сотовые линии

Клетки CaSki и SiHa представляют собой линии клеток рака шейки матки с интегрированным геномом HPV16. Клеточная линия W12 произошла от поражения CIN I [17], а линии ее субклонов 20861 и 20863 содержат, соответственно, интегрированный и эписомальный геном HPV [18]. Клетки CV-1 почки зеленой обезьяны, клетки остеосаркомы человека U2OS, клетки эмбриональной почки человека HEK293 и клетки колоректальной карциномы человека HCT116 были приобретены в Американской коллекции типовых культур (Манассас, Вирджиния).Клетки 20861 и 20863 выращивали на питающих клетках J2 в присутствии среды F, как описано [18]. Все остальные клеточные линии выращивали при 37 ° C в присутствии 5% CO ₂ в среде Игла, модифицированной Дульбекко (Invitrogen, Carlsbad, CA), за исключением клеток U2OS и HCT116 в среде McCoy 5a (Invitrogen ) с добавлением 10% фетальной бычьей сыворотки (HyClone, Logan, UT), 2 мМ L-глутамина, 100 Ед / мл пенициллина и 100 мкг / мл стрептомицина.

Плазмиды

Плазмида pSB22 была сконструирована для экспрессии ORF HPV16 E6 (нуклеотиды 104–586) с поврежденными 5′-ss нуклеотидами 226 (мутация GU в GG или мутация U228G), управляемая промотором немедленного раннего цитомегаловируса (CMV IE).PSB22 был получен из плазмиды pTMF1 [8] путем замены продукта полимеразной цепной реакции (ПЦР) pTMF1, амплифицированного с набором праймеров oSB76 и oSB77, на вектор pEGFP-C1 (Clontech, Mountain View, CA) на сайтах BamHI и HindIII. . Плазмида pMA16 была сконструирована для экспрессии E6E7 HPV16 из нуклеотидов 81-885 под контролем промотора CMV IE путем вставки продукта ПЦР геномной ДНК HPV16 с использованием набора праймеров oZMZ209 и oZMZ262 в вектор pEGFP-N1 (Clontech) на Asp718 и Сайты XhoI. Серии экспрессионных векторов HPV16 E6E7 (nt 81-880) с мутантным (mt) BPS были сконструированы из pMA16 с помощью мутагенеза на основе ПЦР, как описано [19].К ним относятся pMA5 (mt-1), pMA6 (mt-2), pMA2 (mt-3), pMA3 (mt-4), pMA1 (mt-5), pMA17 (mt-6), pMA18 (mt-7). , pMA19 (mt-12, G328C), pMA26 (mt-8), pMA27 (mt-9), pMA28 (mt-10) и pMA29 (mt-11). См. Подробности в Таблице S1 и Таблице S2 для каждой стратегии конструирования плазмиды и наборов праймеров, используемых для конструирования с помощью основанного на ПЦР мутагенеза с методом перекрывающейся ПЦР [19]. Все экспрессионные векторы wt и mt проверяли секвенированием.

Вестерн-блоттинг

клеток HCT116 трансфицировали pMA16, pMA18, pMA26 или p3xFLAG CMV-14 (Sigma-Aldrich, St. Louis, MO) и были собраны через 48 часов после трансфекции. Затем клеточные лизаты анализировали на экспрессию белка с помощью мышиных моноклональных антител против p53 (DO1) (Merck KGaA, Дармштадт, Германия), мышиных моноклональных антител против HPV16 E7 (ED17) (Santa Cruz Biotechnology, Санта-Крус, Калифорния) и анти- Моноклональное антитело мыши к β-актину (Ac-15) (Santa Cruz Biotechnology).

Вычислительный анализ для 5 ‘, 3’ и BPS

Матричные баллы 5 ‘ss и 3’ ss были рассчитаны с использованием программного обеспечения ESE finder (http: // rulai.cshl.edu/ESE) [20], [21], на основе сходства последовательностей 30 нуклеотидов, окружающих потенциальный сайт сплайсинга, с последовательностью 27 556 конститутивных сайтов сплайсинга в dbCASE (http://rulai.cshl.edu/dbCASE) [ 22]. Согласованное значение (CV) BPS было рассчитано с использованием Human Splice Finder (http://www.umd.be/HSF/) [23], представляя оценку матрицы весовых коэффициентов позиции, основанную на сходстве с экспериментально подтвержденными 14 BPS [23] .

Препараты РНК и обратная транскрипция (RT) -PCR

клеток HEK 293 (8 × 10 ⁵ ) или клеток CV-1 (1.0 × 10 ⁶ ) в чашке диаметром 6 см трансфицировали 2 мкг pSB22 с помощью векторов экспрессии Lipofectamine 2000 (Invitrogen) или HPV16 E6E7 с реагентом для трансфекции LipoD293 (SignaGen, Rockville, MD). Полную РНК через 24 часа после трансфекции экстрагировали с использованием TRIzol (Invitrogen) и обрабатывали ДНКазой I, не содержащей РНКаз, для удаления плазмидной ДНК. Тот же протокол также был использован для получения тотальной РНК из клеток субклона CaSki, SiHa и W12 20861 и 20863. Суммарная РНК из тканей рака шейки матки (Ca) или нормальных (N) тканей, предварительно обработанных ДНКазой I (номер по каталогу: 7277 [Ca 1] , 7992 [N1], 7276-T [Ca 2] и 7276-N [N2]) были приобретены у Ambion (Остин, Техас) или получены в качестве подарков (Ca 3 и Ca 4) от Ян Ли и Син Се из Чжэцзяна. Университет, Китай.Выбранная поли (A) мРНК была получена из общей РНК с использованием набора для очистки мРНК QuickPrep (GE Healthcare, Little Chalfont, UK). Для обнаружения ОТ-ПЦР общую РНК (0,25 мкг) подвергали обратной транскрипции с помощью обратной транскриптазы MultiScribe (Applied Biosystems, Foster City, CA) со случайным гексамером, а затем амплифицировали с помощью AmpliTaq (Applied Biosystems) в присутствии определенного набора праймеров, как описано на каждом рисунке и подробно описано в Таблице S2. Интенсивность сигнала каждого продукта ПЦР количественно оценивали с помощью программного обеспечения Image Lab версии 3.0 (Bio-Rad Laboratories, Геркулес, Калифорния). Все продукты ОТ-ПЦР были подтверждены секвенированием.

In vitro Транскрипция

Шаблоны, используемые для транскрипции пре-мРНК E6E7 HPV16 (нуклеотиды 107–889 или 107–881, присоединенные к сайту связывания U1) были приготовлены из плазмиды pMA16, чтобы иметь 5′-промотор Т7, путем ПЦР-амплификации с использованием набора праймеров oZMZ208 и oZMZ275 (Таблица S2) для матрицы от нуклеотидов 107 до 889 или oZMZ208 и oZMZ276 (Таблица S2) для матрицы от нуклеотидов 107 до нуклеотидов 881 плюс консенсусный сайт связывания U1. Шаблоны пре-мРНК HPV16 (нуклеотиды 107–540) с BPS дикого типа (wt), mt-7 BPS и mt-11 BPS, содержащие 5′-промотор T7 и сайт связывания 3′-U1, были получены с помощью ПЦР-амплификации из pMA16 , pMA18 и pMA29, соответственно, с набором праймеров oZMZ208 и oZMZ221 (таблица S2). Продукты ПЦР (~ 500 нг) затем использовали для транскрипции in vitro с помощью Riboprobe System-T7 (Promega, Fitchburg, WI) в 50 мкл 1 X буфера для транскрипции [10 мМ DTT, 20 ед. Ингибитора РНКазы, 500 мкМ rATP. , 500 мкМ rUTP, 50 мкМ rGTP, 50 мкМ rCTP, 500 мкМ m7G (5 ‘) ppp (5’) (New England Biolabs, Ipswich, MA), 80 мкКи [α- ³² P] rCTP и 80 ед. РНК-полимераза Т7.Транскрипцию in vitro проводили при 37 ° C в течение 2 ч, и матрицу ДНК удаляли с помощью фермента, не содержащего ДНК TURBO (Invitrogen). Продукты транскрипции разделяли в 6% денатурирующем геле PAGE, содержащем 7,5 М мочевины (National Diagnostics, Atlanta, GA), и транскрипты полной длины вырезали и элюировали из геля PAGE, а затем очищали и определяли количественно.

In vitro Анализ сплайсинга РНК

Для анализа in vitro сплайсинга , 4.0 нг [α- ³² P] rCTP-меченой пре-мРНК HPV16 E6E7, транскрибированной in vitro , применяли для in vitro сплайсинга РНК , как описано [24]. ДНК-лестницу длиной 100 пар оснований (Invitrogen), меченную [γ- ³² P] АТФ, использовали в качестве маркера размера.

Истощение U2 из ядерного экстракта HeLa

Олиго-направленное истощение U2 мяРНК ДНК

выполняли, как описано ранее, с некоторыми модификациями [8], [25], [26]. Ядерный экстракт HeLa (8 мкл, 7,5 мкг общего белка / мкл) обрабатывали 1.5 единиц РНКазы H (Promega) в отсутствие или в присутствии 1, 2 или 5 мкМ oMA92 (Таблица S2), олиго ДНК, комплементарной нуклеотидам 22–36 мяРНК U2 человека, в течение 30 мин при 30 ° C до истощить U2 мяРНК в конечном реакционном объеме 20 мкл в присутствии реакционного буфера, содержащего конечную концентрацию 40% ядерного экстракта HeLa, 5,0 мМ HEPES (pH 7,9), 0,6% поливинилового спирта, 0,4 мМ АТФ, 20 мМ креатинфосфата, 3 мМ MgCl2, 0,075 Ед / мкл РНКазы H. Ядерный экстракт с истощением U2 или без него затем проверяли с помощью Нозерн-блоттинга и использовали для анализа защиты от РНКазы H.

Нозерн-блот

Эффективность истощения

U2 ядерным экстрактом HeLa исследовали с помощью Нозерн-блоттинга. Вкратце, тотальную РНК из 8 мкл ядерного экстракта HeLa с истощением U2 или без него экстрагировали фенолом / хлороформом / изоамиловым спиртом, растворяли в 10 мкл загрузочного красителя с формальдегидом NorthernMax (Ambion), денатурировали при 75 ° C в течение 10 минут, растворяли в 6% денатурирующий гель для ПААГ, содержащий 7,5 М мочевины (National Diagnostics), переносили на нейлоновую мембрану с постоянной валютой 400 мА в течение 2 часов.После предгибридизации в течение 1 часа при 42 ° C в буфере для супергибридизации (Sigma) гибридизацию проводили в течение 16 часов при 42 ° C с антисмысловым ДНК-олиго oKY48 для мяРНК U1, oKY50 для мяРНК U2 или oST197 (таблица S2). для мяРНК U6, меченной [γ- ³² P] АТФ. Затем мембрану один раз промыли 2X SSPE (1X SSPE содержит 180 мМ NaCl, 10 мМ NaH ₂ PO ₄ и 1 мМ EDTA, pH 7,7) -0,5% SDS в течение 5 мин при 42 ° C, дважды с помощью 0,2X SSPE-0,1% SDS в течение 30 мин при 42 ° C и экспонирование на экране фосфорно-визуализатора.

Анализ защиты РНКазы H

Четыре нг [α- ³² P] rCTP-меченой пре-мРНК, транскрибированной in vitro , смешивали с 8 мкл (7,5 мкг / мкл) ядерного экстракта HeLa в реакционном объеме 20 мкл в присутствии реакционный буфер, содержащий конечную концентрацию 40% ядерного экстракта HeLa, 5,0 мМ HEPES (pH 7,9), 0,6% поливинилового спирта, 0,4 мМ АТФ, 20 мМ креатинфосфата, 3 мМ MgCl2. После инкубации при 30 ° C в течение 30 минут смесь инкубировали еще 10 минут при 30 ° C в присутствии 500 нМ ДНК олиго oMA64 для BPS дикого типа, oMA76 для mt-11 BPS, oMA60 для mt-7 BPS, или oMA61 (Таблица S2) для PPT, в зависимости от того, какая пре-мРНК, меченная ³² P, была использована.Затем реакцию переваривали при 30 ° C в течение 10 мин, останавливали добавлением 60 мкл раствора протеиназы K (5 мг / мл протеиназы K [Roche Diagnostics], 50 мМ EDTA, 0,5% [W / V] SDS) и инкубируют 20 мин при 75 ° C. Расщепленные продукты экстрагировали фенолом / хлороформом / изоамиловым спиртом и растворяли в 6% денатурирующем геле для ПААГ, содержащем 7,5 М мочевины (National Diagnostics). Затем гель для ПААГ переносили на фильтровальную бумагу 3M и сушили. Радиоактивность расщепленных продуктов регистрировали, подвергая фильтровальную бумагу воздействию люминофорного сита для хранения (Molecular Dynamics).Затем изображение на экране отображалось с помощью PhosphoImager STORM 860 и анализировалось с помощью программного обеспечения ImageQuant (Molecular Dynamics).

Ядерный экстракт

HeLa с истощением U2 также использовали для анализа защиты от РНКазы H. В этом случае к каждой реакции истощения, описанной выше, добавляли меченную ³² P пре-мРНК (4 нг) и соответствующий BPS-специфический ДНК-олиго (oMA64 для wt BPS, oMA76 для mt-11 BPS). Перед расщеплением протеиназой К смесь инкубировали 10 мин при 30 ° C [25].

Результаты

Идентификация двух новых альтернативных 5 ‘в интроне HPV16 1

Для экспрессии полноразмерной ORF E6 из конструкции дефекта сплайсинга, вектор экспрессии E6 (pSB22), несущий мутацию в нуклеотиде 226 5 ‘ss (мутация GU в GG, мутация из U в G в нуклеотиде 228) (рис. 1A) в кодирующей области E6 первоначально использовался для транскрипции полноразмерной, несплицированной кодирующей области E6 в клетках млекопитающих. Неожиданно мы обнаружили, что мутантная РНК была эффективно сплайсирована в клетках CV-1 и менее эффективно в клетках HEK293 (рис. 1B). Клонирование и секвенирование продуктов сплайсинга размером ~ 300 п.н. из мутантной РНК выявило два новых 5′-о-с, nt 221 5′-ss и nt 191 5′-ss, которые были отобраны для сплайсинга мутантной РНК. Исходя из их частоты клонирования, соотношение использования двух альтернативных 5’s составляло ∼4∶1 (нуклеотид 221: нуклеотид 191) (рис.1C – D). Анализ последовательности всех трех 5′-ss показывает, что все они отклоняются от консенсусной 5′-ss, yag / GURAGU млекопитающих, распознаются U1 snRNP, а затем заменяются U5 snRNA и U6 snRNA на двух каталитических стадиях сплайсинга РНК [27] , [28]. Все три 5 ‘нуклеотида 226, 221 и 191 обнаруживают неоптимальное совпадение с сайтом связывания мяРНК U1 (рис. 1E). Есть два нуклеотида в позициях 4 и 5 интрона nt 226 5 ‘ss, которые отсутствуют для спаривания оснований с коровыми нуклеотидами с 5’ конца U1. Точно так же единственный нуклеотид в положении экзона -1 как в 5′-ss нуклеотида 221, так и в нуклеотиде 191, а также дополнительные нуклеотиды в положении 6 в 5′-ss nt 221 и в положении 4 в 5′-ss нуклеотида nt 191 отсутствуют для основания -спаривание с сайтом связывания мяРНК U1 (рис.1E). Используя ESEfinder (http://rulai.cshl.edu/ESE), мы получили матричный балл для каждых 5 с, с порядком силы для баллов 226 (5,682)> 221 (4,338)> 191 (3,853). ) (Таблица S3). Более того, мы обнаружили, что выбор альтернативных 5 ‘ss в nt 221 или nt 191 для сплайсинга с nt 409 3’ ss обеспечивает ORF для новой изоформы E6, и мы назвали ее E6 * V для nt 221 5’ss. usage и E6 * VI для использования nt 191 5 ′ ss (рис. 1F) после имен E6 * I-E6 * IV [7]. Подобно E6 * I и E6 * II, N-концевые половины как E6 * V, так и E6 * VI идентичны N-концу E6, но отличаются от E6 и E6 * I своими C-концами.Могут ли E6 * V и E6 * VI функционировать, как описано для E6 * I [11], [12], еще предстоит исследовать.

Рисунок 1. Идентификация двух новых альтернативных 5 ‘s в интроне 1 HPV16.

(A) Схема альтернативных 5′ s, идентифицированных в этом исследовании с использованием pSB22, вектора экспрессии E6 HPV16, содержащего мутантные 5′-нуклеотиды 226 (GU к GG, U к G в пункте 228). Цифры под пре-мРНК указывают положения нуклеотидов в геноме HPV16. Ящики, экзоны; линии, интроны; пунктирные линии — направления склейки.Стрелки под экзонами — пара праймеров, используемых для ОТ-ПЦР. (B) Результат ОТ-ПЦР альтернативного сплайсинга РНК пре-мРНК E6 в клетках HEK293 или CV1, трансфицированных pSB22. Продукты ОТ-ПЦР размером ~ 300 п.н. очищали в геле и клонировали. (C) Плазмидные ДНК, экстрагированные из пяти бактериальных колоний, переваривали EcoRI и анализировали электрофорезом в агарозном геле, показывая размер вставки. (D) Последовательность хроматограмм, показывающих сплайсинговые соединения колоний 1-4 (нуклеотиды 221/409) и колонии 5 (нуклеотиды 191/409). (E) Иллюстрация спаривания оснований трех альтернативных 5 ‘ss (заштрихованные, в середине) в интроне 1 HPV16 с мяРНК U1, U5 и U6. Последовательности экзонов помечены как -1, -2 и -3 от 5′-конца интрона. Спаривание оснований показано сплошными линиями. Ψ, псевдоуридин; Gm3, 2,2,7-триметилгуанозин. (F) Потенциалы кодирования сплайсированных транскриптов E6E7 с использованием 5 ‘ss nt 221 (E6 * V) или nt 191 (E6 * VI). Аминокислотные остатки, подчеркнутые в E6 * I, E6 * II, E6 * V и E6 * VI, идентичны N-концу E6 wt.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g001

Определение интрона способствует отбору проксимальных 3 ‘s и 5’ ss по сравнению с интроном 1 HPV16 во время вирусной инфекции

Хорошо задокументировано, что пре-мРНК E6E7 HPV16 преимущественно сплайсируется от 5′-ss нуклеотидов 226 к 3′-ss нуклеотида 409 для получения транскрипта E6 * I или к 3′-ss нуклеотида 526 для получения транскрипта E6 * II.Мы и другие также идентифицировали третьи 3 ‘ss на уровне 742 в геноме HPV16 для кодирования слитого белка E6∧E7 [8] — [10]. Однако сравнительный анализ использования 3’-нуклеотидов nt 742 в клеточных линиях рака шейки матки HPV16 ⁺ тщательно не изучался. Данные на рис. 2A – D показывают, что идентифицированные 3 ‘ss nt 742 в качестве альтернативных 3’ ss обнаруживаются в клеточных линиях CaSki, происходящих от рака шейки матки (~ 500 копий генома HPV16), SiHa (1-2 копии генома HPV16). ) и субклонов W12 20861 (~ 30 копий интегрированного генома HPV16) и 20863 (~ 1000 копий эписомального генома HPV16) клеток [18] и принимает 5 ‘ss nt 226 для сплайсинга РНК для кодирования гипотетического слитого белка E6∧E7 [7].РНК, сплайсированная на 3 ‘ss нуклеотида 742 в клетках CaSki и SiHa, может быть обнаружена из тотальной РНК или поли (A) -селектированных препаратов РНК (рис. 2D). По сравнению с двумя другими хорошо описанными 3 ‘ss, нуклеотидом 409 и нуклеотидом 526, 3’ ss nt 742 использовались намного меньше в клетках CaSki (фиг. 2B). Анализ последовательности показал слабый полипиримидиновый тракт (PPT) с вкраплениями G или As и предполагаемый субоптимальный BPS во всех трех 3 ‘s. Используя ESEfinder, мы получили сравнительную силу матрицы баллов для каждых 3 ‘ss порядка 526 3’ ss (9. 130)> nt 409 3 ′ ss (2,563)> nt 742 3 ′ ss (1,624) (таблица S3). Обнаружение того, что nt 409 3 ‘ss имеет более слабую матричную оценку, чем nt 526, было неожиданным, поскольку nt 409 3′ ss предпочтительно выбирается для сплайсинга интрона 1 E6E7 в тканях рака шейки матки и их производных клеточных линиях (рис. 2Б и 3А). Данные показывают, что определение интрона отдает предпочтение проксимальным 3′-ss по сравнению с дистальными 3’-ss в сплайсинге РНК.

Рисунок 2. Использование nt 742 3 ‘ss в нескольких линиях клеток рака шейки матки HPV16 ⁺ .

(A) Схема направлений сплайсинга пре-мРНК E6E7 HPV16 от трех альтернативных 5 ‘s на нуклеотидах 191, 221 и 226 до трех альтернативных 3’ s на нуклеотидах 409, 526 и 742. Числа представляют положения нуклеотидов в HPV16 геном. Стрелки под структурой пре-мРНК E6E7 указывают праймеры, используемые в ОТ-ПЦР на этой и всех других фигурах. Прямоугольники над структурой пре-мРНК E6E7 указывают ORF для E6 и E7. (B) Два препарата общей РНК, экстрагированной из клеток CaSki, анализировали с помощью ОТ-ПЦР с парой праймеров Pr135 и Pr855 (слева). Продукт ОТ-ПЦР длиной 214 п.н. очищали от геля и секвенировали как продукт сплайсинга от нуклеотидов 226 до 742 (справа). (C) Экспрессия E6∧E7 определяется с помощью RT-PCR из линий клеток субклона W12 20861 и 20863, которые несут интегрированный и эписомальный геном HPV16 соответственно. (D) E6∧E7, экспрессируемые в клетках HPV16 ⁺ CaSki и HPV16 ⁺ SiHa, являются полиаденилированными. Тотальную РНК с полиаденилированием (pA) или без него использовали для RT-PCR с указанными праймерами для сплайсинга слева (C и D).

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g002

Определение интрона указывает на то, что спаривание сайтов сплайсинга у эукариот, скорее всего, происходит через интроны таким образом, чтобы способствовать удалению самого маленького сегмента [29] — [31 ] и эффективно использовался минутным вирусом мышей [32]. Чтобы проверить, используются ли вновь идентифицированные 5′-ss в норме во время инфекции HPV16, мы исследовали две пары тотальной РНК из нормальной шейки матки и рака шейки матки с помощью ОТ-ПЦР со специфическим праймером для сплайс-соединений (рис. 2А). Нормальная шейка матки и клетки U2OS, отрицательные по HPV16, служили отрицательным контролем. В соответствии с предыдущими отчетами [8] — [10], [13], данные на фиг. 3A показывают, что как nt 226 5 ‘ss, так и nt 409 3’ ss предпочтительно выбираются по сравнению с другими сайтами сплайсинга при раке шейки матки и его производные клеточные линии для сплайсинга E6 * I (см. результат для набора праймеров Pr135 + Pr855) (верхняя панель, дорожки 1, 5 и 9). Это может быть результатом того, что сплайсинг 15 ‘ss интрона HPV16, по-видимому, происходит по определению интрона, и проксимальный 5’ ss является предпочтительным пересечением интрона.Мы заметили, что транскрипты, полученные в результате использования nt 221 или 191 5 ‘ss, не были обнаружены из-за их меньшего количества в клетках CaSki и SiHa и в тканях рака шейки матки, когда набор праймеров ПЦР (Pr135 и Pr855) происходил из областей выше по течению. и нижний поток сайтов сплайсинга, который избирательно амплифицирует относительно обильный вирусный транскрипт, использовали в анализах RT-PCR (фиг. 2B и 3A).

Рис. 3. Использование альтернативных 5 ‘и 3’ в тканях и клеточных линиях рака шейки матки HPV16 ⁺ .

(A) ОТ-ПЦР для полной РНК из тканей шейки матки и клеток SiHa с указанными парами праймеров (рис. 2A) слева, демонстрируя продукт сплайсинга HPV16 от нуклеотидов 221 5 ‘ss до нуклеотидов 409 3’ ss в HPV16 ⁺ тканей рака шейки матки (Ca) и клеток SiHa. Экспрессия E6∧E7, E6 * I и E6 * II служила положительным контролем. Нормальные ткани шейки матки (N) служили отрицательным контролем. Относительно меньшая или большая полоса в нормальной ткани была неспецифическим ампликоном. (B) Результаты ОТ-ПЦР для общей РНК из клеток HPV16 ⁺ CaSki и клеток U2OS для продукта сплайсинга от нуклеотидов 221 до нуклеотидов 409.ВПЧ-16-отрицательные клетки U2OS служили отрицательным контролем. (C) Результаты RT-PCR общей РНК из тканей рака шейки матки HPV16 ⁺ , клеток CaSki, SiHa и HEK293, демонстрирующие продукт сплайсинга от нуклеотидов 191 до нуклеотидов 409. 5′-праймер сплайсинга 191-409 и его 3′-праймер. Полупраймер, начинающийся с 3 ‘ss нуклеотида 409, использовали в комбинации с 3’-праймером Pr855 для этого сравнения. HPV16-отрицательная РНК HEK293 служила отрицательным контролем. РНК GAPDH служила в качестве контроля загрузки. (D) Титрование относительного использования нуклеотидов 226, 221 и 191 5 ‘ss в тканях рака шейки матки и клетках CaSki с помощью ОТ-ПЦР.КДНК Ca1 и CaSki из панели C были серийно разведены и амплифицированы для продуктов сплайсинга 226∧409, 221∧409 и 191∧409 с каждым соответствующим сплайсинговым соединением 5′-праймера Pr226 / 409, Pr221 / 409 или Pr191 / 409. в комбинации с обычным 3’-праймером Pr562.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g003

Однако, когда в наших анализах ОТ-ПЦР использовался набор праймеров, специфичных для сплайсинговых соединений, из Pr221 / 409 и Pr855, мы могли легко обнаружить и подтвердить путем секвенирования использования 5 ‘ss нуклеотида 221 для сплайсинга бицистронной РНК E6E7 в HPV16-положительных тканях рака шейки матки и клеточных линиях рака шейки матки, клетках SiHa и CaSki (рис. 3А, дорожки 1, 5 и 9; Рис. 3B, дорожка 3; Рис. S1), но не в клетках U2OS (Рис. 3B, дорожка 1) или нормальных тканях, где наблюдалась только очень слабая, неспецифическая полоса меньшего или большего размера (Рис. 3A). Как и ожидалось, сплайсинг РНК от нуклеотидов 226 к нуклеотидам 742 (E6∧E7) был обнаружен в раковых тканях или клетках SiHa с инфекцией HPV16 (рис. 3A, дорожки 1, 5 и 9 на верхней второй панели) с помощью сплайсинга. -специфическая пара праймеров Pr226 / 742 и Pr855 (фиг. 2A). Сплайсинг РНК от нуклеотида 191 до нуклеотида 409 (рис. 3С, дорожки 2, 6 и 7) также был обнаружен в одной из тканей рака шейки матки и в двух протестированных клеточных линиях рака шейки матки, CaSki и SiHa, с помощью ОТ-ПЦР с использованием другого сплайсингового соединения. специфический набор праймеров для Pr191 / 409 и Pr855 (рис.2A) и подтверждено секвенированием (рис. S1), но не его 3′-половинным праймером плюс Pr855 (рис. 3C, дорожки 8-13). Вместе наши данные показывают, что идентифицированные nt 221 5 ‘ss и nt 191 5’ ss не являются критическими и обычно используются во время инфекции HPV16. Чтобы определить относительный уровень использования каждых 5 ‘ss при сплайсинге интрона 1 HPV16 E6E7 при раке шейки матки и производных от него клеточных линиях, мы титровали уровень каждого сплайсированного транскрипта путем серийного разбавления в нашей полуколичественной ОТ-ПЦР с каждым стыком сплайсинга. -специфический набор праймеров.Мы обнаружили, что уровень 226-409 транскриптов как в ткани рака шейки матки Ca1, так и в клетках CaSki был в ~ 100 раз выше, чем транскрипты 221-409, или в ~ 1000 раз выше, чем в 191-409 транскриптах (рис. 3D). Таким образом, наши данные ясно показывают, что выбор альтернативных 5’s в интроне 1 HPV16 E6E7 также следует проксимальному правилу, как видно при выборе альтернативных 3’s.

Выбор 3 ‘нуклеотидов nt 409 при сплайсинге интрона 1 HPV16 не определяется определением экзона

Поскольку ORF E1 охватывает весь интрон 2 раннего вирусного транскрипта, сохранение интрона 2 является важным для продукции E1.Наш предыдущий анализ интрона 2 5 ‘ss, nt 880 5’ ss, показал, что два нуклеотида в положениях интрона 4 и 5 для спаривания оснований с шестью коровыми нуклеотидами от 5 ‘конца U1 отсутствуют, что определяет нуклеотид 880 5 ‘ss как слабые 5’ ss [8], предположительно приводящие к удержанию интрона 2. Матричный анализ оценок nt 880 5 ‘ss показал оценку 5,132 (таблица S3), что относительно меньше, чем оценка для nt 226 5’ s (5,682). Предполагалось, что слабая особенность nt 880 5 ‘ss неспособна стимулировать выбор вышестоящих 3’ ss, потому что определение экзона основывается на перекрестных помехах между 3 ‘s и 5’ s по экзону.Экзон слишком большого размера (> 500 нт.) Также предотвращает такие перекрестные помехи и распознавание вышестоящих 3 ‘ss клеточными механизмами [33], [34]. Поскольку пре-мРНК E6E7 HPV16 в первую очередь выбирает интрон 1 н. 409 3 ‘ss для сплайсинга РНК при раке шейки матки и производных от него клеточных линиях, этот отбор 3’ ss делает экзон 2 РНК размером 477 нуклеотидов, что близко к предельному размеру определение экзона [34]. Это наводит на мысль, почему отбор 3 ‘ss нуклеотидов nt 409 для сплайсинга РНК, как показано на фиг. 2B и фиг. 3A, предпочтительно определяется определением интрона, а не определением экзона.Чтобы проверить эту возможность, транскрипты HPV16 E6E7 с нативным (nt 880 5 ‘ss) или консенсусным сайтом связывания U1 были синтезированы с помощью in intro транскрипции и сравнивались для in vitro сплайсинга РНК (рис. S2A и S2B). Мы обнаружили, что РНК с консенсусным сайтом связывания U1 (пре-мРНК 2) эффективно сплайсировалась на 742 3 ‘ss нуклеотида, тогда как РНК с нативным сайтом связывания U1 (nt 880 5′ ss, пре-мРНК 1) не ( Рис. S2C и S2D). Стоит отметить, что первая стадия сплайсинга РНК в 5’-нуклеотиде 226 в пре-мРНК 1 оказалась нормальной из-за продукции промежуточного соединения сплайсинга, содержащего лариатную структуру с медленной миграцией при электрофорезе (рис.S2C, дорожка 4), но его вторая стадия сплайсинга РНК в альтернативных 3 ‘ss была заблокирована неэффективным определением экзона, тем самым предотвращая продукцию полностью сплайсированной РНК (рис. S2C, сравните дорожки 4 и 5). Данные показывают, что слабые 5′-нуклеотидные нуклеотиды 880 в бицистронной РНК Е6Е7 HPV16 наделяют вирус способностью предпочтительно использовать определение интрона, а не определение экзона, для выбора 3’-нуклеотидов 409 в интроне 1 для сплайсинга РНК.

Чтобы дополнительно подтвердить этот вывод, мы исследовали еще три пре-мРНК E6E7, имеющие меньший, но изменчивый размер экзона 2 с сайтом связывания U1, прикрепленным к 3′-концу РНК, или без него, для сплайсинга in vitro (рис. S2E). Мы продемонстрировали, что все протестированные пре-мРНК с небольшим экзоном 2 плюс сайтом связывания U1 были эффективно сплайсированы на 3’ss нуклеотида 409 (рис. S2F, сравните пре-мРНК 4, 6 и 8 с пре-мРНК 3, 5). , и 7). Данные показывают, что естественный размер экзона 2 в пре-мРНК E6E7 HPV16 ограничивает определение экзона, способствуя сплайсингу РНК.

Картирование сайтов ответвлений, контролирующих использование 3 ‘ss nt 409 при сплайсинге интрона 1 HPV16

Далее мы сосредоточились на картировании других важных цис-элементов, включая BPS и PPT, в интроне 1 HPV16, которые регулируют распознавание 3′-ss во время сплайсинга РНК.Как мы описали выше, интрон 5′-ss распознается U1 snRNP, в то время как распознавание 3′-ss зависит от взаимодействия U2 snRNP с BPS посредством спаривания оснований и от ассоциации U2AF65 с PPT непосредственно ниже BPS [35], [35], [ 36]. У млекопитающих PPT обычно имеет размер 12-40 нт. Непосредственно перед 3 ‘ss [37] — [39], а остаток аденозина в BPS на соответствующем расстоянии от 3’s является первичным детерминантом лариатозов. промежуточное образование для второй каталитической стадии сплайсинга РНК [40].Таким образом, выяснение положения BPS, содержащего критический аденозин для соединения с гуанозином на 5′-конце интрона через фосфодиэфирную связь 5′-к-2 ‘в формации лариата, будет определять конкретный размер PPT. Сканируя последовательность непосредственно перед 3 ‘ss нуклеотида 409, мы идентифицировали 21-нуклеотидный богатый пиримидином участок, который перемежается с четырьмя гуанозинами и тремя аденозинами, с последующим запуском последовательности A дальше по течению (фиг. 4A). Мы предположили, что эта последовательность A-прогона от нуклеотидов 375 до 385 может быть предполагаемой областью BPS для сплайсинга 3 ‘ss нуклеотидов 409 (рис.4А). Этот предполагаемый BPS, по-видимому, отклоняется от консенсуса BPS млекопитающих, YNYURAC, в котором 6-й аденозин (подчеркнут) мог быть выпуклым на первой каталитической стадии [41] — [43]. Однако при сравнении с консенсусом BPS млекопитающих, YNYURAC, предполагаемая область BPS показывает только субоптимальное совпадение с консенсусом, с nt 385 A как предполагаемым сайтом ветвления, имеющим наилучшее консенсусное значение (CV) 62 (Таблица S4). Чтобы точно определить сайт разветвления для сплайсинга интрона 1 HPV16, мы первоначально применили Superscript II RT-PCR [19], [44] и методы удлинения праймера [45], два хорошо зарекомендовавших себя метода картирования точек ветвления, но безуспешно.Затем мы ввели серию точечных мутаций в предполагаемую область BPS вектора экспрессии E6E7 HPV16 (фиг. 4B). Мутация G-to-C в положении нуклеотида 328 (рис. 4В) была также сконструирована, поскольку нуклеотид G в нуклеотиде 328 ранее сообщался другой лабораторией как предполагаемый сайт разветвления для сплайсинга 3’ss нуклеотида 409 [46 ]. После трансфекции клеток HEK293 сплайсинг РНК HPV16 E6E7 из каждого вектора экспрессии был профилирован с помощью RT-PCR с использованием пары праймеров Pr106 и Pr855, как показано на фиг.2А. Как и ожидалось, сплайсинг от нуклеотидов 226 до нуклеотидов 409 для получения мРНК E6 * I преобладал над сплайсингом от нуклеотидов 226 до нуклеотидов 526 (рис. 4C и 4D, дорожки 3) в клетках 293, трансфицированных вектором экспрессии HPV16 E6E7, содержащим предполагаемый wt область БПС. Точно так же введение точечных мутаций в предполагаемый BPS в векторах экспрессии mt-1, mt-2, mt-3 и mt-6 не изменило профиль сплайсинга (рис. 4C, дорожки 4-6 и дорожка 9), это указывает на то, что аденозины от нуклеотидов 375 до нуклеотидов 381 в предполагаемой области BPS не функционируют как сайт разветвления.Мы также обнаружили, что мутация G-to-C в положении нуклеотида 328 не оказывает влияния на продукцию E6 * I (фиг. 4C, дорожка 11). Фактически, гуанозин в нуклеотиде 328 лишен расположенного ниже по ходу потока PPT и имеет четыре дополнительных динуклеотида AG перед нуклеотидом 409 3’ss. Таким образом, предлагаемый nt 328G в качестве сайта ветвления [46] не вписывается в модель сканирования сплайсинга за счет распознавания первого динуклеотида AG 3 ‘сайта ветвления [35], [47] — [49]. Наш результат на рис. 4C (дорожка 11) показывает, что nt 328G, о котором сообщалось в другом исследовании [46], не является подлинным сайтом ветвления.Интересно, что мы наблюдали снижение сплайсинга E6 * I в клетках HEK293, трансфицированных вектором экспрессии mt-4, содержащим аденозиновые мутации от нуклеотидов 383 до нуклеотидов 385, где уровень продукции E6 * I снизился до 62% (рис. 4C, дорожка 7. ) от 79% (фиг. 4C, дорожка 3), сопровождаемого небольшим увеличением (с 21% до 38%) несплайсированного E6E7, что указывает на то, что As от нуклеотидов 383 до 385, по-видимому, важны для сращивания нуклеотидов. 409 3 ′ сс. Это стало более очевидным в mt-5, где эти мутации A были объединены с двумя дополнительными мутациями A как на nt 380, так и на nt 381, хотя последние две мутации по отдельности в векторе экспрессии mt-3 не влияли на сплайсинг.Мы обнаружили более чем 50% снижение продукции E6 * I и ~ 3-кратное увеличение несплицированного E6E7 из клеток, трансфицированных mt-5 (фиг. 4C, сравните дорожку 8 с дорожкой 3). Данные подтверждают наличие выбора альтернативных сайтов ветвления в предполагаемом BPS, где AAA от нуклеотидов 383 до 385 может быть основным выбором при сплайсинге E6 * I. Однако, когда эти три аденозина были мутированы, вышестоящие аденозины в nt 380 и nt 381 могли быть активированы как сайт разветвления для сплайсинга E6 * I. Более того, клетки, трансфицированные вектором экспрессии mt-7, который содержит все аденозиновые мутации от нуклеотидов 375 до 385, показали почти отсутствие продукции (только 9%) E6 * I, но 83% несплицированной РНК E6E7 наряду с повышенной продукцией ( 8%) E6 * II (рис.4С, дорожка 10). Эти данные дополнительно указывают на то, что аденозины от нуклеотидов 375 до нуклеотидов 378 могут быть альтернативно использованы в качестве сайта разветвления для сплайсинга E6 * I, когда аденозины от нуклеотидов от 380 до 385 заблокированы.

Рис. 4. Картирование BPS при сплайсинге HPV16 nt 409 3 ‘ss.

(A) Консенсусные элементы сплайсинга (3 ‘ss, BPS, полипиримидиновый тракт [PPT]) в типичном 3’ ss (вверху) и их соответствующие последовательности РНК в нуклеотидах HPV16 409 3 ‘ss (внизу). (B) РНК-последовательности предполагаемого дикого типа (wt) BPS и его производных мутантов (mt 1-11) в конструкциях HPV16 E6E7, используемых в исследовании.Стрелки указывают положение нуклеотидов в геноме HPV16. Неизмененные рибонуклеотиды в каждом мутанте обозначены точками. Мутант G328C BPS, о котором сообщила другая лаборатория [46], был включен в это исследование для проверки. Нуклеотид G в положении nt 328 в геноме HPV16 был заменен на C в мутантной конструкции (mt-12). CV, консенсусное значение предполагаемого BPS [23]. (C и D) Идентификация nt 385A как предпочтительного участка разветвления для сплайсинга 3 ‘ss nt 409. Результаты ОТ-ПЦР были получены с использованием пары праймеров Pr106 и Pr855 (рис.2A) из общей РНК, экстрагированной из клеток HEK293 через 24 часа после трансфекции конструкцией wt или mt, как указано выше в агарозном геле. Вектор pEGFP-N1 служил отрицательным контролем (дорожка 2 как в C, так и в D). M, маркер размера лестничных клеток ДНК из 100 п.н. (полоса 1 как в C, так и в D). Идентичность продуктов ПЦР, полученных из несплайсированных РНК E6E7 и сплайсированных РНК E6 * I и E6 * II, показана справа. Относительные отношения (%) несплайсированных РНК E6E7 (удерживание интрона 1) и сплайсированных РНК E6 * I (нуклеотиды 226–409) и E6 * II (нуклеотиды 226–526) были рассчитаны по интенсивности сигнала каждого продукта и показаны под гелем. .

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g004

Учитывая тот факт, что вектор экспрессии mt-7 был только минимально сплайсирован (рис. 4C, дорожка 10), а mt-6 отличается от mt -7 оставшимися тремя Поскольку неизмененный от нуклеотидов 383 до 385 был сильно сплайсирован (фиг. 4C, полоса 9) в трансфицированных клетках HEK293, мы затем исследовали, какой аденозин от нуклеотидов 383 до 385 предпочтительно выбирается в качестве сайта разветвления для сплайсинга nt 409 3 ′ сс. Для этой цели аденозин от нуклеотидов 383 до 385 был индивидуально восстановлен из mt-7, что привело к созданию трех дополнительных векторов экспрессии mt-8, mt-9 и mt-10, каждый из которых отличается от mt-7 только одним нуклеотид в нуклеотиде 385 (mt-8), 384 (mt-9) или 383 (mt-10) (рис.4Б). Когда эти конструкции сравнивали с векторами экспрессии mt-7, mt-6 и wt в трансфицированных клетках HEK 293 для сплайсинга интрона 1 HPV16, мы обнаружили, что восстановление nt 385A в mt-8 привело к резкому сплайсингу E6 * I. как видно из вектора mt-6 и wt (фиг. 4D, сравните дорожку 6 с дорожками 5, 4 и 3). С другой стороны, восстановление nt 384A (mt-9) или nt 383A (mt-10) привело только к умеренному увеличению сплайсинга E6 * I (рис. 4D, сравните дорожки 7-8 с дорожкой 5). Вместе эти данные показывают, что nt 385A, который является наиболее проксимальным к 3 ‘ss nt 409, является сайтом первичного разветвления.Мы также исследовали вектор экспрессии mt-11 с самой низкой оценкой CV в соответствующей предполагаемой области BPS (фиг. 4B) для сплайсинга E6 * I. Мы продемонстрировали, что эта конструкция экспрессировала очень мало E6 * I, но значительное количество E6 * II (фиг. 4D, дорожка 9), что дополнительно указывает на то, что этот вектор экспрессии с нарушенным BPS имеет неактивные 3’-нуклеотиды nt 409, приводящие к находящиеся ниже по потоку nt 526 3 ‘ss очень активны.

Введение точечных мутаций в картированный BPS в 3’ss нуклеотида 409 ингибирует in vitro РНК-сплайсинг пре-мРНК E6E7 HPV16

Для дальнейшего анализа влияния мутации BPS на сплайсинг интрона 1 HPV16 мы выполнили in vitro анализы сплайсинга . ³² Р-меченные пре-мРНК E6E7 HPV16, несущие BPS wt, mt-7 или mt-11, были синтезированы путем транскрипции in vitro (фиг. 5A). Пре-мРНК, используемые в анализах, имели экзон 2 меньшего размера и были присоединены консенсусными 5′-ss на 3′-конце РНК (см. Рис. S1), чтобы способствовать распознаванию 3′-нуклеотидов 409 [8]. Как показано на фиг. 5B и 5C, пре-мРНК с wt BPS была эффективно сплайсирована (60% на фиг. 5B и 57% на фиг. 5C) через 2 часа в наших условиях сплайсинга и произвела полностью сплайсированный продукт размером ∼263 нтс (см. дорожки 2–5 на рис.5B и 5C). В соответствии с нашими наблюдениями, описанными на рис. 4B-4D, пре-мРНК mt-7 со всеми аденозиновыми мутациями в картированном BPS была плохо сплайсирована in vitro, и большая часть (86%) пре-мРНК mt-7 осталась не сплайсированной на 2 h в наших условиях сращивания (рис. 5B, дорожки 6–9). Сходным образом, пре-мРНК mt-11 с мутациями в картированном BPS также обнаруживает очень слабый сплайсинг РНК, при этом 91% пре-мРНК остаются несплайсированными к 2 часам (рис. 5C, дорожки 6–9). Неожиданно мы постоянно наблюдали одинаковое количество расщепленного экзона 1 размером ∼120 нт на первом этапе сплайсинга РНК среди всех трех протестированных пре-мРНК (wt, mt-7 и mt-11, рис.5B и 5C), подразумевая, что нарушение картированного BPS влияет главным образом на второй этап сплайсинга РНК интрона 1 HPV16 E6E7, как описано для пре-мРНК кроличьего β-глобина [50] и интрона дрожжей [51].

Рисунок 5. Введение точечных мутаций в картированный BPS в интроне 1 HPV16 ингибирует сплайсинг РНК in vitro .

(A) Схема пре-мРНК HPV16, используемая в анализах in vitro сплайсинга . Первый экзон (нуклеотид 107–226) и второй экзон (нуклеотид 409–540), обозначенные белыми и серыми прямоугольниками, соответственно, разделены его нативным интроном 1, содержащим wt, mt-7 или mt-11 BPS.Сайт связывания U1 из 11 нуклеотидов (черный прямоугольник), прикрепленный к каждому 3′-концу РНК, служил в качестве 5′-го энхансера или энхансера сплайсинга, чтобы способствовать сплайсингу РНК in vitro. (B и C) Уменьшение сплайсинга РНК HPV16 in vitro путем введения точечных мутаций в картированный BPS. In vitro анализ сплайсинга РНК проводили с ³² P-меченой пре-мРНК Е6 HPV16 в присутствии ядерного экстракта HeLa при 30 ° C в течение указанного времени реакции сплайсинга (ч). Продукты сплайсинга были разделены в 6% денатурирующем геле для ПААГ, и их идентичность показана справа.Эффективность сращивания (% сращивания) рассчитывалась, как описано [24], для каждого сращенного геля и указана в нижней части геля.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g005

Определение взаимодействия U2 с картированным BPS в 409 3 ‘ss нуклеотидов HPV16 с помощью тестов защиты от РНКазы H

Считается, что ассоциация U2 snRNP с BPS является одним из важных шагов для соединения 5′-ss и выпуклого остатка аденина в BPS посредством фосфодиэфирной связи 5′-к-2 ‘.Чтобы определить взаимодействие U2 snRNP с картированным BPS в интроне 1 HPV16 E6E7, мы затем исследовали это взаимодействие с помощью анализа защиты от РНКазы H. Этот метод основан на каталитической активности РНКазы H по специфическому перевариванию тестируемой РНК на 3’-конце области дуплекса ДНК-РНК, когда олигонуклеотидные пары оснований антисена с оголенной областью РНК [26]. Для этого ³² Р-меченую РНК HPV16 E6 с wt или mt BPS (mt-11) в интроне 1 инкубировали с ядерным экстрактом HeLa с или без истощения U2 при 30 ° C в течение 30 минут в наличие олигонуклеотида антисмысловой ДНК к BPS wt или mt.Затем смеси подвергали расщеплению РНКазой H (фиг. 6A). Истощение U2 из ядерного экстракта HeLa осуществлялось также путем переваривания РНКазой H в присутствии антисмыслового ДНК-олиго к сайту узнавания BPS U2 (рис. 6B) и было эффективным (до 90%) в наших экспериментальных условиях (рис. 6С). Поскольку U2 и другие BPS-связывающие белки в ядерном экстракте конкурируют с антисмысловым ДНК-олигонуклеотидом за сайт связывания в картированном BPS, и, следовательно, связывание этих клеточных факторов с картированным BPS будет препятствовать перевариванию ДНК-олиго-направленной РНКазы H.Напротив, если он свободен от связывания клеточных факторов, картированный BPS может быть доступен для его соответствующего антисмыслового ДНК-олиго и, таким образом, переварен РНКазой H. Впоследствии эффективная ассоциация U2 с картированным BPS дикого типа или его мутантом была оценена путем сравнения РНК. эффективность расщепления олиго-ДНК-направленного переваривания РНКазой Н. Как показано на фиг. 6D и 6E, мы продемонстрировали, что пре-мРНК HPV16 E6E7 в присутствии олигонуклеотида антисмысловой ДНК к картированному BPS демонстрирует меньшее переваривание, чем соответствующая ей РНК с mt-11 BPS в присутствии олигонуклеотида антисмысловой ДНК. к MT BPS (сравните дорожку 3 с полосой 6 на рис.6D и соответствующие им столбцы на фиг. 6E). Этот уровень эффективности переваривания BPS дикого типа был значительно повышен в присутствии обедненного U2 ядерного экстракта HeLa (сравните дорожку 3 с дорожкой 4 на фиг. 6D и их соответствующие столбцы на фиг. 6E). Напротив, пре-мРНК, содержащая mt-11 BPS, показывала не только более высокую эффективность переваривания в тех же условиях переваривания РНКазой H, но и не коррелировала с истощением U2 (фиг. 6E). Эти данные ясно показывают, что картированный BPS способствует связыванию U2.

Рисунок 6. Расщепление РНКазой H для количественной оценки ассоциации U2 snRNP с wt или mt-11 BPS в интроне 1 HPV16.

(A) Блок-схема анализа защиты от РНКазы H. ³² Р-меченую РНК E6 HPV16 с wt или mt-11 BPS инкубировали с ядерным экстрактом HeLa с или без истощения U2 в присутствии антисмыслового (AS) ДНК-олигонуклеотида к wt или mt-11 BPS и РНКазы H. • Ассоциация мяРНК U2 или других факторов (немеченых овалов) с картированным BPS предотвращает специфический доступ олигонуклеотида антисмысловой ДНК к соответствующей области, тем самым предотвращая расщепление тестируемой пре-мРНК РНКазой Н.В противном случае связывание олигонуклеотида антисмысловой ДНК с картированным BPS будет формировать дуплекс ДНК-РНК и запускать расщепление РНКазой Н. (B) Диаграмма олиго-опосредованного истощения U2 из ядерного экстракта HeLa при расщеплении РНКазой Н. ДНК-олиго (oMA92), антисмысловая к сайту узнавания BPS U2, инкубировали при 30 ° C с ядерным экстрактом HeLa в течение 30 мин, а затем смесь расщепляли РНКазой H при 30 ° C в течение дополнительных 10 мин. (C) Определение эффективности истощения U2 из ядерного экстракта HeLa методом Нозерн-блоттинга.Суммарную РНК из ядерного экстракта HeLa с или без истощения U2 с помощью U2 ДНК-олиго-опосредованного переваривания РНКазой H количественно определяли с помощью Нозерн-блоттинга с ³² P-меченным ДНК-олиго, специфичным для U2 (oKY50). U1 и U6 служили элементами управления загрузкой. Эффективность истощения U2 выражали как отношение (%) расщепленного U2 к остающемуся полноразмерному U2, деленное на общую интенсивность сигнала U2 в каждом условии реакции расщепления РНКазой H. (D и E) Взаимодействие U2 с картированным BPS предотвращает переваривание олигонуклеарной РНКазы H.Ядерные экстракты HeLa с истощением или без U2 (ΔU2) сравнивали на ДНК-олиго-опосредованное РНКазой H расщепление пре-мРНК HPV16 с wt или mt BPS (A). Продукты реакции растворяли в 6% денатурирующем геле для ПААГ. Идентификационные данные продуктов расщепления РНКазой H показаны справа от геля (D). Стрелка слева от геля (D) указывает продукт сплайсинга из пре-мРНК wt в течение 30 мин инкубации расщепления РНКазой H в присутствии ядерного экстракта HeLa. Эффективность расщепления (%) (E) пре-мРНК Е6 HPV16 с wt или mt BPS от ДНК-олиго-опосредованного расщепления РНКазой H в каждой реакции рассчитывалась из четырех независимых экспериментов как сумма интенсивности сигнала всех продуктов расщепления, деленная на сумма интенсивности сигнала как полноразмерной пре-мРНК, так и продуктов расщепления.*, P <0,05 по t-критерию Стьюдента.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g006

Пре-мРНК, содержащая mt-7 BPS, также была протестирована отдельно (рис. S3) и показала увеличение расщепления РНКазы H на ~ 16% по сравнению с пре-мРНК, содержащей mt-7 BPS. -мРНК, содержащая BPS дикого типа (фиг. S3B, сравните дорожку 5 с дорожкой 4), дополнительно подтверждая картированный BPS как предпочтительный сайт связывания для U2. С другой стороны, мы заметили, что PPT РНК wt и mt-7 полностью защищен от расщепления РНКазой H в присутствии олигонуклеотида антисмысловой ДНК в соответствующей области (рис.S3B, дорожки 6-7) и пре-мРНК BPS дикого типа, сплайсированных во время 30-минутной инкубации расщепления РНКазой H (рис. S3, дорожки 2, 4 и 6). Данные предполагают, что введение точечных мутаций в картированный BPS влияет на связывание U2 с BPS, но не U2AF65 [52] — [54] с PPT 3 ‘ss нуклеотидов 409.

Биологическое значение картированного BPS в экспрессии онкогенов E6 и E7

Как мы недавно сообщали, экспрессия E6 и E7 HPV16 регулируется сплайсингом РНК, а вирусный E7 может эффективно экспрессироваться только из сплайсированной РНК E6 * I [13].Учитывая тот факт, что интрон 1 BPS, идентифицированный в этом исследовании, является решающим для сплайсинга E6 * I, мы исследовали, как измененный сплайсинг интрона 1 мутацией BPS влияет на экспрессию вирусных онкогенов. Мы трансфицировали клетки HCT116, несущие wt p53 и wt pRb [55], [56] вектором экспрессии E6E7 pMA16 (wt), pMA18 (mt-7) или pMA26 (mt-8), как показано на фиг. 7A. Пустой вектор использовали в качестве отрицательного контроля для трансфекции. Уровни экспрессии вирусного онкогена исследовали через 48 ч после трансфекции с помощью вестерн-блоттинга.Экспрессию HPV16 E6 измеряли с помощью p53, нижестоящей мишени вирусного E6 [57], из-за отсутствия подходящего антитела для обнаружения E6. Как показано на рис. 7B, мы обнаружили, что экспрессия онкогенов E6 и E7 тесно коррелировала со сплайсингом вирусной РНК, как сообщалось [13]. Пре-мРНК транскрибируется из вектора экспрессии wt pMA16, сплайсированного в соотношении 1-4 (несплайсированный E6E7: сплайсированный E6 * I) (рис. 4C и 4D, дорожки 3), и экспрессирует оба E6, на что указывает снижение уровня p53. (Рис. 7B, сравните дорожку 2 с полосой 1) и E7 (Рис.7Б, переулок 2). Транскрипт mt-7, содержащий mt BPS, полученный из pMA18, показал неэффективный сплайсинг РНК с соотношением несплайсированного E6E7 и сплайсированного E6 * I при 6–9∶1 (рис. 4C, дорожка 10 и рис. 4D, дорожка 5) и экспрессируется очень мало E7 (фиг. 7B, дорожка 3). Этого следовало ожидать, потому что только РНК E6 * I поддерживает эффективную повторную инициацию трансляции сканирующей рибосомы для трансляции E7 [13]. Интересно, что мы обнаружили, что вирусный E6, транслируемый с несплицированной РНК mt-7, имеет четыре аминокислотные замены (аа) от аа 91 до 94 в E6 wt (рис.7C), и этот mt E6 по сравнению с wt E6 показал меньшую активность по разложению p53 в клетках (фиг. 7B, сравните дорожку 3 с дорожкой 1). Пре-мРНК mt-8 транскрибируется из pMA26, имеющего восстановление nt 385A на фоне эффективного сплайсинга mt-7 в соотношении 1-32 (несплайсированный E6E7: сплайсированный E6 * I) (рис. 4D, дорожка 6) и выражен высокий уровень E7 (фиг. 7B, дорожка 4). В совокупности наши результаты ясно указывают на биохимическое и биологическое значение картированного BPS в сплайсинге интрона 1 HPV16 для экспрессии вирусных онкогенов E6 и E7.

Рисунок 7. Биологическое значение картированного BPS в экспрессии онкогенов E6 и E7.

(A) Диаграммы экспрессионных векторов пре-мРНК E6E7 HPV16. Плазмида pMA16 имеет последовательность пре-мРНК E6E7 дикого типа, pMA18 экспрессирует пре-мРНК mt-7 с BPS mt, а pMA26 экспрессирует пре-мРНК mt-8, аналогичную mt-7, за исключением того, что 385A восстанавливается как в wt. См. Профили сплайсинга РНК из каждого вектора на фиг. 4D. (B) Экспрессия вирусного онкобелка E6 и E7 из плазмиды pMA16 (wt), pMA18 (mt-7) и pMA26 (mt-8).Клетки HCT116 анализировали вестерн-блоттингом через 48 часов после трансфекции указанными векторами над гелем на вирусные E7 и p53 (как индикатор вирусной экспрессии E6 и его активности). β-актин служил контролем нагрузки. (C) Аминокислотные остатки в mt-7 E6 отличаются от wt E6 от аминокислотных остатков 91 до 94 положений. Точки, неизмененные остатки аа.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g007

Discussion

Вирусы эволюционно разработали наиболее рентабельный способ максимального использования механизмов хозяина для репликации генома и экспрессии генов.Папилломавирусы адаптировали свой жизненный цикл к дифференцировке кератиноцитов за счет дифференциального использования альтернативных промоторов, сайтов сплайсинга и сигналов поли (A) для вирусной экспрессии ранних и поздних генов [7], [58], [59]. Одной из наиболее сложных особенностей экспрессии генов папилломавируса является альтернативный сплайсинг РНК вирусных бицистронных или полицистронных РНК. В экспрессии позднего гена BPV-1 цис-элементы вирусной РНК участвуют в выборе альтернативных сайтов сплайсинга путем взаимодействия с клеточными факторами сплайсинга, дифференциально экспрессируемыми в кератиноцитах [7].Подобно BPV-1, HPV16 также экспрессирует свои ранние и поздние гены посредством альтернативного сплайсинга РНК, который также регулируется цис-элементами вирусной РНК и факторами клеточного сплайсинга [59]. В этом отчете мы систематически охарактеризовали интрон 1 HPV16 и его цис-элементы, управляющие альтернативным сплайсингом вирусной бицистронной РНК E6E7. Мы идентифицировали две новые 5 ‘ss (nt 221 5’ ss и nt 191 5’ss) и их нормальное использование при раке шейки матки и производных от него клеточных линиях, тем самым выявив наличие трех альтернативных 5 ‘ss в дополнение к трем известным альтернативным 3. ‘Ss в интроне 1 HPV16.Все эти сайты сплайсинга, идентифицированные в интроне 1 HPV16, являются субоптимальными. Наше открытие, что аденозин в положении nt 385 в геноме HPV16 служит основным сайтом ответвления для отбора 3 ‘ss nt 409 для сплайсинга E6 * I и вирусной экспрессии E7, впервые открывает нам путь к пониманию сплайсинга РНК. в регуляции вирусной экспрессии E6 и E7 из области интрона 1. Наиболее важно то, что мы предоставляем доказательства того, что отбор среди трех альтернативных 5′-ов и трех альтернативных 3’-ов интрона 1 HPV16 E6E7 достигается простым принципом близости, при котором предпочтительно иссекается минимальная длина интрона (рис.8).

Рисунок 8. Краткое описание характерных особенностей интрона 1 Е6Е7 HPV16

(A) Предпочтительный выбор проксимального сайта сплайсинга и сайта разветвления при сплайсинге интрона 1 HPV16 E6E7, который содержит три субоптимальных 5 ‘ss (нуклеотиды 191, 221). и 226), три субоптимальных 3 ′ ss (nt 409, 526 и 742) и кластер сайтов ветвления As от nt 383 до nt 385. В этом отношении проксимальный nt 226 5 ′ ss предпочтительно выбирается вместо nt 221. и nt 191 5 ‘ss, проксимальный nt 409 3’ ss эффективно выбирается по nt 526 и nt 742 3 ‘ss, и сайт разветвления A на nt 385 предпочтительно используется по сравнению с nt 384 A или 383 A, чтобы минимизировать энергия сплайсинга и длина иссекающего интрона 1.Предпочтительный выбор альтернативных 5 ‘ss, 3’ ss и сайта ветвления осуществляется по принципу близости и обозначен градуированными серыми стрелками для большего (темно-серый) и меньшего (светло-серого) сплайсинга интрона 1 HPV16 E6E7. (B) Альтернативный сплайсинг интрона 1 Е6 ВПЧ16 приводит к образованию множества видов РНК Е6, обнаруживаемых в тканях рака шейки матки и производных от них клеточных линиях. Пунктирные линии указывают на сплайсированный интрон 1 из каждой изоформы РНК E6E7, а вертикальные линии в белых (экзон 1) и серых прямоугольниках (экзон 2) обозначают сайты сплайсинга.ORF для вариантов сплайсинга вирусных E6 и E7 указаны справа.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.g008

Проксимальное спаривание донорных и акцепторных сайтов известно как проксимальное правило в альтернативном сплайсинге РНК и впервые было сообщено в 1986 году [60]. Хотя множество факторов, включая цис-элементы, расстояние между сайтами сплайсинга и длину интрона, могут быть важны для проксимального правила, остается неизвестным, что вносит основной вклад в принцип и как каждый сайт сплайсинга может быть различен во время предпочтительного отбора.В случае интрона 1 HPV16 три альтернативных 5 ‘ss расположены близко друг к другу, но nt 226 5’ ss предпочтительно выбирается по сравнению с двумя другими, предположительно из-за его относительно более высокого сродства к спариванию оснований с U1, как продемонстрировано ESEfinder. анализ (http://rulai.cshl.edu/ESE). Эффективность спаривания U1 сообщается как критический фактор для выбора проксимальных 5 ‘s, когда конкурирующие 5’ ss разделены <80 нуклеотидами [61], [62]. С другой стороны, выбор альтернативных 3 'ss может быть более сложным и включает интронные и / или экзонные цис-элементы, силу и близость PPT и BPS, а также прочность 3'-конца интрона (YAG) [39]. , [49], [63].Несмотря на то, что ESEfinder демонстрирует меньшую силу, чем nt 526 3 'ss, HPV16 nt 409 3' ss предпочтительно выбирается для вирусного сплайсинга E6E7, скорее всего, из-за присутствия функционального BPS, расположенного на 20 нуклеотидов перед динуклеотидом 3 'AG. . Подтверждая это мнение, мы показали, что на второй этап сплайсинга интрона 1 вируса E6E7, но не на его первый этап сплайсинга, может повлиять мутация A-to-G в положении nt 385 (рис. 5), как описано для других предварительных исследований. -мРНК [50], [51]. Таким образом, наши данные согласуются с наблюдением, что BPS-проксимальный 3 'ss предпочтительно выбирается в результате процесса сканирования с 5' на 3 'путем распознавания первого динуклеотида AG ниже сайта разветвления [35], [47] - [49], [64].

Предыдущее сообщение предположило, что G в nt 328 в интроне 1 HPV16 E6E7 может функционировать как предполагаемый сайт разветвления для сплайсинга nt 409 3’ss [46]. Однако мы обнаружили, что экспрессирующий вектор HPV16 E6E7 с мутацией G-to-C в положении нуклеотида 328 не оказывает влияния на сплайсинг 3′-нуклеотидов нуклеотида 409, указывая на то, что нуклеотид 328G не является функциональным BPS. Вместо этого мы продемонстрировали, что сплайсинг nt 409 3 ‘ss обеспечивается в первую очередь аденозином в положении nt 385. Картированный BPS с выпуклым A в nt 385 для сплайсинга 3 ‘ss nt 409 не является консенсусом для YNYURAC, как это видно во многих эукариотических интронах [65], хотя отображенный nt 385A имеет лучший CV-балл, чем другие аденозины, расположенные непосредственно выше по течению ( Таблица S4).Когда nt 385A был мутирован, в нашем исследовании было замечено только небольшое снижение эффективности сплайсинга nt 409 3 ‘ss. Этот результат был несколько ожидаемым, потому что мутация nt 385A могла активировать использование nt 384A, nt 383A или даже аденозина от nt 375 до 381 в качестве альтернативного сайта ответвления. Раннее исследование β-globin BPS показало, что мутация нормального сайта ветвления A в G или U может приводить к использованию остатка A на один нуклеотид выше нормального сайта ветвления [50]. Обнаружение того, что nt 385 A является основным сайтом ветвления по сравнению с другими аденозинами непосредственно выше по течению, также согласуется с недавним наблюдением, что использование альтернативных сайтов ветвления имеет сильное предпочтение по сравнению с аденозином, находящимся ниже по течению [65].

BPS необходим для спаривания с U2 и важен для второй стадии сплайсинга РНК и выбора первых 3 ‘ss AG ниже по течению от сайта разветвления [35]. Таким образом, картированный BPS был исследован в нашем отчете на предмет его ассоциации с U2 snRNP в ядерном экстракте HeLa с помощью анализа защиты от РНКазы H в присутствии BPS-специфического олигонуклеотида антисмысловой ДНК. Мы продемонстрировали специфическую ассоциацию U2 с картированным BPS, что привело к предотвращению расщепления ДНК олиго-направленной РНКазой H. Об этом свидетельствует наблюдение повышенного переваривания РНКазы H в пре-мРНК E6E7, несущей мутантный BPS (рис.6 и рис. S3). Последнее было дополнительно подтверждено с использованием ядерного экстракта HeLa с дефицитом U2 (рис. 6D и 6E). Однако мы обнаружили, что другие факторы взаимодействуют с картированной областью BPS и могут препятствовать пре-мРНК E6E7 от переваривания РНКазой H (фиг. 6 и фиг. S3). В результате истощение U2 из ядерного экстракта HeLa увеличивало эффективность переваривания пре-мРНК BPS wt только на 13% (рис. 6E) по сравнению с ядерным экстрактом без истощения U2. Это было ожидаемо, поскольку область BPS также является сайтом связывания для нескольких факторов клеточного сплайсинга.Спаривание оснований U2 с BPS — это высокоупорядоченный процесс, включающий несколько последовательных шагов и активное участие этих факторов сплайсинга. Было высказано предположение, что фактор сплайсинга 1 (SF1) первоначально связывает BPS до U2 и взаимодействует с U2AF65, связанным с соседним PPT, чтобы увеличить его сродство связывания [66] — [70]. Впоследствии спаривание оснований U2 с BPS вытесняет SF1 из BPS [71], [72] и следует за счет связывания взаимодействующих с U2AF65, мультисубъединичных комплексов SF3a и SF3b с последовательностями 5 ‘или 3′ BPS в последовательности: независимым образом [73] — [76].Недавнее исследование показало, что SF1 также связывает другие последовательности РНК, не важные для сплайсинга РНК [69]. Тем не менее, идентификация AACAAAC в качестве BPS для отбора 3’-нуклеотидов nt 409 в этом отчете четко проясняет структурную основу экспрессии и регуляции онкогенов Е6 и Е7 HPV16 посредством альтернативного сплайсинга РНК. Что еще более важно, альтернативное использование сайта ответвления и определения интрона, охарактеризованное для сплайсинга интрона 1 HPV16 в этом отчете, по-видимому, является общей чертой вирусов и человека.

Путем введения мутаций в картированную область BPS для предотвращения сплайсинга РНК мы обнаружили, что несвязанная РНК E6E7 из mt-7 кодирует мутантный белок E6, содержащий четыре замены аминокислот (Q91P, Y92S, N93F и K94W). Эти замены аминокислотных остатков в mt-7 E6 были вредны для активности E6 в деградации p53 и предположительно влияют на структуру и / или укладку белка E6 HPV16 [77], [78]. Хотя было обнаружено, что F47 E6 HPV16 является единственным аминокислотным остатком, необходимым для полиубиквитинирования E6 и деградации p53 [77], [79], наши данные ясно показывают, что другие области белка E6, поддерживающие укладку E6 и структуру E6, могут быть также важен для активности E6.

Дополнительная информация

Рисунок S1.

Результаты секвенирования продуктов ОТ-ПЦР, полученных из РНК HPV16, сплайсированной из нуклеотидов 221 или 191 5 ‘ss в нуклеотиды 409 3’ ss. продуктов RT-PCR из общей РНК тканей Ca 1 или клеток CaSki амплифицировали с помощью пары праймеров, специфичных для сплайсинговых соединений, Pr221 / 409 + Pr562 для сплайсинга 221-409 и Pr191 / 409 + Pr562 для сплайсинга 191-409 (рис. 3A – C), а затем очищают в геле для секвенирования с использованием праймера Pr562. Показаны хроматограммы последовательности каждой области сплайсинга, демонстрирующие удельное годовое возрастание каждого праймера сплайсинг-соединения до сплайсинг-соединения сплайсированной РНК.+ dT, тимин, комплементарный аденину, добавленному к 3′-концу во время ПЦР ДНК-полимеразой Taq.

https://doi.org/10.1371/journal.pone.0046412.s001

(TIF)

Рисунок S2.

Определение экзона способствует сплайсингу пре-мРНК HPV16 E6E7 в нуклеотиде 742 3 ‘ ss in vitro . (A) Структуры двух пре-мРНК E6E7 HPV16, используемых в анализе in vitro сплайсинга . Экзоны обозначены белыми или серыми прямоугольниками с нативным 5 ‘ss (пре-мРНК 1) или консенсусным 11 нуклеотидным сайтом связывания U1 (черный прямоугольник, пре-мРНК 2) на 3′-конце РНК.(B) Иллюстрация спаривания оснований каждого 3’-конца РНК (заштрихованный, посередине) с мяРНК U1, U5 и U6, показывающая субоптимальное спаривание оснований пре-мРНК 1 и оптимальное спаривание оснований пре-мРНК 2. Ψ, псевдоуридин; Gm3, 2,2,7-триметилгуанозин. (C) Гель для сплайсинга, демонстрирующий сплайсинг РНК на 742 3’ss. In vitro продукты сплайсинга разделяли в 8% денатурирующем геле для ПААГ. Цифры над гелем для сплайсинга указывают на пре-мРНК, соответствующие панели A и времени реакции сплайсинга (ч). Идентификационные данные сваренных продуктов показаны справа.(D) Полоса с размером, соответствующим продукту сплайсинга от нуклеотидов 226 5 ‘ss до нуклеотидов 742 3’ ss на (C), была очищена от геля и секвенирована, что подтвердило наличие полностью сплайсированного продукта от нуклеотидов 226 до 742. (E ) Структуры других пре-мРНК E6E7 HPV16 с коротким экзоном 2, использованные в анализе in vitro на сплайсинг РНК . Подробности см. В других описаниях в (A). (F) Гель для сплайсинга, демонстрирующий сплайсинг РНК на 3 ‘ss нуклеотида 409, когда пре-мРНК имели короткий экзон, присоединенный сайтом связывания U1.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0046412.s002

(TIF)

Рисунок S3.

Нарушение картированного BPS в узле HPV16 409 3 ‘ ss не влияет на белковые факторы для взаимодействия с PPT. (A) Стратегическая блок-схема анализов защиты от РНКазы H для анализа взаимодействия U2 с картированным BPS и взаимодействия других клеточных белков с PPT. ³² Р-меченую РНК E6 HPV16 с BPS wt или mt-7 инкубировали с ядерным экстрактом HeLa в присутствии олигонуклеотида ДНК AS, комплементарного wt или mt-7 BPS (AS-BPS), или нижестоящего PPT ( AS-PPT) в течение 10 минут с последующим расщеплением РНКазой H.Ассоциация U2 snRNP или других факторов с BPS и U2AF65 с PPT предотвращает опосредованное ДНК олиго-опосредованное расщепление РНКазой H пре-мРНК. (B) Продукты расщепления РНКазой H растворяли в 6% денатурирующем геле для ПААГ, содержащем 7,5 М мочевины. Идентификационные данные продуктов расщепления указаны с правой стороны. Стрелка слева от геля указывает на сплайсированный продукт 226-409 после 30-минутной инкубации с ядерной реакцией HeLa во время переваривания РНКазой Н. Эффективность расщепления (%) рассчитывалась, как описано на фиг. 6Е.

https: // doi.org / 10.1371 / journal.pone.0046412.s003

(TIF)

Благодарности

Благодарим Э.-М. de Villier и Harald zur Hausen за предоставление плазмиды HPV16, Sohrab Bodaghi для конструирования плазмиды pSB22, Xiaohong Wang за предоставление тотальной РНК, экстрагированной из клеток 20861 и 20863, первоначально от Paul Lambert, Yang Li и Xing Xie, для общей РНК ткани рака шейки матки, июнь Чжу и его лабораторию за их критические комментарии в ходе исследования, а также Цзюнь Чжу за критическое прочтение этой рукописи.

Вклад авторов

Эксперимент задумал и спроектировал: ZMZ MA RJ. Проведены эксперименты: MA RJ LZ XL. Проанализированы данные: MA RJ LZ XL ZMZ. Написал статью: МА РЖ ЗМЗ.

Ссылки

1. 1. Бернард Х.Ю., Бурк Р.Д., Чен З., ван Дорслаер К., Хаузен Х. и др. (2010) Классификация папилломавирусов (ПВ) на основе 189 типов ПВ и предложения таксономических поправок. Вирусология 401: 70–79.
2. 2. Howley PM, Lowy DR (2007) Папилломавирусы.В: Knipe DM, Howley PM, Griffin DE, Lamb RA, Martin MA, Roizman B, Straus SE, ред. Области вирусологии. Издание пятое, изд. Филадельфия: Липпинкотт Уильямс и Уилкинс; 2299–2354.
3. 3. Уолбумерс Дж. М., Якобс М. В., Манос М. М., Bosch FX, Куммер Дж. А. и др. (1999) Вирус папилломы человека — необходимая причина инвазивного рака шейки матки во всем мире. Дж. Патол 189: 12–19.
4. 4. Munoz N, Bosch FX, de Sanjose S, Herrero R, Castellsague X и др. (2003) Эпидемиологическая классификация типов вируса папилломы человека, связанных с раком шейки матки.N Engl J Med 348: 518–527.
5. 5. Munoz N, Castellsague X, de Gonzalez AB, Gissmann L (2006) Глава 1: ВПЧ в этиологии рака человека. Вакцина 24 Приложение 3: S3–1 – S310.
6. 6. Durst M, Gissmann L, Ikenberg H, zur HH (1983) ДНК вируса папилломы из карциномы шейки матки и ее распространенность в образцах биопсии рака из разных географических регионов. Proc Natl Acad Sci U S A 80: 3812–3815.
7. 7. Zheng ZM, Baker CC (2006) Структура генома папилломавируса, экспрессия и посттранскрипционная регуляция.Front Biosci 11: 2286–2302.
8. 8. Zheng ZM, Tao M, Yamanegi K, Bodaghi S, Xiao W (2004) Сплайсинг интрона E6E7 вируса папилломы человека 16 кэп-проксимальной части способствует экспрессии E7, но может сдерживаться расстоянием интрона от его 5′-кэпа РНК. J Mol Biol 337: 1091–1108.
9. 9. Ordonez RM, Espinosa AM, Sanchez-Gonzalez DJ, Armendariz-Borunda J, Berumen J (2004) Повышенная онкогенность азиатско-американского вируса папилломы человека 16 связана с нарушенной репрессией E2 транскрипции онкогена E6 / E7.J Gen Virol 85: 1433–1444.
10. 10. Чжао Х, Оберг Д., Раш М., Фэй Дж., Ламбкин Х. и др. (2005) 57-нуклеотидный предшествующий элемент раннего полиаденилирования в вирусе папилломы человека типа 16 взаимодействует с hFip1, CstF-64, hnRNP C1 / C2 и белком, связывающим полипиримидиновый тракт. J Virol 79: 4270–4288.
11. 11. Pim D, Massimi P, Banks L (1997) Альтернативно сплайсированный белок E6 * HPV-18 ингибирует E6-опосредованную деградацию p53 и подавляет рост трансформированных клеток. Онкоген 15: 257–264.
12. 12. Pim D, Banks L (1999) Белок E6 * I HPV-18 модулирует E6-направленную деградацию p53 путем связывания с полноразмерным E6 HPV-18. Онкоген 18: 7403–7408.
13. 13. Tang S, Tao M, McCoy JP Jr, Zheng ZM (2006) Онкопротеин E7 транслируется из сплайсированных транскриптов E6 * I в клеточных линиях рака шейки матки с высоким риском вируса папилломы человека типа 16 или типа 18 посредством повторной инициации трансляции. J Virol 80: 4249–4263.
14. 14. Rosenberger S, De Castro AJ, Langbein L, Steenbergen RD, Rosl F (2010) Альтернативный сплайсинг ранней мРНК E6 / E6 * вируса папилломы человека типа 16 связан с передачей сигналов EGF посредством активации Erk1 / 2.Proc Natl Acad Sci U S A 107: 7006–7011.
15. 15. Bodaghi S, Jia R, Zheng ZM (2009) Вирусы папилломы человека типа 16 E2 и E6 являются РНК-связывающими белками и ингибируют in vitro сплайсинг пре-мРНК с субоптимальными сайтами сплайсинга. Вирусология.
16. 16. Супрынович Ф.А., Кравчик Э., Хеберт Дж.Д., Сударшан С.Р., Симич В. и др. (2010) Онкопротеин E5 вируса папилломы человека 16 типа ингибирует перенос эпидермального фактора роста независимо от закисления эндосом. J Virol 84: 10619–10629.
17. 17. Stanley MA, Browne HM, Appleby M, Minson AC (1989) Свойства неканцерогенных клеточных линий шейных кератиноцитов человека. Int J Cancer 43: 672–676.
18. 18. Jeon S, Allen-Hoffmann BL, Lambert PF (1995) Интеграция вируса папилломы человека типа 16 в геном человека коррелирует с преимуществом избирательного роста клеток. J Virol 69: 2989–2997.
19. 19. Zheng ZM, Reid ES, Baker CC (2000) Использование 3′-сайта сплайсинга 3605, специфичного для поздней стадии бычьего папилломавируса типа 1, модулируется новым экзонным двудольным регулятором, но не интронным пуриновым элементом.J Virol 74: 10612–10622.
20. 20. Смит П.Дж., Чжан С., Ван Дж., Чу С.Л., Чжан М.К. и др. (2006) Матрица повышенной специфичности для прогнозирования SF2 / ASF-специфических энхансеров экзонного сплайсинга. Hum Mol Genet 15: 2490–2508.
21. 21. Cartegni L, Wang J, Zhu Z, Zhang MQ, Krainer AR (2003) ESEfinder: веб-ресурс для выявления энхансеров экзонного сплайсинга. Nucleic Acids Res 31: 3568–3571.
22. 22. Zhang C, Hastings ML, Krainer AR, Zhang MQ (2007) Сайты сплайсинга с двойной специфичностью альтернативно функционируют как 5′- и 3′-сайты сплайсинга.Proc Natl Acad Sci U S A 104: 15028–15033.
23. 23. Desmet FO, Hamroun D, ​​Lalande M, Collod-Beroud G, Claustres M, et al. (2009) Human Splicing Finder: онлайн-биоинформатический инструмент для прогнозирования сигналов сплайсинга. Нуклеиновые кислоты Res 37: e67.
24. 24. Zheng ZM, Baker CC (2000) Параметры, которые влияют на сплайсинг in vitro поздних пре-мРНК вируса папилломы крупного рогатого скота 1 типа. Дж. Вирол Методы 85: 203–214.
25. 25. Yamanegi K, Tang S, Zheng ZM (2005) Связанный с саркомой герпесвирус Капоши K8beta происходит из сплайсированного промежуточного соединения пре-мРНК K8 и противодействует K8alpha (K-bZIP), индуцируя p21 и p53 и блокируя взаимодействие K8alpha-CDK2.J Virol 79: 14207–14221.
26. 26. Lima WF, Crooke ST (1997) Расщепление однонитевой РНК, прилегающей к дуплексным областям РНК-ДНК, с помощью РНКазы h2 Escherichia coli. J Biol Chem 272: 27513–27516.
27. 27. Рид Р. (2000) Механизмы верности в сплайсинге пре-мРНК. Curr Opin Cell Biol 12: 340–345.
28. 28. Ast G (2004) Как эволюционировала альтернативная сварка? Нат Рев Генет 5: 773–782.
29. 29. Romfo CM, Alvarez CJ, van Heeckeren WJ, Webb CJ, Wise JA (2000) Доказательства спаривания сайтов сплайсинга через определение интрона в Schizosaccharomyces pombe.Mol Cell Biol 20: 7955–7970.
30. 30. Шао В., Ким Х.С., Цао И, Сюй Й.З., Query CC (2012) Сеть взаимодействия snRNP U1-U2 во время определения интрона. Mol Cell Biol 32: 470–478.
31. 31. Талерико М., Бергет С.М. (1994) Определение интрона в сплайсинге малых интронов дрозофилы. Mol Cell Biol 14: 3434–3445.
32. 32. Haut DD, Pintel DJ (1998) Определение интрона требуется для удаления мельчайшего вируса из маленького интрона мышей и определения вышележащего экзона.J Virol 72: 1834–1843.
33. 33. Hwang DY, Cohen JB (1996) Спаривание оснований в 5′-сайте сплайсинга с малой ядерной РНК U1 способствует сплайсингу вышестоящего интрона, но может быть необязательным для разрезания нижележащего интрона. Mol Cell Biol 16: 3012–3022.
34. 34. Стернер Д.А., Карло Т., Бергет С.М. (1996) Архитектурные ограничения на расщепленные гены. Proc Natl Acad Sci U S A 93: 15081–15085.
35. 35. Чен С., Андерсон К., Мур М.Дж. (2000) Доказательства линейного поиска в выборе AG бимолекулярного 3′-сайта сплайсинга.Proc Natl Acad Sci U S A 97: 593–598.
36. 36. Query CC, Moore MJ, Sharp PA (1994) Выбор нуклеофила ответвления в сплайсинге пре-мРНК: доказательства модели выпуклого дуплекса. Genes Dev 8: 587–597.
37. 37. Norton PA (1994) Последовательности полипиримидинового тракта направляют выбор альтернативных сайтов ветвления и влияют на связывание с белками. Nucleic Acids Res 22: 3854–3860.
38. 38. Ruskin B, Zamore PD, Green MR (1988) Фактор, U2AF, необходим для связывания U2 snRNP и сборки комплекса сплайсинга.Ячейка 52: 207–219.
39. 39. Zheng ZM (2004) Регулирование альтернативного сплайсинга РНК с помощью определения экзонов и последовательностей экзонов в экспрессии генов вирусов и млекопитающих. J Biomed Sci 11: 278–294.
40. 40. Рид Р., Маниатис Т. (1988) Роль последовательности точки ветвления млекопитающих в сплайсинге пре-мРНК. Genes Dev 2: 1268–1276.
41. 41. Рид Р., Маниатис Т. (1985) Последовательности интронов, участвующие в формировании лариата во время сплайсинга пре-мРНК. Ячейка 41: 95–105.
42. 42. Zhuang YA, Goldstein AM, Weiner AM (1989) UACUAAC является предпочтительным сайтом ветвления для сплайсинга мРНК млекопитающих. Proc Natl Acad Sci U S A 86: 2752–2756.
43. 43. Kol G, Lev-Maor G, Ast G (2005) Сравнительный анализ человека и мыши показывает, что пластичность сайтов ветвления вносит вклад в регуляцию сплайсинга. Hum Mol Genet 14: 1559–1568.
44. 44. Vogel J, Hess WR, Borner T (1997) Точное отображение точек ветвления и количественная оценка промежуточных соединений сращивания.Nucleic Acids Res 25: 2030–2031.
45. 45. Hallegger M, Sobala A, Smith CW (2010) Четыре экзона гена серотонинового рецептора 4 связаны с несколькими удаленными точками ветвления. РНК 16: 839–851.
46. 46. Де ла Роса-Риос М.А., Мартинес-Салазар М., Мартинес-Гарсия М., Гонсалес-Бонилья С., Вильегас-Сепульведа Н. (2006) Интрон 1 ВПЧ 16 имеет субоптимальную точку ветвления на гуанозине. Virus Res 118: 46–54.
47. 47. Chua K, Reed R (2001) Восходящий AG определяет, выбран ли нижний AG во время каталитической стадии II сплайсинга.Mol Cell Biol 21: 1509–1514.
48. 48. Smith CW, Porro EB, Patton JG, Nadal-Ginard B (1989) Сканирование из независимо заданной точки ветвления определяет 3′-сайт сплайсинга интронов млекопитающих. Природа 342: 243–247.
49. 49. Smith CW, Chu TT, Nadal-Ginard B (1993) Сканирование и конкуренция между AG участвуют в выборе сайта 3′-сплайсинга в интронах млекопитающих. Mol Cell Biol 13: 4939–4952.
50. 50. Hornig H, Aebi M, Weissmann C (1986) Влияние мутаций на акцепторном сайте лариатной ветви на сплайсинг пре-мРНК бета-глобина in vitro.Природа 324: 589–591.
51. 51. Fouser LA, Friesen JD (1986) Мутации в интроне дрожжей демонстрируют важность специфических консервативных нуклеотидов для двух стадий сплайсинга ядерной мРНК. Cell 45: 81–93.
52. 52. Абович Н., Ляо XC, Росбаш М. (1994) Дрожжевой белок MUD2: взаимодействие с PRP11 определяет мост между коммитирующими комплексами и добавлением U2 snRNP. Гены Дев 8: 843–854.
53. 53. Zamore PD, Patton JG, Green MR (1992) Клонирование и доменная структура фактора сплайсинга млекопитающих U2AF.Nature 355: 609–614.
54. 54. Singh R, Valcarcel J, Green MR (1995) Различная специфичность связывания и функции белков, связывающих полипиримидиновый тракт высших эукариот. Наука 268: 1173–1176.
55. 55. Kaeser MD, Pebernard S, Iggo RD (2004) Регулирование стабильности и функции p53 в раковых клетках толстой кишки HCT116. J Biol Chem 279: 7598-7605.
56. 56. Ямамото Х., Сох Дж. В., Монден Т., Кляйн М.Г., Чжан Л.М. и др. (1999) Парадоксальное увеличение белка ретинобластомы в колоректальных карциномах может защитить клетки от апоптоза.Clin Cancer Res 5: 1805–1815.
57. 57. Scheffner M, Werness BA, Huibregtse JM, Levine AJ, Howley PM (1990) Онкопротеин E6, кодируемый вирусом папилломы человека 16 и 18 типов, способствует деградации p53. Ячейка 63: 1129–1136.
58. 58. Graham SV (2008) Регуляторные элементы 3 ‘UTR папилломавируса. Front Biosci 13: 5646–5663.
59. 59. Schwartz S (2008) Процессинг РНК HPV-16. Front Biosci 13: 5880–5891.
60. 60. Рид Р., Маниатис Т. (1986) Роль последовательностей экзонов и близости сайтов сплайсинга в выборе сайтов сплайсинга.Ячейка 46: 681–690.
61. 61. Hicks MJ, Mueller WF, Shepard PJ, Hertel KJ (2010) Конкурирующие восходящие 5′-сайты сплайсинга увеличивают скорость проксимального сплайсинга. Mol Cell Biol 30: 1878–1886.
62. 62. Roca X, Sachidanandam R, Krainer AR (2005) Детерминанты присущей силы 5′-сплайсинговых сайтов человека. РНК 11: 683–698.
63. 63. Ladd AN, Cooper TA (2002) Поиск сигналов, которые регулируют альтернативный сплайсинг в постгеномную эру. Genome Biol 3: отзывы 0008.
64. 64. Liu ZR, Laggerbauer B, Luhrmann R, Smith CW (1997) Сшивка U5 snRNP-специфичного белка 116 кДа с шпильками РНК, которые блокируют шаг 2 сплайсинга. РНК 3: 1207–1219.
65. 65. Гао К., Масуда А., Мацуура Т., Оно К. (2008) Консенсусная последовательность точки ветвления человека — yUnAy. Nucleic Acids Res 36: 2257–2267.
66. 66. Берглунд Дж. А., Абович Н., Росбаш М. (1998) Кооперативное взаимодействие между U2AF65 и mBBP / SF1 облегчает распознавание области точки ветвления.Genes Dev 12: 858–867.
67. 67. Kramer A (1992) Очистка фактора сплайсинга SF1, термостабильного белка, который участвует в сборке комплекса предварительного сплайсинга. Mol Cell Biol 12: 4545–4552.
68. 68. Лю З., Луйтен И., Боттомли М.Дж., Мессиас А.С., Хунгнину-Моланго С. и др. (2001) Структурная основа распознавания РНК сайта разветвления интрона фактором сплайсинга 1. Science 294: 1098–1102.
69. 69. Pastuszak AW, Joachimiak MP, Blanchette M, Rio DC, Brenner SE и др.(2011) Модель аффинности SF1 для идентификации последовательностей точек ветвления в интронах человека. Nucleic Acids Res 39: 2344–2356.
70. 70. Peled-Zehavi H, Berglund JA, Rosbash M, Frankel AD (2001) Распознавание последовательностей точки ветвления РНК доменом KH фактора сплайсинга 1 (связывающий белок точки ветвления млекопитающих) в комплексе факторов сплайсинга. Mol Cell Biol 21: 5232–5241.
71. 71. Rino J, Desterro JM, Pacheco TR, Gadella TW Jr, Carmo-Fonseca M (2008) Факторы сплайсинга SF1 и U2AF ассоциируются в экстрасплицеосомных комплексах.Mol Cell Biol 28: 3045–3057.
72. 72. Rutz B, Seraphin B (1999) Временное взаимодействие BBP / ScSF1 и Mud2 с аппаратом сплайсинга влияет на кинетику сборки сплайсосом. РНК 5: 819–831.
73. 73. Brosi R, Hauri HP, Kramer A (1993) Разделение фактора сплайсинга SF3 на два компонента и очистка активности SF3a. J Biol Chem 268: 17640–17646.
74. 74. Corrionero A, Minana B, Valcarcel J (2011) Снижение точности распознавания точки ветвления и альтернативного сплайсинга, индуцированного противоопухолевым препаратом сплайсостатином A.Genes Dev. 25: 445–459.
75. 75. Gozani O, Potashkin J, Reed R (1998) Потенциальная роль взаимодействий U2AF-SAP 155 в рекрутировании U2 snRNP в сайт ответвления. Mol Cell Biol 18: 4752–4760.
76. 76. Gozani O, Feld R, Reed R (1996) Доказательства того, что независимое от последовательности связывание высококонсервативных белков snRNP U2 перед сайтом ветвления необходимо для сборки сплайсосомного комплекса A. Genes Dev. 10: 233–243.
77. 77. Номинал Y, Массон М., Шарбонье С., Заньер К., Ристриани Т. и др.(2006) Структурный и функциональный анализ онкобелка E6: понимание молекулярных путей патогенеза, опосредованного вирусом папилломы человека. Mol Cell 21: 665–678.
78. 78. Zanier K, ould M’hamed ould SA, Boulade-Ladame C, Rybin V, Chappelle A и др. (2012) Анализ структуры раствора онкобелка E6 HPV16 показывает механизм самоассоциации, необходимый для E6-опосредованной деградации p53. Структура 20: 604–617.
79. 79. Ristriani T, Fournane S, Orfanoudakis G, Trave G, Masson M (2009) Мутация с одним кодоном превращает онкопротеин E6 HPV16 в потенциальный супрессор опухоли, который индуцирует p53-зависимое старение HPV-положительных клеток рака шейки матки HeLa.Онкоген 28: 762–772.

Выбор организации

Чтобы получить доступ к услуге UNIGE — Institutional repository, выберите или выполните поиск организации, с которой вы связаны.

Выберите организацию, с которой вы связаны. … EPFL — EPF в ЛозаннеETH ZurichUniversite de LausanneUniversity of FribourgUniversity of ZurichUniversità della Svizzera italianaUniversität BaselUniversität BernUniversität LiechtensteinUniversität LuzernUniversität St.GallenUniversité де GenèveUniversité де NeuchâtelBFH — Berner FachhochschuleFFHS — Fernfachhochschule SchweizFHGR — Fachhochschule GraubündenFHNW — Fachhochschule NordwestschweizHEP Vaud — Эколь pédagogique дю Кантон де VaudHEP-BEJUNE — Haute Ecole Pédagogique BEJUNEHEP-PH FR — Университет педагогического образования FribourgHEP-VS — Эколь pédagogique дю ValaisHES -SO — Haute École Spécialisée де Свисс occidentaleHfH — Interkantonale Hochschule für HeilpädagogikHSLU — Люцерна университет прикладных наук и ArtsHWZ — Hochschule für Wirtschaft ZürichOST — Ostschweizer FachhochschulePH Zug — Pädagogische Hochschule ZugPH Zürich — Pädagogische Hochschule ZürichPHBern — Pädagogische Hochschule BernPHGR — университет педагогического образования GraubündenPHLU — Университет педагогического образования Люцерна PHSG — Pädagogische Hochschule St.GallenPHSZ — Pädagogische Hochschule SchwyzPHTG — Pädagogische Hochschule ThurgauSUPSI — Scuola Universitaria Professionale делла Svizzera ItalianaZHAW — Zürcher Hochschule für Angewandte WissenschaftenZHdK — Zürcher Hochschule дер KünsteCHUV — Клинический центр Университетский vaudoisHUG — Hopitaux Universitaires де GenèveInsel GruppeUniversitätsklinik BalgristUniversitätsspital ZürichCareumCareum BildungszentrumHFTM — höhere Fachschule für Technik Mittellandlibraries.chVHO — Организация виртуального домаZentral- und Hochschulbibliothek LuzernCERNEawagEidg.Hochschule für Sport MagglingenEmpaEuresearch Head OfficeFMI — Институт Фридриха Мишера FTL — Facoltà di Teologia di LuganoIdiap Research InstituteInstitut de hautes études internationales et du développementPMOD / WRC — Обсерватория Федеральная служба образования и обучения персонала Швейцарского университета PSI — Швейцарский институт образования и поддержки университета PSI — Швейцарская федеральная служба образования PSI — Университет Поля ШерерV Швейцарский национальный научный фонд швейцарские университетыSWITCH edu-IDSWITCH StaffUniDistance SuisseWSL — Швейцарский федеральный институт исследований лесов, снега и ландшафта

Помните выбор для этого сеанса веб-браузера.

американских моторов, покинувших СССР и соцлагерь

Когда в середине тридцатых годов главный конструктор ГАЗа Андрей Липгарт прорабатывал варианты модернизации съемок легкового автомобиля ГАЗ М1, лицензионной копии американского Ford, он с трудом угадывал, какого тектонического масштаба будет ступень в его работе. Большинство последствий своего выбора в тридцатые годы он увидит в течение своей жизни. Но многое будет потом.

Chrysler Flathead 6. Двигатель, сыгравший феноменальную роль в истории СССР.На фото одна из моделей Plymouth 1941 года

Эта удивительная история редко известна — в нашей стране она известна по отрывкам, а за ее пределами никого не интересует. Но она, по крайней мере, заслуживает того, чтобы ей сказали.

Появление «Плоскоголовой».

В 1928 году инженеры Chrysler создали и выпустили на рынок автомобильные двигатели нового поколения. Его первенец был четырехцилиндровым, а через четыре года свет увидела и рядная «шестерка». Мотор имел чугунный блок, нижнюю арматуру, цепной привод распредвала, масляный насос, термостат и в целом был достаточно современным по тем временам.За специфическую форму головы (а по сути — крышки, поскольку у нас мотор нижний) мотор получил в США прозвище, с которым ему суждено было остаться навсегда — Flathead, что дословно переводится как «плоская голова», а применительно к двигателю это можно было бы перевести как «тупоголовый» [двигатель]. Четырехцилиндровый вариант получил название Flathead-4, а шестицилиндровый — Flathead-6.

Этому двигателю в США суждено было постичь славную судьбу — если 4-цилиндровая версия стояла в производстве, то только шестицилиндровая ставилась серийно на автомобили до конца 60-х годов, а также на различную спецтехнику и оборудование. промышленное оборудование — еще на десять лет.По сей день к нему продают запчасти, а энтузиасты строят «вокруг него» разные хот-роды и тому подобное. Нас же интересует совсем другая «ветвь» эволюции этого мотора.

Оценивая перспективы замены или модернизации двигателя, А. Липгарт понял, что из старого мотора «эмки» много не выжать — те 10 л.с., которые в итоге можно было получить, подняв мощность с 40 до 50. Ведь силы уже выглядели чудом, они были получены на тогдашнем малотехнологичном промышленном оборудовании и без потери надежности.Но этого было недостаточно.

Липгарт Андрей Александрович

Выход был фактически один — купить мотор за границей и производить в СССР. В те годы такое копирование не считалось чем-то постыдным — гражданам СССР было очевидно, что их страна технически сильно отстает от других развитых стран.

Lipgart не стал исключением и пошел по пути, традиционному для СССР 30-х годов. Найдите подходящий двигатель, купите лицензию, адаптируйте его к суровым советским реалиям и производите, попутно перенимая у иностранцев передовые технологии.Где взять пробу, тоже не возникало — тогда в СССР мейнстримом было сотрудничество с США, и от этого отталкивали, особенно американцев, только что распрощавшихся с «Великой депрессией». , охотно все продал.

Анализируя конструкцию автомобильных двигателей, Липгарт и его подчиненные обратили внимание на автомобиль Dodge D5. Установленный на нем двигатель привлек их внимание сочетанием новизны и мощности с одной стороны, простоты и надежности с другой.Это был Крайслер-Флэтхед-6.

Сегодня в России этот двигатель ошибочно называют «Додж Д5», но это ошибка, именно так называется машина, на которой советские инженеры впервые «подсмотрели» этот двигатель. Самого его так никогда не называли.

В 1937 году Липгарт с группой инженеров отправляется в США. Там наши специалисты изучали двигатель, сам Липгарт принимал активное участие в технологических процессах, используемых для его производства, и сам руководил закупкой необходимого оборудования для производства.

В конце 1938 года на ГАЗе уже были изготовлены первые отечественные двигатели.

Сразу скажу, что мотор глубоко переработан. Таким образом, цепной привод ГРМ был заменен на шестеренчатый, размеры которого не только переведены в миллиметры, но и уменьшены до типоразмеров.

Например, диаметр цилиндра Chrysler был 88,25 мм (3 дюйма), у нашего мотора 88 мм было ровно. И так почти все.

Основным направлением внесения изменений в конструкцию двигателя была его адаптация к советскому топливу, смазочным материалам и более чем низкое качество обслуживания.И получилось «стопроцентно».

Но о качестве не совсем догадывались — сначала оно было неудовлетворительным из-за низкого уровня производственной базы на ГАЗе в частности и в СССР в целом. И 1938, и 1939, и часть 1940 года завод боролся за качество, доведя новый дизайн до готовности к серийному производству. И к середине сороковых все снова наладилось — двигатель наконец заработал как надо. Можно было начать.

В 1940 году было выпущено 128 двигателей.План 1941 года включал тысячи двигателей с перспективой дальнейшего развития.

Серийный двигатель получил название ГАЗ-11. Его было две модификации — с чугунной головкой, степенью сжатия 5,6 и мощностью 76 л.с. при 3400 об / мин, с алюминиевой головкой блока цилиндров, степенью сжатия 6,5 и мощностью 85 л.с. при 3600 об / мин

Первым серийным автомобилем, получившим его, была «Эмка». Под его капот легко пролез более длинный шестицилиндровый двигатель, достаточно лишь слегка «выпуклой» решетки радиатора до моторного отсека.Автомбил получил название ГАЗ 11-73. До войны удалось изготовить несколько сотен таких машин.

ГАЗ М1 со штатным мотором

ГАЗ 11-73 с шестицилиндровым ГАЗ-11 и удлиненным капотом.

Но это серийная машина. В общем, двигатель перспективный, на который просто не «под стать». И на новых армейских грузовиках, вездеходах ГАЗ 33, 62 и 63 (не путать с послевоенными моделями), на бронетранспортерах ЛБ-НАТИ и ДБ-62, которые должны были стать первыми советскими универсальными автомобилями. Полноприводная колесная техника, на газовом пикапе ГАЗ 415 существовали авиационный и корабельный варианты…

Сверху ГАЗ-63 (довоенный), внизу ГАЗ-33. Из-за войны армия не видела отечественных полноприводных грузовиков

Планов было много. Но 22 июня 1941 года все они резко потеряли актуальность.

Двигатель, спасший СССР

Великая Отечественная война прочно ассоциируется в массовом сознании с танками, а последнее — с Т-34 различных модификаций.

Но давайте помнить, что они сражались не в одиночку. Уже в первые недели войны стало ясно, что одних средних и тяжелых танков Красной Армии будет недостаточно, и тогдашние уставы и доктрины прямо предусматривали использование легких танков в большинстве ситуаций.В то же время совершенный и высокотехнологичный легкий Т-50 промышленность произвести не смогла. В этих условиях благотворное решение принял выдающийся инженер, создатель ряда легкой бронетехники Николай Александрович Астров. Он сконструировал простой легкий танк Т-60, который мог быстро пойти в серию на ГАЗ, и который был оснащен … двигателем ГАЗ-11. Вернее, его версия ГАЗ-202, которая отличалась только электрооборудованием. В остальном это был тот же мотор.

Т-60

Сам Астров ранее проектировал легкий танк-амфибию Т-40, которым также оснащался ГАЗ-202! Но Т-40 воевал как минимум весь первый год войны, участвовал в боях за Москву. Часто это были единственные танки, на которые пехота могла положиться. Может, это и были пулеметы, но так лучше, чем есть, к тому же Т-40, прикрытый пехотой и действующий против врага, у которого здесь и сейчас не было противотанковой артиллерии, превратился в «бесконечные размеры». »- как и любой другой танк.И такие случаи были.

Т-60 уже был вооружен автоматической пушкой, и эти орудия могли нанести огромные потери немецкой пехоте. Легкие танки позволили ускорить формирование танковых частей и выковать необходимые кадры для войны … но откуда бы они взялись, если бы не было подходящего двигателя? На танках Astrov был вариант мощностью 76 л.с., с чугунной ГБЦ, не требовавший для своего производства большого количества легких сплавов. Учитывая тот факт, что СССР потерял 70% алюминия (ГОКы остались на территории, оккупированной немцами), и еще нужно было дожить до массовых поставок американского ленд-лиза, это был жизненно важный момент.

Экономия.

Всего в СССР было произведено Х-ЧИСЛО танков Т-960 и 40 Т-5920. Все они были оснащены двигателями ГАЗ-60, очень «тупоголовыми». Так что в мае 202 года стоит отметить добрым словом и Lipgart, и Chrysler. Неизвестно, как бы все пошло, если бы не они …

Впрочем, это было даже не начало …

Т-60 на конвейере стояли недолго. Спустя месяц после контрнаступления под Москвой Астров «подтолкнул» производство более мощной модели — Т-70.Более толстая броня давала больше шансов выжить даже легким танкистам, а 45-мм пушка давала шансы поразить немецкий танк в бою, даже если они были небольшими и с каждым годом уменьшались. Эти доработки легкого танка потребовали нового, более мощного двигателя.

Т-70

Новый мощный двигатель получен путем соединения двух ГАЗ-202 в блок из двух двигателей ГАЗ-203. Двигатели были немного деформированы для повышения надежности, и в сумме агрегат выдал 140 л.с., «две из семидесяти».«Т-70 стал вторым по величине советским танком. Их построили на 8231 машине. И снова стоит вспомнить Chrysler и Lipgart.

Это было уже начало, без сомнения. Но только начало.

Силовой агрегат ГАЗ-203 стал «сердцем» машины, вклад которой в Победу трудно переоценить. Речь идет о САУ Су-76М. В известном смысле эта легендарная САУ стала основным средством огневой поддержки наступающих советских войск. пехоты и внесли значительный вклад в противотанковую оборону.Вот что бы случилось, если бы его не было, даже не хочу представлять. За годы войны было выпущено 14292 САУ.

Sioux 76M

Оценим вклад гусеничных боевых машин с «бывшим американским» «сердцем».

танков Т-40, Т-60 и Т-70, САУ Су-76М — это сумма 29403 танков и САУ. Добавив сюда 70 единиц легких танков Т-80 (столько же было в те годы), мы получим в итоге 29473 танка и САУ. Примерно треть всего произведенного.Но Липгарт мог выбрать мотор, который не подошел бы к бронетранспортеру. А что было бы тогда?

На этом фоне 238 полноприводных вездеходов ГАЗ 61 всех модификаций уже не выглядят, хотя опять же можно пофантазировать на тему, как Жуков застрял в слабой машине не в то время … Но он имел под капотом 85 л.с., в своей вездеходной модификации от съёмок. Не застрял.

Вездеходы семейства ГАЗ 61

Трудно судить, что было бы, если бы в нашей стране не было этого мотора.Видимо, ничего хорошего.

Но война была лишь эпизодом в жизни этого паровоза.

И вот все началось!

После войны СССР оказался в тяжелом положении — страна лежала в руинах, бушевал голод, нарастала военная угроза со стороны США и Запада. И в таких условиях нужно было заниматься восстановлением разрушенного и развитием. В автомобилестроении все было еще жестче — рывок нужно было делать в условиях, когда несколько военных лет и никаких дальнейших работ не было, а личный состав просто погиб на войне.

В этих условиях ГАЗ получил сильную гандикап — у него был двигатель, который сразу можно было использовать на любой перспективной технике.

Сверху вниз: ГАЗ-51, ГАЗ-63 и ГАЗ-63П

Сразу после войны «тупоголовый» был последовательно зарегистрирован на грузовике ГАЗ-51, получив то же имя, что и автомобиль — ГАЗ- 51, на его полноприводной армейской версии ГАЗ-63 и народнохозяйственной версии ГАЗ-63П. Копия кабины (без перьев) со Студебеккера и двигателя Крайслера позволила ГАЗу сэкономить время.И много чего. Правда, двигатель ГАЗ-51 был уже существенно другим двигателем — но в основном остался прежним. Мощность упала незначительно, до 75 л.с.

Любопытно, что ГАЗ разработал вариант такого двигателя с форкамерным зажиганием. Чуть более мощный, но капризный мотор выпускался до конца 70-х годов.

Более того, бывшая американская «шестерка» породила еще одну «ветвь эволюции» великолепного двигателя.

ГАЗ М20 «Победа» был первым советским послевоенным легковым автомобилем, и, с точки зрения дизайна, еще и самым оригинальным.И продукция МЗМА (будущего АЗЛК), и вообще отечественный автопром грешили «копированием», причем зачастую нелегальным. ГАЗ сделал новаторскую машину, не являющуюся копией ничего. Это был большой успех.

А какой там был двигатель? А двигатель там работал «урезанный» на пару цилиндров модификации ГАЗ-11. Меньший рабочий объем и уменьшенная до 50 л.с. мощность. Именно такой двигатель был нужен разрушенной стране, и она его получила. Чуть позже он встанет на следующее поколение легковых армейских внедорожников — ГАЗ-69.И это тоже будет только начало.

ГАЗ-69 и ГАЗ М20 «Победа» с вариантами 4-цилиндрового двигателя

ГАЗ-12, в народе известный как ЗИМ, оказался следующим легковым автомобилем, на котором «тупоголовый» советский » зарегистрирован ». Этот несоветский роскошный автомобиль стоимостью фантастических 45000 рублей стал самым мощным советским легковым автомобилем, теоретически способным стать достоянием рядового гражданина. Ну или редко. Для этого автомобиля ГАЗ «вернул» из небытия алюминиевую ГБЦ и с помощью несложных доработок увеличил мощность до 90 л.с.- очень хороший результат по тем временам. Вскоре производство ЗИМ прекратилось, продажа лимузинов советским гражданам прекратилась, и этот автомобиль на долгое время стал максимально возможным для человека, не чуждого «красивой» жизни.

ГАЗ-12

Правда, практичная, но зачастую лишенная эстетического смысла, советские граждане часто возили картошку и тому подобное на ЗИМах, напрочь убивая роскошный автомобиль и превращая его в рабочую клячу. И, конечно же, мотор позволял делать это без труда.

Но это еще не конец истории, несколько новых эволюционных прорывов назревали в жизни двигателя.

ГАЗ готовился к выпуску нового грузовика, более совершенного, чем ГАЗ-51. И базовым двигателем для него уже выбрана рядная «шестерка». Это был грузовик ГАЗ 52, последняя модификация которого должна была пережить СССР. И те, кто нашел эту машину, легко узнают и мотор, который на ней использовался.

Отгрузка готового ГАЗ-52

Двигатель ГАЗ 52, значительно модернизированный по сравнению с оригинальным ГАЗ-11 и несколько улучшенный по сравнению с ГАЗ-51, стал настоящим долгожителем.Выпускался в номенклатуре запчастей до конца девяностых годов. Его ставили на погрузчики Львовского завода и по сей день не новые львовские погрузчики, используемые в России, в основном оснащаются этим двигателем …

И вот он тоже да.

А что с защитой? Славные традиции защиты Родины на моторах, изобретенных в Америке? Здесь тоже все было в порядке, и дело не только в боевых машинах семейства ГАЗ-63.

Модификации советской «плоской головки» последовательно применялись на БТР-40, БТР-60 и БРДМ, а также на ныне забытой, но когда-то очень важной и востребованной САУ АСУ-57. от Победы и ГАЗ-69. Эти двигатели «пылились» на пыльных дорогах Синая и Галелей в арабо-израильских войнах, возили припасы и солдат по вьетнамской «тропе Хо Ши Мина» во время войны с Америкой, это было на эти двигатели, которыми значительная часть «ограниченного контингента» была направлена ​​в Афганистан.Кубинцы и никарагуанцы воевали и воевали на них.

АСУ-57, БРДМ, БТР-40 и БТР-60П

Но это еще не все.

Из этого двигателя выросла машиностроительная промышленность Китая, Румынии и Северной Кореи. Вариант двигателя М20 производился в Румынии на заводах ARC. Китайцы развили свою промышленность всего двумя типами автомобилей — копией советского ГАЗ 51 и копией советского ЗИС-150. Первый из них нес под капотом детище Chrysler. Эти моторы производились и дорабатывались долгие годы, независимо от прототипа.

В КНДР 4- и 6-цилиндровые потомки газовой версии «Крайслера» до сих пор производятся и десять лет назад являлись базовой моделью местного автопрома.

Северокорейский «Синры» 61НА. По-прежнему в строю. А мотор — понятно чей. Фото 1997 года.

И, конечно, нельзя игнорировать Польшу. Получив возможность выпускать «Победу» под своим названием «Варшава», поляки скопировали двигатель. Но позже они переработали его в … накладные расходы! Новая головка блока позволила увеличить мощность и вместо 50 л.с. при 3600 об / мин С-21 выдавал 70 при 4000.Совсем другое дело, как называется.

Варшава 223

А мотор С-21

«Варшава» прекратили выпускать в 1973 году, но двигатели продолжали устанавливать на знакомые всем, кто помнит СССР, автомобили «Жук» и «Ныса».

Сегодня уже сложно встретить на дороге машину с потомком «тупоголовой» под капотом — и Победа, и ГАЗ-69, и ГАЗ-51, 52, 63 скорее музейные реликвии, чем « рабочие »машины. Но кое-где до сих пор путешествуют и работают даже в России.

Практически не отличить от ГАЗ-52. Но это американский мотор.

А в КНДР потомки этого двигателя, скорее всего, производятся до сих пор, потому что в их армии очень много машин от «Сынри», хотя бы в качестве запчастей, эти двигатели еще надо поставить.

И эта историческая роль двигателя, изобретенного в конце двадцатых годов, не может не вызывать восхищения.

Двигатель V8 — 3D-модели CAD и 2D-чертежи

Эта статья посвящена механическому двигателю.Для движка JavaScript см. Chrome V8. «V8» перенаправляется сюда. Для напитка см. Сок V8.

Двигатель V8 представляет собой восьмицилиндровый двигатель V-конфигурации с цилиндрами, установленными на картере в двух наборах (или рядах) по четыре, причем все восемь поршней приводят в движение общий коленчатый вал. ^[1] Большинство берегов расположены под прямым углом (90 °) друг к другу, некоторые — под более узким углом, чаще всего 45 °, 60 ° и 72 °.

В своей простейшей форме V8 представляет собой два параллельных рядных четырехцилиндровых двигателя с общим коленчатым валом.Однако эта простая конфигурация с плоским или одноплоскостным коленчатым валом имеет те же проблемы вторичного динамического дисбаланса, что и два прямолинейных 4-цилиндрового вала, что приводит к вибрациям при больших перемещениях двигателя. ^[2] С 1920-х годов в большинстве двигателей V8 использовался несколько более сложный коленчатый вал с поперечной плоскостью и тяжелыми противовесами для устранения вибраций. Это приводит к тому, что двигатель работает более плавно, чем V6, но при этом значительно дешевле, чем V12.

В большинстве гоночных двигателей V8 по-прежнему используется одноплоскостной коленчатый вал, поскольку он обеспечивает более быстрое ускорение и более эффективную конструкцию выхлопной системы. ^[3]

История

В 1902 году Леон Левавассер получил патент на легкий, но довольно мощный двигатель V8 с впрыском бензина. Он назвал его «Антуанетта» в честь юной дочери своего финансового покровителя. С 1904 года он установил этот двигатель на ряде спортивных катеров и на ранних самолетах. Пионер авиации Альберто Сантос-Дюмон увидел одну из этих лодок на Лазурном берегу и решил опробовать ее на своем самолете 14-бис конструкции «утка». Его ранняя версия мощностью 24 л.с. (18 кВт) при 1400 об / мин и весом всего 55 кг (121 фунт) была интересной, но оказалась недостаточно мощной.Сантос-Дюмон заказал у Левавассера более крупную и мощную версию. Он изменил его размеры с первоначального хода 80 мм и диаметра ствола 80 мм на ход 105 мм и диаметр цилиндра 110 мм, получив 50 л.с. (37 кВт) при 86 кг (190 фунтов) веса, включая охлаждающую воду. Его удельная мощность не превышалась 25 лет. ^[4] Levavasseur в конечном итоге произвел свою собственную линию самолетов с двигателями V8, названных Antoinette I — VIII. Хьюберт Латам пилотировал «Антуанетту IV» и «Антуанетту VII» с двигателем V8 в июле 1909 года после двух неудачных попыток пересечь Ла-Манш. ^{[5] [6]} Однако в 1910 году Лэтэм использовал VII с таким же двигателем, чтобы стать первым в мире, достигшим высоты 3600 футов. ^[7] Вуазен сконструировал бипланы-толкачи с двигателями «Антуанетта», в частности тот, который впервые успешно пилотировал Генри Фарман в 1908 году.

Конфигурация двигателя V8 стала популярной во Франции с 1904 года и использовалась в ряде авиационных двигателей, представленных Renault и Buchet среди других. Некоторые из этих двигателей в небольших количествах использовались в автомобилях.В 1905 году Даррак построил специальный автомобиль, побивший мировой рекорд скорости. Они придумали два двигателя гоночных автомобилей, построенные на общем картере. и распредвал. Результатом стал чудовищный двигатель рабочим объемом 1551 куб. Дюймов (25 416 куб. См), мощностью 200 л.с. (150 кВт). Виктор Хемери установил этот рекорд 30 декабря 1905 года на скорости 109,65 миль в час (176,46 км / ч). Эта машина существует до сих пор.

Rolls-Royce построил автомобиль V8 объемом 3535 куб.

В 1907 году компания Hewitt Motor Company построила большой пятиместный туристический автомобиль. Он был оснащен мощным двигателем V8, который развивал мощность 50/60 лошадиных сил, имел диаметр цилиндра 4 дюйма (102 мм) и ход поршня 4,5 дюйма (114 мм). Hewitt был первым американским автомобилем, оснащенным двигателем V8. ^[8]

Компания De Dion-Bouton представила автомобильный V8 объемом 7 773 куб. . ^[9]

Один из первых серийных автомобильных двигателей V8 был представлен в США в 1914 году компанией Cadillac, подразделением General Motors, которое за первый год продало 13 000 двигателей с L-образной головкой объемом 5,4 л (330 куб. Дюймов). производства. С тех пор Cadillac в первую очередь выпускает двигатели V8. Oldsmobile, другое подразделение General Motors, представило свой собственный двигатель V8 объемом 4 л (244 куб. Дюймов) в 1916 году. Chevrolet представила двигатель V8 объемом 288 куб. Дюймов (4,7 л) в 1917 году и устанавливался на Chevrolet Series D.В феврале 1915 года швейцарский автомобильный инженер Марк Биркигт сконструировал первый образец знаменитых авиационных двигателей Hispano-Suiza V8 с одним верхним распредвалом, с разным рабочим объемом, с использованием систем двойного зажигания и мощностью от 150 до 300 лошадиных сил, как в прямом, так и в обратном направлении. версии с приводом и выходным валом с редуктором. Почти 50 000 таких двигателей были построены в Испании, Франции, Великобритании, Италии. Компания Wright Aeronautical построила их в Соединенных Штатах во время Первой мировой войны, а французские версии получили почти исключительное использование для питания SPAD S.VII (произведено около 6000) и SPAD S.XIII (произведено около 8500); а также французская и британская версии (как и версия Wolseley Viper HS.8A) для истребителей Royal Aircraft Factory S.E.5 (построено около 5200) и истребителей Sopwith Dolphin (построено почти 2100). H.S. Говорят, что на авиационные двигатели V8 с верхним расположением распредвала с распределительным валом и распределительным механизмом 8-й серии было установлено примерно половину всех самолетов союзников времен Первой мировой войны.

К 1932 году Генри Форд представил один из своих последних великих достижений в области личной инженерии: свой «блочный», или цельный, двигатель V8.Производство было самым большим коммерчески доступным V8 в массы. Предлагаемый в качестве опции к улучшенному 4-цилиндровому двигателю модели «B» в недорогом автомобиле, эта компактная силовая установка V8 с карбюратором с пониженной тягой позволила Ford 1932 года превзойти всех других популярных конкурентов и была задумана на годы впереди своих время. Ford Flathead V8 до сих пор считается одним из первых пионеров двигателей типа «хот-род». ^[10]

Дизайн

Уголки V

Наиболее распространенный угол V для V8 — 90 °.Эта конфигурация отличается широким низким двигателем с оптимальными характеристиками стрельбы и вибрации. Многие конфигурации двигателей V6 и V10 заимствованы из серийных моделей V8, поэтому в них часто используется угол 90 °; однако уравновешивающие валы встроены для уменьшения вибрации и / или более сложных кривошипов для равномерного цикла зажигания. Одним из примеров является Ford / Yamaha V8, используемый в Ford Taurus SHO . Он был основан на Ford Duratec V6 и разделяет угол вертикальной оси 60 ° этого двигателя. Аналогичный двигатель производства Yamaha использовался Volvo Cars в период с 2005 по 2010 год.Эти двигатели были разработаны для установки с поперечным приводом на передние колеса и имеют меньшую ширину, чем обычно, для более эффективного использования пространства. Поскольку они не находятся под идеальным углом 90 ° для V8, они требуют противовращающийся балансирный вал и смещенные разъемные шатуны для полной плавности. ^[11] Кроме того, в современных гонках используются двигатели 72 ° V8. ^[12]

Двигатель Rolls-Royce Meteorite V8 был заимствован от двигателя танка Meteor (сам производился от авиационного двигателя Merlin, поэтому он разделял угол вертикальной оси Merlin 60 °. ^[13] В прошлом компания Electro-Motive производила 8-цилиндровую версию своего тепловозного двигателя модели 567 с углом поворота цилиндров 45 °. Полноприводные гоночные автомобили Miller 1932 года также имели двигатель V8 под углом 45 °. ^[14]

Чрезвычайно узкоугольный двигатель V8 был представлен Lancia в 1922 году, у которого угол между рядами цилиндров составлял всего 14 °. Это привело к созданию двигателя, который был короче, чем у рядного шестицилиндрового двигателя, но намного уже, чем у обычного V8. Он был основан на двигателе Lancia V4, который был почти полностью «квадратным» по длине и ширине своей компоновки.Благодаря своей компактной конструкции и расположенным сверху распределительным валам эти двигатели были легче и мощнее, чем сопоставимые двигатели того времени. ^[15] Хотя Lancia прекратила разработку дизайна V8 во время Второй мировой войны, основная концепция сегодня используется в двигателе Volkswagen VR6.

Коленчатый вал

90-градусный V8 изготавливается с двумя разными типами коленчатого вала: с плоским и с поперечным сечением :

• Плоский коленчатый вал или одноплоскостной коленчатый вал представляет собой оригинальную конструкцию V8, шатунные шейки которого расположены под углом 180 °.Поскольку они всегда перемещают два поршня вместе, вторичная вибрация в два раза сильнее (и вдвое реже), чем в поперечной плоскости, если только не используются уравновешивающие валы, с парой встречного вращения, фланкирующей коленчатый вал поперек оси коленчатого вала. Поскольку он имеет почти идеальный баланс плоскостей, ^[16] он обычно не требует противовесов. Коленчатый вал с меньшей массой и, следовательно, инерцией позволяет быстрее увеличивать и уменьшать обороты, в дополнение к зажиганию LRLRLRLR или RLRLRLRL с обычными общими интервалами между импульсами и для равномерного сгорания, не требуя сложной системы выпуска.Дизайн был популяризирован в современных гонках благодаря Coventry Climax FWMV 1,5 л (92 куб. Дюйма) V8, который превратился из кросс-плоскости в конфигурацию с плоской плоскостью (с более длинными шатунами). Плоские V8 на дорожных автомобилях производятся Ferrari (все модели V8, которые они когда-либо производили, от 308 GT4 1973 года до нового 488), Lotus (Esprit V8), TVR (Speed ​​Eight), Porsche 918 Spyder. , McLaren (MP4-12C), а также Ford (Mustang Shelby GT350). Эта конструкция популярна в гоночных двигателях, самым известным примером является Cosworth DFV. ^[17]
• Крестовина или двухплоскостной коленчатый вал — конфигурация, используемая в большинстве дорожных автомобилей V8. Первый и последний из четырех шатунных штифтов расположены под углом 180 ° друг к другу, как и второй и третий, причем каждая пара под углом 90 ° относительно другой, так что при взгляде с конца коленчатый вал образует крест. Поперечная плоскость имеет вдвое меньшую (и вдвое более частую) вторичную вибрацию, чем плоскость, но требует наличия тяжелых противовесов на коленчатом валу для противодействия раскачивающей вибрации, вызванной дисбалансом плоскости (подробности см. В разделе «Балансировка двигателя»).Благодаря преимуществу вторичной вибрации поперечная плоскость V8 может масштабироваться до больших смещений, не вызывая разрушительной вибрации. Однако использование тяжелых противовесов делает кросс-самолетный V8 малооборотистым двигателем, который не может быстро ускоряться или замедляться по сравнению с горизонтальным самолетом из-за большей вращающейся массы. В то время как срабатывание поперечного V8 равномерно распределено в целом, срабатывания на левом и правом берегах — это LRLLRLRR или RLRRLRLL, что приводит к неравномерному интервалу впускных и выпускных импульсов для каждого ряда.В стандартных автомобилях с выпускными коллекторами, объединяющими четыре выхлопных отверстия в один выход, это приводит к неравномерному наполнению / продувке впускного / выхлопного газа в цилиндрах (что предотвращает равномерное сгорание в цилиндрах), вызывая типичный гул V8 , к которому приходили многие люди. ассоциироваться с американскими двигателями V8. В универсальных гоночных автомобилях это приводит к необходимости соединять выхлопные трубы между двумя рядами, чтобы спроектировать оптимальную выхлопную систему, в результате получаются длинные выхлопные трубы, которые напоминают пучок змей , как в Ford GT40.Эта сложная и обременительная выхлопная система была серьезной проблемой для дизайнеров одноместных гоночных автомобилей, поэтому они, как правило, использовали короткие выхлопные трубы в 1950-х годах или размещали выхлопные отверстия внутри V-образного угла, как на 4,2 л (256 куб. in) Двигатель Ford Indy в Lotus 38.

Кросс-плоскость не была ни очевидной, ни простой в разработке. По этой причине большинство ранних двигателей V8, в том числе от De Dion-Bouton, Peerless и Cadillac, были плоскими. Переход к кросс-плоскости был предложен на автомобильной инженерной конференции в Соединенных Штатах в 1915 году, но потребовалось еще восемь лет, чтобы запустить его в производство.Cadillac и Peerless (которые наняли для этой работы бывшего математика Cadillac) подали заявку на патент на кросс-плоскость одновременно, и они согласились разделить эту идею. Cadillac представил свой V8 с компенсированным коленчатым валом в 1923 году, а в ноябре 1924 года появилась модель Equipoised Eight от Peerless.

Приложение

V8 с крестообразным коленчатым валом (см. Ниже) — обычная конфигурация для больших автомобильных двигателей. Двигатели V8 редко имеют рабочий объем менее 3,0 л (183 куб. Дюймов), а в автомобилях его объем превышает 8.2 л (500 кубических дюймов) в серийных автомобилях, таких как Cadillac Eldorado начала 1970-х годов. В некоторых приложениях, например промышленные и морские двигатели V8, рабочий объем может быть даже больше.

В автомобилях двигатели V8 используются в самых разных легковых и грузовых автомобилях, в основном в более мощных сегментах и ​​типах транспортных средств, таких как американские маслкары, спортивные автомобили, роскошные автомобили, пикапы и внедорожники. Многие производители автомобилей предлагают V8 в качестве опции в автомобилях, которые имеют V6 или рядный шестицилиндровый двигатель в качестве стандартного двигателя, часто считая его символом эксклюзивности и престижа.В некоторых случаях двигатели V6 заимствованы из конструкций V8 путем удаления двух цилиндров при сохранении того же угла V, поэтому их можно собирать на тех же сборочных линиях, что и двигатели V8, и устанавливать в тех же моторных отсеках с небольшими изменениями. В некоторых из них используются смещенные шатуны, приводящие в движение пары шатунов, что обеспечивает регулярную последовательность зажигания.

Традиционный 90-градусный двигатель V8 с большим диаметром цилиндра, который используется во многих американских моделях, как правило, слишком широк и длинен, чтобы поместиться в автомобилях с поперечно расположенным двигателем, переднеприводной компоновкой, поэтому его применение ограничено задним приводом. спортивные автомобили, маслкары, пони-кары, роскошные автомобили и легкие грузовики.Более короткий, а иногда и более узкий двигатель V6 легче разместить в небольших моторных отсеках, но несколько компактных двигателей V8 используются в конфигурациях двигателей с поперечным передним и поперечным приводом в более крупных автомобилях, таких как Cadillac и Volvos. Эти двигатели часто имеют более узкие расстояния между отверстиями цилиндров, более узкие углы рядов цилиндров и другие модификации для уменьшения требований к пространству. ^[18]

В автоспорте двигатели V8 являются обычным явлением и часто используются в двигателях, специально разработанных для гоночных автомобилей во многих различных типах и классах автомобильных гонок, например, в Формуле-1 или в гонках. Американская гоночная лига NASCAR.У них обычно плоские коленчатые валы, поскольку коленчатый вал с перекрестной плоскостью приводит к неравномерному попаданию в выпускные коллекторы, что мешает настройке двигателя, а тяжелые противовесы коленчатого вала могут препятствовать быстрому ускорению двигателя. Однако из-за собственной вибрации, которая характерна для плоских V8, большинство V8 с большим рабочим объемом, даже в автоспорте, являются кросс-плоскостями, в том числе те, что используются в NASCAR и Top Fuel.

Грузовики средней грузоподъемности, как правило, используют конфигурацию с прямой шестеркой, поскольку она проще и удобнее в обслуживании, а также потому, что рядная шестерка — это по своей сути сбалансированная компоновка, которую можно масштабировать до любого необходимого размера.Большие двигатели V8 используются в более крупных линейках грузовиков и промышленного оборудования.

Несмотря на то, что он был первым выбором для авиационных двигателей, двигатель V8 редко используется в современных авиационных двигателях, поскольку обычно тяжелые противовесы коленчатого вала являются помехой. Современные легкие самолеты обычно используют конфигурацию Flat-8, так как она легче и легче охлаждается воздухом. Кроме того, он может изготавливаться в модульной конструкции, разделяя компоненты с двигателями 4-го и 6-го цилиндров. Одним из немногих двигателей V8, использовавшихся для приведения в движение самолетов во время Второй мировой войны, был немецкий перевернутый двигатель V8 с силовой установкой Argus As 10 с воздушным охлаждением.

Автомобиль

Американский

Кадиллак произвел первый американский двигатель V8 в серийном автомобиле, 1914 год L-Head . Это был сложный агрегат с чугунными парными цилиндрами с закрытой головкой, прикрепленными болтами к алюминиевому картеру, и в нем использовался плоский коленчатый вал. В следующем году компания Peerless представила двигатель V8 по лицензии производителя парков развлечений Herschell-Spillman. К 1917 году Chevrolet также разработал двигатель V8, который начал массовое производство.Усовершенствованный по своей конструкции двигатель имел центральный распределительный вал, управляющий вертикальными верхними клапанами в каждом ряду цилиндров. В конструкции двигателя использовался коленчатый вал с противовесом и съемная головка цилиндров с поперечным потоком, объемом 288 куб. Дюймов (4,7 л) и производившей на тот период впечатляющие 55 л.с. (41 кВт; 56 л.с.). ^[19] В основном использовался в Chevrolet Series D.

Cadillac и Peerless снова разошлись на один год (1923 и 1924, соответственно) с появлением коленчатого вала с поперечной плоскостью.В те годы у Lincoln также были автомобили V8, как у Ferro, Northway (поставщик Cadillac), Cole (Индианаполис и Джексон, Миссисипи), Perkins (Детройт), Murray, Vernon и Yale. ^[20] Окленд, подразделение GM, представило двигатель V8 мощностью 85 л.с. (63 кВт) объемом 250 куб. Дюймов (4,1 л) с коленчатым валом 180 ° в 1930–1931 годах. В 1932 году производство марки Oakland было прекращено, и V8 использовался в его сопутствующей марке Pontiac в течение одного года. Pontiac отказался от двигателя V8 в 1933 году и заменил его на более плавный рядный восьмицилиндровый двигатель Silver-Streak.

Ford был первой компанией в мире, которая массово использовала двигатели V8 , что означает производство их в очень больших количествах для использования в серийных автомобилях. Вместо того, чтобы переходить на рядную шестерку, как его конкуренты, когда требовалось нечто большее, чем рядная четверка, Ford разработал простой V8, Flathead 1932 года. Этот двигатель с плоской головкой приводил в действие почти все большие автомобили Ford в течение 1953 года выпуска, и производился примерно до 1970 года лицензиатами Ford по всему миру, а двигатель с клапаном в блоке устанавливался в основном на грузовые автомобили.Бензиновый двигатель для боевой бронированной машины Ford GAA, выпускавшийся с 1940 по 1950 год, объемом 1100 куб. Дюймов (18,0 л), является самым большим на сегодняшний день производимым двигателем V8 и использовался в качестве силового варианта для танка M4 Sherman армии США. во Второй мировой войне.

После Второй мировой войны высокий спрос на более крупные автомобили с символом статуса сделал обычную рядную шестерку менее востребованной. У двигателей Straight-8 есть проблемы с штырем коленчатого вала и требуется более длинный моторный отсек. В новых более широких вариантах кузова V8 уместился бы в том же пространстве, что и рядный шестицилиндровый двигатель.Производители могут упростить производство и предложить более крупные двигатели в качестве дополнительных обновлений базовых моделей.

В 1949 году General Motors (GM) ответила на успех Ford V8, представив Oldsmobile Rocket и Cadillac OHV . В январе 1951 года Studebaker представила свой двигатель V8 с верхним двигателем объемом 232 куб.см (3,8 л) для Commanders и Commander Land Cruisers 1951 года выпуска. Первые серийные версии были установлены в Commanders 1950 модельного года в конце декабря 1950 года. Chrysler представила свой FirePower 331 у.е.в (5.4 л) полукруглый V8 1951 года. В том же году. Buick последовал за ним в 1953 году, в то время как Packard и GM Chevrolet и Pontiac представили свои собственные двигатели V8 в 1955 году. American Motors (AMC) первоначально закупила двигатели V8 у Packard, ^[21] , но разработала свои собственные двигатели меньшего веса, 600 фунтов (272 кг). ), конструкция 1956. ^[22]

Полная история двигателей каждого американского производителя выходит за рамки данной статьи, но размеры двигателей на полноразмерных автомобилях росли на протяжении 1950-х, 1960-х годов и до середины 1970-х годов.Увеличение размеров полноразмерных автомобилей означало, что модели автомобилей меньшего размера были представлены и стали более популярными, в результате к 1960-м годам у Chrysler, Buick, Ford и Chevrolet было два модельных ряда V8 — Ford был единственным автопроизводителем, который попробовал чтобы имитировать Chrysler Hemi V8 в любой манере 1960-х годов, сначала с его полусферической головкой, производной от двигателя Ford FE, и конструкцией клапана 427 SOHC, а затем с конструкцией частично полусферической головки, которая использовалась в двигателе Boss 429 Mustang.

Более крупные двигатели, известные как V8 с большим блоком, использовались в полноразмерных автомобилях и маслкарах.Большие блоки обычно имели смещения более 360 куб. Дюймов (5,9 л). Объем двигателя Big-block достиг своего апогея с 1970 Cadillac Eldorado объемом 500 кубических сантиметров (8,2 л) 500 . В 1970-е годы из-за нефтяного кризиса и постепенного ужесточения стандартов выбросов пострадали двигатели V8 с большим блоком, и в результате их использование в легковых автомобилях сократилось, поскольку производители начали постепенно отказываться от их более эффективных конструкций. Однако в грузовиках и других более крупных транспортных средствах, в первую очередь на рынке Северной Америки, двигатели V8 с большими блоками продолжают использоваться до сегодняшнего дня, хотя некоторые производители, такие как, например, Ford Motor Company, использовали другой подход и разработали двигатели V10 для использования в своих двигателях. грузовые автомобили большой грузоподъемности, такие как грузовые автомобили и фургоны, и / или использованные конструкции на основе небольших блоков как в дизельных двигателях, так и в дизельных двигателях, например.грамм. Powerstroke, а также приложения на бензине для повышения мощности и эффективности. По сей день двигатели V8 с большим блоком обычно используются в самых разных автомобильных гонках, в основном в Северной Америке, и такие двигатели доступны у многих небольших и независимых производителей двигателей.

Меньшие двигатели, известные как V8 с малым блоком, были установлены в моделях автомобилей среднего размера и обычно имели рабочий объем от 270 куб. Дюймов (4,4 л) до 360 куб. Дюймов (5,9 л), хотя некоторые из них были такими же большими, как Ford 402 куб. в (6,6 л) 400 .Существует перекрытие между диапазонами больших и малых блоков, и заводской двигатель объемом от 6,0 до 6,6 л (366 и 403 куб. Дюймов) может принадлежать к любому классу. Двигатели этой общей проектной архитектуры и категории все еще производятся, хотя и значительно усовершенствованы с момента их появления в первой половине 20-го века.

В 1950-х, 1960-х и 1970-х годах каждое подразделение GM имело свои собственные уникальные двигатели, достоинства и архитектура которых были разными. Это позволило каждому подразделению иметь свой собственный уникальный двигатель, но в значительной степени дублировало усилия.Большинство из них, например сравнительно небольшой Buick 215 и знакомый Chevrolet 350 , использовались во многих подразделениях. У Ford и Chrysler было меньше подразделений, и они предпочитали общий дизайн для конкретных брендов. В конце концов GM также начал поэтапный отказ от нескольких двигателей для конкретных подразделений в конце 1970-х годов, но никогда не перешел к единой архитектуре V8.

GM Семейство современных крупноблочных двигателей Chevrolet под названием vortec включает модели 7400 и 8100. В 2011 году GM построила свой 100-миллионный малоблочный двигатель Chevrolet V8, сделав эту общую компоновку двигателя (несмотря на различные модификации и производные, которые он видел на всем протяжении за десятилетия его производства) самый производимый двигатель V8 в мире, а также один из самых коммерчески успешных двигателей за всю историю. ^[23]

Chrysler и GM разработали двигатели V8 с большим рабочим объемом на основе современных небольших блоков V8, таких как Chrysler объемом 6,1 л (372,2 куб. Дюймов) и 6,4 л (390,6 куб. Дюймов) Eagle и Apache Hemis, а также LS7 7,0 L (427,2 куб. Дюймов) версия GM LS и новейшие двигатели LT.

Сегодня профессиональные гоночные двигатели V8 все еще распространены в американских автомобилях. В гусеничных автомобилях обычно используются двигатели размером около 4–7 л (240–430 куб. Дюймов). В двигателях для дрэг-рейсинга Pro-stock и Superstock обычно используется большой блок (400–600 куб. Дюймов (6.6–9,8 л)) Двигатели Chevrolet или Ford Boss, некоторые объемом более 800 куб. Дюймов (13,1 л), и один двигатель Chevrolet с большим блоком объемом 1 005 куб. 2000 л.с. (1491 кВт; 2028 л.с.) и 1500 фунт-футов (2034 Н · м) без наддува на обычном бензиновом насосе. ^{[24] [25]} Драгстеры Top Fuel на нитрометановом топливе для соревнований по дрэг-рейсингу и забавные автомобили профессиональных гоночных классов обычно используют преобразованный из алюминия Chrysler Gen II Hemi.Нагнетатели для двигателей основаны на «нагнетателях», используемых для повышения давления всасываемого газа в больших 2-тактных дизельных двигателях, таких как Detroit Diesel. Существует также Ford 500 кубических сантиметров (8,2 л) Boss Top Fuel / Funny car.

Австралийский

Австралийский двигатель V8 обычно производится в Америке компаниями Ford, Chrysler или General Motors.

Holden small-block V8 был полностью австралийским разработанным и изготовленным чугунным двигателем с верхним расположением толкателя 90 °, мощностью 4 двигателя.2 л (253 CID), 5,0 л (308 CID, позже было уничтожено до 304 CID) и 5,7 л (355 CID — производился Holden Special Vehicles, никогда не производился в качестве «серийного» двигателя). Впервые представленный в 1969 году, прекратив производство в 1999 году, он приводил в движение различные автомобили Holden, включая Kingswood, Monaro, Torana и Commodore, и оказался популярной и успешной силовой установкой в ​​австралийском автоспорте (особенно в автомобилях Touring). Repco также разработала и построила двигатель Repco-Holden Formula 5000 для гонок Formula 5000.Repco использовала отливки блока и головки двигателя Holden 308 V8 в качестве своей основы [9], но в него было внесено множество модификаций, включая впрыск топлива Lucas и систему зажигания Bosch с двумя катушками, а также более 150 специальных компонентов, разработанных Repco.

Британский Leyland small block V8 также был двигателем с верхним расположением тяги, однако он был полностью легкосплавным, как американский Buick / British Rover V8, на котором он был основан. Ход был увеличен, чтобы дать ему емкость 4,4 л (270 куб. Дюймов). Изначально мотор был разработан и установлен на седан Leyland P76.

По состоянию на 2014 год. Этот двигатель представляет собой комбинацию деталей американского производства и частично местного производства. V8, используемый в нынешних Holdens, поставляется GM в Канаде, это модифицированные версии двигателей GM LS-серии.

Когда производство Ford Cleveland V8 для американского рынка прекратилось в начале 1970-х, инструменты были перемещены в Австралию, где австралийское подразделение Ford продолжало производить местную версию 351 вместе с 302 Cleveland.Двигатели австралийского производства также были проданы De Tomaso для использования в Pantera и Longchamps. Производство в Австралии было прекращено в 1982 году, последним Falcon с приводом от Кливленда была линейка XE (1400 с лишним 302 и 409 351).

Британский

Rolls-Royce V-8 был первым британским двигателем V8. Это квадратный двигатель объемом 3,5 л (214 куб. Дюймов) с боковыми клапанами и углом наклона 90 °. Чтобы конкурировать с электромобилями, инженерные приоритеты этого двигателя заключались в том, чтобы бесшумность и изящество превосходили прямую мощность, а дизайн был намеренно поверхностным, чтобы имитировать внешний вид городского кареты.

Более поздним Rolls-Royce V8 был Meteorite, бронированный автомобиль и морской двигатель, созданный на основе танкового двигателя V12 Rolls-Royce Meteor с использованием двух третей цилиндров Meteor, а сам Meteor был разработан на основе авиационного двигателя Merlin.

По состоянию на 2017 год ^{[обновление]} , Aston Martin, Bentley, Jaguar, Land Rover, McLaren и Radical продолжают производство двигателей V8.

Aston Martin

Двигатели V8, которые использовались в Aston Martins с 1969 по 2000 год, были основаны на внутренней конструкции Тадека Марека и использовались во множестве моделей, начиная с DBS V8 1969 года, а затем на Vantage, Virage, Volante. конвертируемые версии среди других.После того, как Vantage был снят с производства в 2000 году, не было моделей V8 до появления в 2005 году ручной сборки Jaguar AJ-V8 с сухим картером объемом 4,3 л (262 куб. Дюйма). Блок, головки, коленчатый вал, шатуны, поршни, распределительные валы, впускной и выпускной коллекторы, система смазки и система управления двигателем — все это уникально для Aston Martin. Он использовался в V8 Vantage. В 2008 году объем был увеличен до 4,7 л (287 куб. Дюймов) за счет использования штампованных гильз цилиндров вместо литых. Aston Martin ранее поставлял свои двигатели, как V8, так и V12, от американского производителя Ford. ^{[26] [27] [28] [29]} В настоящее время Aston Martin получает свой V8 (используемый в новом Vantage, DB11 V8 и DBS Superleggera) у Mercedes-Benz. ^{[30] [31]}

Autovia

Дочерняя компания Riley, Autovia была запущена в 1936 году с 2,9 л (177 куб. Дюймов) V8 под углом 90 °, чтобы конкурировать с Rolls-Royce и Bentley. Двигатель с тройным распределительным валом был разработан на основе пары блоков цилиндров Riley объемом 1,5 литра.

Bentley
См. Rolls-Royce.

Daimler

Эдвард Тернер разработал легкий 2,5 л (153 куб. Дюймов) и высокопроизводительные 4,5 л (275 куб. Дюймов) двигатели Daimler V8 с полукруглой головкой, анонсированные в 1959 г. –1964), а после поглощения Jaguar — в версиях кузова Mk2 Jaguar «Daimler 2.5 L V8» / «Daimler 250» (1962–1969). 4,5 л использовался в Daimler Majestic Major (1959–1968).

Jaguar

Компания Jaguar представила свой первый двигатель V8, AJ-V8, в 1996 году.Он был разработан и обновлен в различных объемах от 3,3 л (201 куб. Дюймов) (продается как 3,2 л) до 5,0 л (305 куб. Дюймов). Он оснащен системой изменения фаз газораспределения и, с недавних пор, прямым впрыском. Двигатели 4,0 л (244 куб. Дюймов), 4,2 л (256 куб. Дюймов) и 5,0 л (305 куб. Дюймов) доступны с опцией наддува для моделей высшего класса.

AJ-V8 был включен в список 10 лучших двигателей Уорда в 2000 году. Он использовался в последних представительских, роскошных и спортивных автомобилях Jaguar, заменив как AJ6, так и V12.AJ-V8 также можно найти в некоторых престижных моделях Ford и Lincoln, а также в Speedback GT и Land Rovers Дэвида Брауна Automotive, в том числе уникальном для Land Rover объемом 4,4 л (269 куб. Дюймов).

Land Rover

В 2006 году компания Land Rover добавила TDV8 в свой список двигателей. Этот дизельный двигатель с двойным турбонаддувом, 90 ° V8 сделан с блоком из чугуна с уплотненным графитом и алюминиевой головкой, которые обеспечивают хорошую прочность, но меньший вес. Первоначальная емкость составляла 3,6 л (220 куб. Дюймов), что давало 472 фут-фунт-силы (640 Н · м) при 2000 об / мин.В 2010 году мощность была увеличена до 4,4 л (269 куб. Дюймов), увеличив крутящий момент до 546 фут-фунт-сила (740 Н · м) при 1500 об / мин. В настоящее время он используется в Range Rover ^[32] и Range Rover Sport. ^{[33] [ не цитируется ]}

Lotus

Двигатель V8 проекта 918, представленный Lotus для S4 Esprit в 1996 году, представлял собой двигатель объемом 3,5 л (214 куб. Дюймов), разработанный Оливером Винтерботтомом, с двумя турбокомпрессорами и полностью алюминиевым корпусом. строительство.

McLaren

В 2010 году McLaren Automotive вместе с Рикардо разработали двигатель M838T с двойным турбонаддувом объемом 3,8 л (232 куб. Дюйма) для использования в суперкарах 12C и более поздних версий 650S. Эволюция M838T с тех пор использовалась в 720S, 570S и Senna (включая его производные с более высокими характеристиками), а также в P1 с электрической трансмиссией.

Radical

Radical Sportscars предлагает автомобиль с двигателем V8, SR8, чей двигатель Powertec RPA основан на двух двигателях Suzuki Hayabusa, соединенных с общим кривошипом, с использованием оригинальных головок и специально разработанного блока.

Riley

Двигатель Riley 8/90 был представлен на автосалоне 1935 года. Это были два двигателя OHV Riley 9, соединенные под углом 90 градусов. ^[34]

Rolls-Royce

Первый двигатель V8 Rolls-Royce дебютировал в 1905 году, но просуществовал недолго. Компания более известна своим двигателем L Series V8, разработка которого началась в 1952 году и запущена в производство в 1959 году, совместными усилиями Rolls-Royce и Bentley под руководством инженера Джека Филлипса. Следуя современной практике проектирования, он имел верхние клапаны (OHV), центральный распределительный вал и клиновидные камеры сгорания.Некоторые из его функций были вдохновлены авиационным двигателем Rolls-Royce Merlin, включая алюминиевый блок с мокрыми гильзами, распределительный вал с зубчатым приводом, (первоначально) внешние свечи зажигания и порты.

Впервые использовался в Rolls Royce Silver Cloud и Bentley S2, но по-прежнему доступен в современных Bentley. Ранние версии имели 6,25 л (381 куб. Дюймов) смещение, которое было увеличено до 6,75 л (412 куб. Дюймов) в 1970-х годах. Турбонаддув в различных моделях Bentley, начиная с 1980-х годов, при этом выходная мощность увеличивалась в несколько этапов.В настоящее время он вырабатывает 530 л.с. (400 кВт) и 1100 Нм (810 ft⋅lb) в Bentley Mulsanne Speed, ^[35] , при этом отвечая стандартам выбросов Euro 6 и LEV II. ^[36] Только в 2007 году были заменены последние компоненты, восходящие к двигателю 1959 года. ^[37]

Rover

Первый набег Rover на производство двигателей V8 был связан с бензиновым или дизельным двигателем Rover Meteorite, который был создан на основе двигателя Rolls-Royce Meteor 60 ° V12, который использовался в британских танках с 1943 года.Метеорит использовался в грузовиках и транспортерах, а также для морского и стационарного использования.

Ровер нуждался в более мощном двигателе к середине 1960-х годов для легковых автомобилей. Управляющий директор Rover во время поездки в Америку, где он увидел образец двигателя Buick Small Block 215 в экспериментальном отделе Mercury Marine, и был впечатлен его легким весом и небольшими размерами по сравнению с его выходной мощностью и потенциалом. ^[38] 3,5-литровый (214 куб. Дюймов) V8 весил всего 12 фунтов (5.На 4 кг) тяжелее и менее чем на 1 дюйм (2,5 см) длиннее, чем 2,0-литровый (122 куб.дюйма) ровер-4. Он отправил алюминиевый двигатель обратно в Великобританию для оценки. Он хорошо работал с большими Rover, будучи значительно короче, легче и мощнее, чем Rover Straight 6, и Rover приобрел права на его производство. Двигатель был представлен в седанах Rover в конце 1960-х годов.

Двигатель продавался таким производителям небольших автомобилей, как Morgan, TVR, Triumph, ^[39] Marcos и MG.Land Rover также использовал V8 с 1970 года, сначала в Range Rover, начиная с 3,5 л (214 куб. Дюймов) в более ранних моделях, в служебном защитнике с 1980 года, а затем в моделях Discovery, где он был увеличен до 3,9 л. (238 куб. Дюймов) и до 4,6 л (281 куб. Дюймов) в моделях 1994–2002 годов.

Производство оригинального Rover V8 было прекращено, но MG Rover решила в 2002 году перепроектировать Rover 75, чтобы установить на него 4,6-литровый (281 куб. Дюйм) Ford Modular V8.

Standard

В октябре 1936 года Standard Motor Company представила модель «Flying V-Eight» с двигателем 2.7-литровый (165 куб. Дюймов) V8 с плоской головкой, развивающий 20 лошадиных сил. Используется во флагманской модели линейки Flying Standard, но покупатели предпочитают более просторную шестицилиндровую модель Flying Twenty, которая стоит меньше, чем Flying V-Eight. Было изготовлено всего 250 двигателей, и к лету 1937 года их производство прекратилось. В 1938 году у Standard все еще оставались некоторые из них для продажи по сниженной цене. ^[40]

Triumph

В 1971 Triumph V8 использовался двигатель Slant 4 в качестве отправной точки.Первоначально он должен был быть оснащен системой впрыска топлива, но из-за нехватки средств у материнской компании Leyland Motors система так и не была доведена до совершенства, и вместо нее использовались сдвоенные карбюраторы. Низкое качество изготовления принесло двигателю плохую репутацию, и 3,0-литровый (183 куб. Дюйм) V8 использовался только в Triumph Stag.

TVR

Специализированная фирма по производству спортивных автомобилей TVR также произвела свой собственный двигатель V8 объемом 4,2 л (256 куб. Дюймов), 350 л.с. (261 кВт) и 4,5 л (275 куб. Дюймов), 440 л.с. (328 кВт) для TVR. Цербера и тосканский гонщик.Разработанный Элом Меллингом, двигатель APJ8, известный как Speed ​​Eight, отличается плоской кривошипом и необычным углом 75 ° V. Двигатель легкий, сухой его вес составляет всего 121 кг.

Китайский

Первый автомобильный завод представил первый двигатель V8 в Азии в 1959 году, который использовался в роскошных автомобилях Hongqi.

Чешский

Tatra использовала свои двигатели V8 с воздушным охлаждением с 1934 года, когда представила Tatra 77 (первый серийный автомобиль с аэродинамической конструкцией). Их кульминацией стал выпуск 2.Агрегат объемом 5 л используется в модельном ряду автомобилей Tatra T603. Самый мощный из них был установлен на гоночном варианте, известном как B-5. Это была версия стандартного двигателя с более высокой степенью сжатия, которая заменила стандартный одиночный карбюратор 2BBL на два блока с нисходящим потоком 4BBL на новом впускном коллекторе. Позднее Tatra выпустила еще один двигатель с воздушным охлаждением, который использовался в Tatra 613, а затем в Tatra 700. Эти двигатели были хорошо известны своей надежностью, хорошим расходом топлива и специфическим звуком.

В Tatra 603 два вентилятора с приводом от двигателя помогают втягивать охлаждающий воздух в моторный отсек — когда автомобиль движется, воздух поступает через воздухозаборники в панелях заднего крыла и выходит через прорези под бампером и рядом с двигателем. сам.В Tatra 613 один большой вентилятор нагнетает свежий холодный воздух в моторный отсек.

Компания Tatra до сих пор использовала двигатели V8 с воздушным охлаждением в своих грузовиках большой грузоподъемности в своих Tatra 815 и других моделях.

Французский

Хотя Франция разработала самые первые двигатели V8, они использовали его для самолетов эпохи пионеров до 1910 года. Французская автомобильная фирма De Dion-Bouton действительно производила двигатель V8 для продажи в автомобиле в 1910 году. автомобили 1920-30-х годов, такие как Delage, Delahaye, Talbot-Lago, Bugatti и Hotchkiss et Cie, использовали цилиндровые двигатели Inline-6 ​​и Inline-8.

В 1934 году Citroën разработал Traction Avant V8 (22CV), но, возможно, из-за банкротства компании в том же году этот двигатель так и не был доведен до производства.

Ford Société Anonyme Française производил автомобили с двигателем V8 (по дизайну США) через свою дочернюю компанию Matford в Страсбурге, Франция, с 1935 по 1954 год. После Второй мировой войны автомобили под маркой Ford . Simca приобрела Ford SAF в 1954 году, включая права на продолжение производства V8, ^[41] в Simca Vedette.Facel, субподрядчик по кузовным работам для Ford SAF, также производил автомобили V8 с двигателями Chrysler с 1954 по 1964 год. ^[42]

После Второй мировой войны Франция ввела очень высокие налоговые сборы за лошадиную силу — владельцы автомобилей с двигателями более 2 литров были подвергнуты финансовым штрафам, поэтому у Франции был очень маленький внутренний рынок для автомобилей с большим двигателем, таких как V8. ^[42]

И Citroën SM, и «PRV» (Peugeot, Renault, Volvo) V6 фактически представляли собой 90-градусные двигатели V8 с двумя снятыми цилиндрами.SM V8 был создан как испытательный стенд для Maserati Quattroporte 1975 года, который так и не вышел в серийное производство из-за банкротства Citroën в 1974 году. Этот автомобиль был полностью разработан и пригоден для использования на дорогах. ^[43] Нефтяной кризис 1973 года сделал французский автомобиль с двигателем V8 еще более трудным для рационализации.

В 1970-е гг. Гордини также разработал 3-литровый двигатель V8 для Alpine A310, но вместо него из соображений стоимости был установлен 4-цилиндровый блок Renault.

Франция в настоящее время не производит автомобили с двигателем V8 для использования на дорогах.

Немецкий

Немецкие компании, которые производили двигатели V8, включают Argus Motoren, Argus As 10, которые производили перевернутый авиадвигатель V8 с воздушным охлаждением с 1928 по 1945 год. Horch представил серию 830 с двигателем V8 в 1933 году как меньшую альтернативу их моделям с рядным 8-цилиндровым двигателем. .

В начале 1960-х годов Mercedes-Benz представил первый послевоенный двигатель V8 от немецко-европейского производителя с их двигателем M100, который сначала использовался в лимузине 600 Pullman, а затем в их седанах высокого класса, таких как 300 ВЫБОР 6.3. Преемники M100, M116 и M117 были доступны в родстерах и купе SL и SLC, а также в четырехдверных седанах S-класса.

Другие фирмы, производящие двигатели V8, включают Volkswagen Group (Audi, Bentley, Bugatti, Lamborghini, MAN, Porsche и Volkswagen), BMW и Stoewer.

Итальянский

Alfa Romeo
Alfa Romeo Montreal был оснащен двигателем с сухим картером 2593 куб.Из-за ограниченного пространства, доступного для коленчатого вала в поперечной плоскости, физически небольшие, но тяжелые противовесы кривошипа были изготовлены из спеченного вольфрамового сплава, называемого турконитом. ^[44] Montreal V8 имел мощность 230 л.с. (170 кВт) на маховике и весил 162 кг (357 фунтов). Также было построено восемнадцать 33 автомобилей Stradale с отстроенным двигателем Tipo 33/2 с плоским кривошипом объемом 1995 куб.см, мощностью 260 л.с. (190 кВт). Кросс-кривошипный двигатель Montreal также использовался в очень ограниченном производстве 22 Alfetta GTV2.6i. Спортивный автомобиль Alfa Romeo 8C Competizione имеет двигатель V8 с коленчатым валом объемом 4691 куб. См (286,3 куб. Дюймов) мощностью 450 л.с. (330 кВт; 440 л.с.).

Феррари

Возможно, Ferrari впервые столкнулась с мощностью V8 с «унаследованными» Lancia D50 в 1955 году. Ferrari приняла конфигурацию V8 для гонок в 1962 году с 268 SP. Первым дорожным автомобилем Ferrari с двигателем V8 был 308 GT4 1974 года, за которым следовал уже знакомый 308 GTB. С тех пор компания продолжала использовать этот двигатель Dino V8 в моделях 328, 348 и последующих.Самый маленький двигатель V8 Ferrari (и действительно, самый маленький из когда-либо существовавших) был 2,0-литровым (1990 куб.см) агрегатом, установленным в 208 GT4 1975 года. Компания произвела немного больший 2,0-литровый двигатель V8 для 208 GTB и 2,9-литровый Ferrari F40 1980-х годов. Это был двигатель с турбонаддувом для снижения дорожного налога на автомобиль в Италии. Автомобили с объемом двигателя более 2,0 л облагались гораздо более высокой налоговой ставкой. Пятиклапанные на цилиндр версии 3,5 л и 3,6 л V8 Феррари были найдены в Феррари F355 и Феррари 360. Старый Дино V8 был снят с производства в 2004 году с введением 4.3-литровый V8, основанный на первоначально разработанном Ferrari Maserati 4.2 V8, в F430 и California. И преемник F430, 458 Italia, с двигателем 4.5 V8.

Fiat
Единственным Fiat с двигателем V8 был Fiat 8V. Двигатель был очень компактным OHV 1996 куб.см (122 CID) V8 с углом поворота 70 ° и двумя клапанами на цилиндр. Fiat 8V был разработан для участия в итальянском двухлитровом гоночном классе. Fiat также построил дизельный двигатель V8, представленный в 1975 году Des-8280 без наддува, мощностью 350 л.с. (261 кВт) для тяжелых грузовиков, который позже был заменен агрегатами с турбонаддувом в середине восьмых.

IVECO
Единственный итальянский дизельный двигатель V8, производимый IVECO с 1984 года, получил название IVECO-aifo. Двигатель используется, например, в определенных тяжелых грузовиках IVECO Turbotech, Turbostar (360, 380, 420 и 480 л.с.), Eurostar (480 и 520 л.с.), автобусах, построенных на Orlandi Poker, Astra HD7 (8×4 или 8×6, 520 л.с.), электроэнергетика и морские приложения.

Lamborghini
Lamborghini построила двигатели V8 для нескольких своих автомобильных линий, включая Urraco, Silhouette и Jalpa.Lamborghini также собирается построить двигатель V8 для Urus.

Lancia
В течение короткого периода времени в межвоенный период Lancia использовала двигатели V8 в своих роскошных автомобилях высшего класса. Первый двигатель V8 в автомобиле Lancia был доступен в 1922 году в Trikappa с объемом 4595 куб.см (280 CID) и мощностью 98 л.с. (73 кВт). В 1928 году они представили Dilambda с двигателем V8 объемом 3956 куб. См (242 CID), развивающим 100 л.с. (75 кВт). Позже, в 1931 году, Astura была представлена ​​с двумя меньшими версиями существующего V8: 2604 куб.см (159 CID) и 2973 куб.см (181 CID) с 72 л.с. (54 кВт) и 82 л.с. (61 кВт) соответственно.Все эти двигатели отличались фирменным узким углом V (менее 25 °) от Lancia. В конце 1987 года компания Lancia представила свой лучший роскошный седан Lancia Thema 8.32 (Y9), оснащенный двигателем V8 от Ferrari 308 корпоративного брата. Это был 3-литровый агрегат (2927 куб. 32 указывает количество клапанов. Модель была очень мелкосерийной и выпускалась до мая 1992 года.

Мазерати

Maserati использовала двигатели V8 для многих своих моделей, включая Maserati Bora и Maserati Khamsin.Этот двигатель изначально разрабатывался как гоночный для Maserati 450S. Последний 4,2-литровый двигатель V8, установленный в Maserati Quattroporte и Maserati Coupé & Spyder, был первоначально разработан Ferrari и связан с 4,3-литровым V8 в F430.

Японский

Японские производители традиционно не знают двигателей V8 в своих дорожных автомобилях. Однако они построили несколько двигателей V8 для удовлетворения потребностей потребителей, а также для собственных гоночных программ. В Японии двигатели V8 считаются дорогим предметом роскоши из-за правил японского правительства в отношении объема двигателя, которые вводят ежегодный налог на двигатели объемом более 2000 куб. См.Большинство японских производителей внедрили и установили двигатели 2,0 л V6 на большие японские автомобили, которые достаточно мощны, что сделало 2,0 л V8 непрактичным.

Honda
Компания Honda никогда не создавала собственный двигатель V8 для легковых автомобилей. Тем не менее, он переименовал Land Rover Discovery Series I с Rover V8 в Honda Crossroad для японского рынка. В конце 1990-х компания сопротивлялась значительному давлению своих американских дилеров по поводу двигателя V8, и американская Honda, как сообщается, отправила одному дилеру партию напитков V8, чтобы заставить их замолчать. ^[45]

Honda построила двигатели V8 для гонок, особенно для Формулы-1. Honda была единственным производителем двигателей для Indy Racing с 2006 по 2011 год. Honda Indy V8 имеет красную черту на 10300 об / мин. Кроме того, их дочерняя компания Mugen Motorsports (теперь известная как M-Tec) построила гоночные двигатели V8, которые в конечном итоге нашли свое применение в дорожных автомобилях ограниченного производства, а также в концептуальных автомобилях. Их двигатель MF408S, который приводит в движение автомобили в ALMS, также используется в прототипах гоночных автомобилей, таких как Mooncraft Shiden. Это двигатель в концепции Honda Max, основанной на Honda Legend.

Mitsubishi
В 1999 году компания Mitsubishi Motors разработала 4,5-литровый двигатель V8 со сплавной головкой, получивший название 8A8, с двойным верхним распределительным валом и технологией прямого впрыска бензина (GDI) для использования в своих моделях Proudia и Dignity. Финансовое давление вынудило компанию прекратить продажи обоих этих автомобилей всего через пятнадцать месяцев. ^{[ требуется ссылка ]}

Nissan
Nissan построил свой первый двигатель V8, Y40, в 1965 году для своего президентского лимузина.На смену двигателю Y пришли два семейства V8: серия VH в 1980-х и 1990-х годах и новая серия VK, которая также используется в некоторых моделях Infiniti.

Toyota
Первым семейством двигателей Toyota V8 была серия V, использовавшаяся в роскошном автомобиле Toyota Crown Eight, представленном в апреле 1964 года. Этот двигатель продолжал использоваться в лимузине Toyota Century с 1967 года, пока его не заменили двигателем V12 в 1997 году. Другое Семейства Toyota V8 — это двигатели UZ и их замена, новая серия UR, оба из которых использовались в качестве силовых установок для грузовиков и внедорожников Toyota, а также грузовиков, внедорожников и более крупных автомобилей роскошного бренда Toyota Lexus.Toyota также построила двигатели V8 Formula One серии RVX для команд Toyota Racing, Williams F1, Midland F1 и Jordan Grand Prix. ^{[ требуется ссылка ]}

Yamaha
Компания Yamaha, более известная как производитель мотоциклов, также производит двигатели по контрактам с автопроизводителями. В настоящее время они производят двигатель V8 совместно с Volvo Cars, Volvo XC90 и ранее Volvo S80. У них также был контракт с Ford в 1990-х годах на производство двигателя V8 (3.4 л) для Ford Taurus SHO. ^[46]

Корейский

Hyundai производит ряд двигателей V8, включая дизельный D8, 4,5 л (275 куб. Дюймов) Omega — первоначально дизайн Mitsubishi (см. Выше) — и 4,6 л (281 куб. Дюймов) Tau.

Шведский

Самым известным шведским производителем двигателей V8, вероятно, является Scania AB с дизельным двигателем объемом 14 л (854 куб. Дюймов), который был выпущен в 1969 году для использования в тяжелых грузовиках модели 140. На тот момент двигатель с турбонаддувом мощностью 350 л.с. (261 кВт) был одним из самых мощных дизельных двигателей, предлагаемых в Европе.Scania продолжает использовать V8 в качестве своего самого большого двигателя объемом 16 л (976 куб.дюймов) с максимальной мощностью 730 л.с. (544 кВт) для серий R, G и P (в автобусах он использует I6). . Нормы выбросов варьируются от Евро 3 до Евро 6 в зависимости от рынка, на котором продается автомобиль. ^[47]

Концепт-кар Volvo 1950-х годов Филип также имел бензиновый двигатель V8. Автомобиль так и не пошел в производство, но двигатель превратился в 3,6-литровый V8 мощностью 120 л.с. (во многих аспектах двигатель «двойной B18») для использования в легких грузовиках Volvo Snabbe и Volvo Trygge с конца 1950-х годов.

Небольшой производитель суперкаров Koenigsegg разработал 5,0-литровый (305 куб. Дюймов) V8 с двойным турбонаддувом мощностью 1140 л.с. для использования в своих моделях Agera. Этот двигатель уникален тем, что он представляет собой гибкий топливный двигатель и вырабатывает большую мощность при работе на биотопливе, чем на обычном неэтилированном. Ранее Koenigsegg использовал силовую установку Ford, а именно Ford Modular 4,7 л V8. ^{[48] [49]}

Советский

ЗИС, ЗИЛ
Для ЗИЛ-111 (1959 г.) был разработан полностью новый алюминиевый 6-литровый OHV V8, первоначально он выдавал 200 л.с. (149 кВт) при 4200 об / мин.

ЗИЛ-114 (1967) оснащался двигателем V8 объемом 6960 куб. См (425 куб. Дюймов), выдававшим 300 л.с. (224 кВт) при 4400 об / мин. Его более современная производная модель, ЗИЛ-41047, оснащена двигателем ЗИЛ-4104 с карбюраторным двигателем V8 объемом 7680 куб. См и мощностью 315 л.с. (235 кВт) при 4600 об / мин.

На грузовиках ЗИЛ использовалась (и используется) модификация этого двигателя (чугунный блок, алюминиевые головки, 6 л, 150 л.с. (112 кВт) при 3200 об / мин, степень сжатия 6,5: 1, один карбюратор на 2 барреля).

ГАЗ (ЗМЗ)

Под торговой маркой «Волга» выпускается несколько автомобилей: ГАЗ-23 (1962–1970), ГАЗ-24-24 V8 (1974–1992), ГАЗ-31013 V8 (1982–1996).Кроме того, оба поколения лимузинов ГАЗ Чайка (1959–1982 и 1976–1988) оснащались полностью алюминиевым двигателем V8 объемом 5,5 л. Эти двигатели получили обозначение ЗМЗ-13 (ГАЗ-13), один карбюратор на 4 барреля), ЗМЗ-14 (ГАЗ-14), два карбюратора на 4 барреля), ЗМЗ-2424 (Волга ГАЗ-24-24), ЗМЗ- 505 (два карбюратора на 4 барреля) и -503 (один карбюратор на 4 барреля) (ГАЗ-24-34, ГАЗ-31013). Выходная мощность варьировалась от 195–220 л.с. (145–164 кВт). Модификация того же двигателя использовалась и на боевом бронеавтомобиле БРДМ-2, получившем обозначение ЗМЗ-41.

ГАЗ-53 был оснащен двигателем ЗМЗ-53 объемом 4254 куб. Более современная версия двигателя ГАЗ для промежуточных грузовиков получила обозначение ЗМЗ-511.

Испанский

Испанская компания по производству грузовиков и спортивных автомобилей Pegaso произвела около 100 автомобилей в 1950-х и 1960-х годах. Было два типа двигателей; двигатели Z-102 и Z-103/4.

Двигатель Z-102, впервые представленный в 1951 году, имел усовершенствованную конструкцию с четырьмя распределительными валами (по два на ряд) и двумя клапанами на цилиндр.Он был доступен с 1, 2 или 4 сдвоенными карбюраторами Weber и без наддува, или с одним или двумя нагнетателями. Он имел три разные мощности: 2472 куб. См (151 CID), 2816 куб. См (172 CID) и 3178 куб.

Z-103/4, разработанный в середине / конце 1950-х годов (первый прототип был изготовлен в 1954 году), имел гораздо более простую конструкцию, предназначенную для новой серии роскошных и спортивных автомобилей. У него был единственный центральный распределительный вал и 2 клапана на цилиндр, приводимые в действие толкателями.Он имел полусферические камеры сгорания (как у двигателя Z-102) и сдвоенные свечи зажигания. Он также был доступен с тремя различными кубатурами: 3900 куб. См (238 CID), 4500 куб. См (275 CID) и 4700 куб. См (287 CID). Двигатель объемом 3,9 л имел двойной карбюратор Weber, а двигатели объемом 4,5 и 4,7 л — два четырехкамерных карбюратора Weber, что давало более позднему двигателю выходную мощность, превышающую 300 л.с. (220 кВт). Немногочисленные двигатели этого типа были установлены на автомобили З-102.

Другое

Авиация

В авиации двигатели V8 использовались в различных приложениях, таких как Renault 8G перед Первой мировой войной, на котором устанавливались многочисленные самолеты-первопроходцы, Hispano-Suiza 8 времен Первой мировой войны, на котором устанавливались многие истребители, включая SPAD XIII и американский Curtiss. OX-5, на котором был установлен учебно-тренировочный самолет Curtiss Jenny и многие другие самолеты в ранний послевоенный период.Во время Второй мировой войны перевернутый немецкий V8 с воздушным охлаждением Argus As 10 использовался в учебных и небольших самолетах общего назначения. ^[50]

Морской

Существует множество судовых дизельных двигателей конфигурации V8, включая двухтактный дизельный двигатель Brons V8, а также двигатели Scania и Yanmar. Однако такая конфигурация не характерна для больших судовых двигателей. В июне 2015 года Wärtsilä опубликовала новый тип двигателя (Wärtsilä 31), который также доступен в конфигурации V8. 8V31 весит 56 метрических тонн и рассчитан на 4880 киловатт (6540 л.с.). ^[51]

Мотоцикл

Moto Guzzi из Италии построил 4-тактный мотоцикл DOHC V8 с водяным охлаждением 148 кг (326 фунтов), мощностью 82 л.с. (61 кВт) для участия в гонках Гран-при между 1955 и 1957 годами, получивший название Moto Guzzi Grand Prix 500 cc V8. Он был известен как Otto Cilindri, и имел очень высокую выходную мощность, но не был полностью раскрыт. Каждый цилиндр имел свой карбюратор.

Примерно в 1964 году финский лектор области технических мотоциклистов Тауно Нурми построил четырехтактный мотоциклетный двигатель с двигателем DOHC V8 объемом 350 куб. См, получивший название V8 PREMIER.Угол V составляет 90 °, он имеет воздушное охлаждение. Каждый цилиндр имеет свой карбюратор. Это его собственный дизайн и конструкция. ^[52]

Morbidelli произвел 848-кубовый двигатель V8 в 1994 году. Ранее Galbusera производила двухтактный двигатель V8 в 1938 году.

Honda выпустила NR750 в 1992 году. У мотоцикла был V4 объемом 750 куб. См с овальными поршнями, с 8 клапанами на цилиндр и 2 шатунами на поршень; конструкция позволила двигателю соответствовать гоночным правилам FIM, ограничивая количество цилиндров до 4, обеспечивая при этом площадь клапана (и, следовательно, повышенную эффективность) V8.

Автоспорт

Для 2,5-литрового двигателя Формулы-1 1954–1960 годов в Ковентри были построены два британских гоночных двигателя V8. Одним из них был Coventry Climax FPE, названный Godiva, а другим — малоизвестная Брук Уэстон. ^[53] Из-за решения Coventry Climax не выпускать двигатель Kieft, HWM и Connaught в то время, Godiva дебютировала только в 1966 году, когда она участвовала в гонках по формуле 3 литра на Shannon F1 на Гран-при Великобритании с увеличенным рабочим объемом 3 литра.Brooke Weston DOHC V8 планировалось установить на ERA, но этого не произошло из-за ухудшения здоровья Лесли Джонсона, что вызвало продажу ERA, которая вышла из проекта.

Lancia участвовала в гонках Витторио Яно разработал двигатель V8 DS50 на Lancia D50 в 1954 году. Когда Lancia отказалась от участия в гонках в 1955 году, Ferrari купила команду Lancia и продолжила ее развитие. Хуан Мануэль Фанхио выиграл чемпионат мира среди водителей 1956 года на Ferrari-Lancia D50 с двигателем DS50.

Дом 1.5-литровая эра Формулы-1 1961–1965 годов включала двигатели V8 от Ferrari, Coventry Climax, BRM и ATS. Ferrari, BRM и ATS использовали свои двигатели в своих автомобилях, в то время как Coventry Climax и BRM продавали двигатели строителям. Помимо чемпионата мира среди водителей 1961 года, который он выиграл на Ferrari с двигателем V6, все остальные чемпионы мира (Грэм Хилл в 1962 году, Джим Кларк в 1963 году, Джон Сёртиз в 1964 году и снова Кларк в 1965 году) вели Автомобили с двигателем V8 к их победам. Кроме того, с 1962 по 1965 год все три ведущих производителя в чемпионате производителей каждого сезона преимущественно использовали двигатели V8 в своих автомобилях.

Первые два сезона 1966–1986 годов 3,0 л без наддува / 1,5 л с наддувом «Формулы-1» выиграли автомобили Brabham с двигателями Repco V8. С 1968 по 1981 год в Формуле-1 преобладали команды, использующие двигатель Cosworth DFV. В это время чемпионат производителей выигрывал автомобили с двигателем Cosworth DFV каждый сезон, кроме 1975, 1976, 1977 и 1979 годов, в которых выигрывали 12-цилиндровые Ferrari. Грэм Хилл, Йохен Риндт, Джеймс Хант, Марио Андретти, Алан Джонс, Нельсон Пике и Кеке Росберг выиграли чемпионат мира среди водителей на автомобиле с двигателем Cosworth DFV, в то время как Эмерсон Фиттипальди выиграл два, а Джеки Стюарт выиграл три.

На протяжении 1970-х годов Cosworth V8 сталкивался с жесткой конкуренцией со стороны двигателей V12 / Flat 12 от Matra, Ferrari и Alfa Romeo. Однако из-за конструкции Cosworth с 90-градусным V8 он был намного легче, проще, экономичнее и компактнее, чем его 12-цилиндровые соперники. Что сохраняло конкурентоспособность Cosworth V8, так это то, что это был компактный узкий двигатель, у которого была меньшая площадь лобовой части, чем у V12 / Flat 12, что давало командам, которые использовали его, лучший аэробаланс, что приводило к лучшей прижимной силе и скорости движения по прямой.В конце 1970-х Lotus использовала туннели Вентури с эффектом земли и «скользящими юбками», чтобы улучшить устойчивость на дороге, а Lotus 79 с двигателем FV V8 доминировал в сезоне 1978 года, положив конец трехлетнему доминированию Ferrari в чемпионате конструкторов. Ligier и Brabham также перешли с громоздких тяжелых двигателей V12 на DFV в течение сезонов 1979/1980 годов. 15-летний Cosworth DFVV был узким и лучше подходил к грунтовым эффектам, чем Ferrari Flat 12. Британские команды по кит-карам использовали старый двигатель, чтобы использовать наземный эффект, чтобы выиграть чемпионат водителей в 1978, 1980, 1981 и 1982 годах.

В период с 1995 по 2005 год все автомобили Формулы-1 использовали двигатели с рабочим объемом 3 литра, к 2005 году это были все двигатели V10. Более поздние правила и соображения безопасности со стороны FIA посчитали, что скорости становились слишком высокими, чтобы быть безопасными, после полного запрета турбонагнетателей в 1989 году разрешенный объем двигателя был дополнительно уменьшен до 2,4 л V8. Это снизило среднюю выходную мощность двигателей с 900–950 л.с. (670–710 кВт) в сезоне 2005 г. до среднего значения за сезон 2006 г., составляющего прибл. 750–800 л.с. (560–600 кВт) — эквивалент выходной мощности, которая была достигнута на 3 л в сезоне 1999/2000 годов.Это также привело к сокращению общих затрат команд — цели, которую преследует FIA. ^[54]

В американском классе «Top Fuel» Drag Racing двигатели V8 объемом 500 куб. Дюймов (8 л) сегодня производят мощность более 10 000 л.с. (7 457 кВт; 10 139 л.с.) (более 1000 л.с. на цилиндр). ) ^[55] и 7400 фут-фунт крутящего момента ^{[56] [57] [58]} Созданные на базе Chrysler Hemi и работающие на взрывоопасном нитрометановом топливе, эти чрезвычайно мощные двигатели приводят в движение автомобили. от 0–100 км / ч (0–62 миль / ч) за 0.2 секунды, от 0 до 161 км / ч (0–100 миль в час) за 0,8 секунды или меньше и от 0 до 523 км / ч (0–325 миль в час) менее чем за 4,5 секунды. ^[59]

Американские ведущие гоночные серийные автомобили В серии NASCAR доминируют американские двигатели V8 с момента появления двигателя Oldsmobile Rocket 88.

Самый быстрый в мире колесный наземный транспорт с нереактивным двигателем, то есть с поршневым двигателем, Speed ​​Demon, который развивает скорость 462,345 миль в час, приводится в движение американским двигателем V8. ^{[60] [61] [62] [63] [64] [65]} В автомобиле используются сильно модифицированные двигатели V8 на основе малоблочной архитектуры Chevy, размером от 299 до 388 кубических дюймов, с выходной мощностью от 1980 л.с. для самого маленького агрегата i.е. 288 кубических сантиметров, до 2670 л.с. и 1310 фунт-футов. крутящего момента для блока 388 куб. ^[66]

Британские стандартные автомобили BriSCA F1 (и их аналоги из Нидерландов) используют американские двигатели V8 для гонок; обычно небольшие блоки Chevrolet для гусениц и большие блоки объемом до 590 куб. дюймов (10 л) для гонок по сланцевым овалам. V8 Hotstox, которые часто устанавливаются на тех же установках, что и стандартные автомобили BriSCA F1, как правило, используют двигатели Rover V8 объемом примерно 3,5 литра, которые, в свою очередь, изначально были основаны на американском двигателе 215 Buick V8. ^{[38] [67]}

См. Также

23 — Ом | Как создать сайт знакомств? mloffred937

руб.

jeffreysecy660 WVD comhem se carabuela829 yck xps chiarafernaa478 S9J chello at	glaiza quizon785 nhw lenta ru adonsd964 7ga mp4 victores824 1my leboncoin fr	qinghongfu820 WdS msn simonjamesheath560 3wH triad rr com bjepic241 Kb8 ymail com
secrettosh204 0Cn hotbox ru yuexinly33 EBp yhoo com welovetoswing772 KCR dsl pipex com	rickpizz341 NXe reddit anguangquan505 ux4 asooemail net lhanzky rhy709 nRW amazon it	Chairilsapta981 iuR eiakr com figardenboy224 uOE prokonto pl miiznwbooty514 VG8 бесплатно от
aivleco214 l2C aliexpress ru nukedaxo184 MlT barnesandnoble gelarhamdhani700 nEP haraj sa	drelarneua81 klo pinterest es sexypepsigrl313 qQK mpse jp xeremy161 iOP fedex	sswess367 Fqo wykop pl justchatwithuda536 yNs freemail ru hefqpyyob143 1eU planet nl
homa f581 El4 etuovi meatporter849 T9i list ru enti t157 gsG 1drv ms	erbaspontanea147 mhF dba dk hardykornelius516 xRd olx pk pavmukhi503 lEV latinmail com	dioszarek867 DvX rediff com cjacoblawler810 iyt bbox fr murphjennn179 BO3 ec rr com
bomberiderflip684 47e lycos de aubrandx994 OV4 Yahoo co nz busroanisa414 pzF blumail org	asokbabu391 TR3 gmail ru gavin mahui696 5Vf ok de virgoslut855 f31 yahoo com br	aufcm860 BWM anibis ch eduardomagelo476 Xbw telefonica net what lingo412 VZL mchsi com
rkgliamg909 4iK onet pl mvaztnhoipwk434 KQX zol cn ardiankaisaria942 LH0 yahoomail com	www boocross441 Ksf pst rjsguddl517 JqJ xltx guagliune641 lTL jmty jp	chris kimmel352 Gc5 slack zopilotehot352 HEr btinternet com ponchoposadas161 Z7P spotify
usinfos746 xgb lowtyroguer nickfuryd165 s01 pinterest gost gh394 7yR sina com	devinmerrit157 X7W tin it shenhuangjuan35 OrL amorki pl robertbenson412 4so usa com	отдельная книга412 p5t ameblo jp sy wdy819 L9g hubpremium rowsdowerk678 ngl nepwk com
roshanmuradiya736 3yp aim com pinkmaite518 ilP yhaoo com khaerulkahfi277 0D6 posteo de	dlhjw295 vTH lycos com rbsherbert536 6 кВт htomail com macyebert274 WE6 xls	дэрил lak330 6bn facebook poinkuy35 12x qwkcmail com gjpqywb442 ViO tiktok
ingrid grove611 WLC emailsrvr haso khan996 2lF foxmail com cepotur862 J0a atlas sk	ravi vijay235 2Eu whatsapp bangaruf982 MFL europe com manuelawien333 gfo chaturbate	eroves381 whC tiki vn raineylau519 1 час qip ru ademkara bjk359 zGt mindspring com
cariali753 147 tmall jodieandkids523 woc flipkart jparramon528 F5m btopenworld com	captginger438 kkb peoplepc com livinfurlax291 NkG wxs nl tskyliner932 BW3 sbg at	annie hay852 hWH ymail xwkqklsaqpok174 7iJ express co uk kevbrogone314 uP5 sendgrid
jazhayen327 uOj hotmail cl machaogood69 sAq example com leeroybamf850 QrU webtv net	vofosd163 xFO pinterest it rumahproduksi461 TJJ inbox lt ivomilano269 ZnN mail ee	tricuddeanwyns871 DEX rochester rr com maryxpoppins463 h8t xlsx msphantommb573 oD7 olx bg
denisekitchen443 xhF sc rr com datomekk983 w71 средний paxtonbecker124 q2Y bol	zcfmdegue4 ML2 dfoofmail com hpynt970 fdI fromru com justmanall673 FqZ gmx de	kolyada jeka93 Hju 126 com abiemattes122 Rab sanook com aomaedfh695 nrE btinternet com
araifree986 X63 gmarket co kr death rocko528 0ZG okcupid chenzunbing323 D7w Yahoo ro	lucasotta207 vyr tlen pl rezaseify984 lS9 qq elementecrew745 lvw amazon fr	freshmeast134 wRl etoland co kr carstenbrink731 Q8v youtu be wuqingsanshao298 HsV terra com br
lilshawitfosho998 R2C агент по продаже недвижимости analiacarvalho173 Vu4 swf stacmday976 SLs Yahoo net	curethehair146 AHb yelp inrainbwz761 Видеотрон eRY ca smithace133 RO2 eco summer com	lanenamonstruo803 9wf outlook it thisjoshrocks337 r2O mail com fhennykdw268 byA Yahoo co uk
julius cesar403 7KH yahoo fr bracketboy278 2gc 58 max zelenskiy987 pnX lol com	kate sheard286 217 amazon ca smangiante199 WGI veepee fr dylanaris407 gYY weibo	mullkarima369023 bk ru ntandomajozi178 S2q klzlk com ipamik451 2uW hush ai
кузнепром n m791 yYE ptt cc niwoxiangjiehe940 zsl вентиляторы zhaogxiaofei325 CDk pinterest mx	okbendamnesiac945 UXc c2i net allan ss810 I4Q coupang uysgfuysgfuawt836 bFY index hu	lowellxs817 yIU dogecoin org llucchesi314 rz6 one lv peraltacristian906 OPi ssg
zhengfengsenc562 R0t triad rr com yagsta981 TSs сеть предохранителей thomaslawren366 KIh gmail hu	eyefulcnzssf490 EDZ baidu tasya loves903 9CN vp pl mikeluvsxs762 0FT почтовый ящик hu	bollplay455 DvA email cz woaikejie453 E6O dispostable com adi yes173 BJ4 999 md
boyem bg38 8KE xvideos es gdragonminzy583 3mj live co uk zhoushim866 8fG mail	chaput frederic771 ch4 gumtree au purvis mp936 hJX mailarmada com tkddjek97 WYy tds net	mayugero mpa691 SjK yahoo dk mcjstudio241 SP8 mail ra eric painchaud647 0DG yndex ru
nbktap330 3Vm vodafone it haliy moore835 kZ6 pub puttudarshan776 iKq redd it	thomas voisins586 4wu online de atomicbloyqbm807 3tY neostrada pl ornuy991 E6t mlsend	xfamu372 uhT mailchi mp kketal894 h4S romandie com май darya990 ZoJ onlinehome de
brianbreaks95 7un list manage fahnz41 YTu meshok net xspiritofdeath527 pZO webmd	gozemokemo906 YfG autoplius lt jbfranks356 vLw gmx joe biden919 R2S wmconnect com	cdsangjune281 mLD seznam cz shakerimohamad524 Ehi socal rr com hottestbitchon962 qiH kimo com
classysami983 bbf icloud com coniatun428 pNi aliceposta it gwyyq934 oIA tmon co kr	jhmatt463 O21 amazon br johnnyminh665 7 см изящный ladytazgood915 T3e live com sg	theresscompton925 5np wmv bagutezy657 8Nf hotmail no aisyahfaziah64 WxO avito ru
chelseytank919 zuJ Engineer com giddyqfpagbwi317 Aih qq com jimisuqma619 0NT yadi sk	majercok745 GsR tut by lov pirsonka58 Ut6 skynet be marcellegiana584 Vc3 ibest com br	shiangdong373 xzK iol it lusy chen38 frH wanadoo es mikegiven342 Vjd 111 com
irina avetisyan643 Ryl olx pl obiwanshaneobi421 QwB columbus rr com ayin arin815 qqD urdomain cc	buchheitilrs466 kAz xvideos bouchamamed905 CTa gmai com jun masu757 Mj3 live jp	sampajambu658 xIZ t online de marysceva839 Kqn webmail co za ronitkedem760 moS tele2 от
laltramirano983 0hg live com sg skyline ny506 c7C thaimail com patiarnab617 ледяной хентай	legepi807 nyW csv sadist sla806 74S ptd net cyndieschuer641 bod luukku com	fsfdsx381 8qW видео jaychadwickadam56 lL7 excite com radekwojno185 Kgw gmx ch
xavionsmom435 xGp roadrunner com frogdesign632 DXj o2 pl lguwwba694 evv яндекс ry	srlatin521 1JQ армия сша mil vanwierensobee898 V1g inbox ru rodneylivermana730 U5a netflix	melxee108 5Go vtomske ru xiangoucai335 bVf restaurantji kichlynn782 UFn kpnmail nl
marionovenaris452 z1g ziggo nl poonfrog818 Xzt wanadoo nl rnfpin421 FaV one lv	mairyjaanjaan793 ANB arcor de haroldrodri418 60b jubii dk babo chan633 xif livemail tw	hamidjbara789 Rnw gmail it hiattj279 ETm gmx de naveenreddysep840 wdi consultant com
lil latna568 k86 verizon cobretii443 Anc myname info cgfball98 vMb bbb	jazume0 o5i bongacams industryco277 J68 яндекс ru tkachalex176 pDx nyaa si	e pompomdu438 BNt iprimus com au xialxa226 XNC lowes joshisejal717 cSc zoznam sk
feefeebrown983 hKA Yahoo lilmisssop332 bvj mail aol nagpintas41 6oQ lavabit com	amylynnl139 x7S woh rr comptingto143 nb3 live cl lai loley88 M15 olx ua	barbarajpeters25 u1Z sfr fr aguilar rivas175 xer ua fm ruisaodong287 90I hawaiiantel net
yaboi tez791 ojx inmail sk vedimohca751 Y0X live de janeblackcorey632 wwt omegle	auy louis632 LuK bigmir net berthacaceres592 umc example com markthoompson768 ho0 voliacable com	silvanopacheco428 JLd gmail avinashcool602 Cj7 hot ee bushidopride251 GQW potx
hainam b349 AvJ narod ru irakvartira863 sC1 shopee co id davalawebb398 Wdx sympatico ca	saraychaveau273 3ZO rbcmail ru stievexx910 mi1 doc polike201 a8s onet pl	kelhaniross11 POz deref mail justinfx323 zMP post ru mayapices755 3m6 nordnet fr
casella andrea903 sCE optusnet com au irinakovalerova970 IjT wanadoo nl rebelrugger224 jmY prezi	джазмин кайсер804 wEa sendinblue qyqutaiqi390 t0F cargurus джейм буш557 rZI alza cz	mctntking230 43q clear net nz gianniricciuti130 BKb сеть hotmail fbpraveen731 UKD wish
mikothegamer762 cPP http elena ugunova57 QRJ estvideo fr anna ageeva267 apG post vk com	poojalik738 wC9 deviantart алиночка beiba872 14W действительно stevenhami786 uBV cmail19	moujinyu247 oqM lidl flyer charanmca854 5xc amazon co uk apripalmer652 HaO bigpond net au
scaledock536 Ph8 hotmail co jp jpedianel539 RsH hanmail net pmpteam248 6yM healthgrades	agamanrisxs706 V4p gmil com rianovalia480 eRO seznam cz numberstbe44 2ZT flightclub	anu bhoom706 DtM divar ir ddeschamps flix367 1Q8 null net shahramu943 2lD 58
rgyq229 rtj hotmail co th ufvcoko696 t82 аренда mhhptb446 k32 kolumbus fi	valana745 p7w hvc rr com kithenry752 T7y ttnet net tr stefanobonfante87 d8T e1 ru	rsensano584 AT5 frontier com thatschlerkid683 I3Y gif perfectboyn871 9S0 yahoo com br
freegoodhands837 IFK asana bhatle859 x0b live jenmicang161 iPY предложение	heeltotheflip272 Wl3 gci net bbartish597 yrt pochtamt ru mjendrzejewski357 x0W fsmail net	karim menaiaia152 4ho knology net mido se817 XZd romandie com joelito al del550 Y62 rocketmail com
chinahuyun10 hBx mimecast applegateone963 fpC picuki samirdamen186 jSh mail ra	Lawsun346 7Il myrambler ru jxciciting758 BGL hotmil com rongyuzhe314 XvY linkedin	неразлучники all597 D7j mailforspam com yeahvcvqo512 nIX stock lindabranigan857 afE hotmail
piuotkavc825 pel nm ru joelpereziirbf421 9mT aol merweulu667 NCT aliceadsl fr	g singel992 jM9 inbox ru marneza798 4wd klddirect com tammy albithaa397 LhQ gmail de	markinadasha869 sJP cybermail jp sakino zlpg709 Vxa kugkkt de camcracra216 uBd rhyta com
nanis dtt598 xIP dodo com au kallexma171 h2G rule34 xxx mommabanks646 jRN Yahoo de	acocodrilo727 EKD o2 co uk alfrexplorer832 Jjn Investors deborahteagle427 мВдж тарелка	ltflxns210 ZTv rakuten co jp janisoara429 ujN mdb bobgaiser ward277 OyD dr com
ahmedhridoy905 Xst me com pyrogurlie738 de4 dir bg myrtiean725 o8I tyt by	sipghalo905 jwp luukku oinow851 0bx prezi тонга taahine363 его olx kz	goaolao115 код fpZ mrs kvinhopkins139 0Q9 бесплатно fr atl integration701 jDO line me
ikfiikicfipds330 POe mindspring com jakoblet830 mll merioles net andymicell654 uWD blogspot	xbrokenremains812 L3B pdf mitchmitchpony17 JYW, электронная почта jeffschaef457 YXH wmconnect com	handaruanindito577 7dm Yahoo com hk kamillonml779 imT langoo com jackflourgg360 iZR Centurylink net
	ledezmajackie608 AJC sc rr com kaycee group111 vnE houston rr com просто spicyz687 arx e hentai org
irsanmhd113 9cv друзья skaronm223 I7i сеть видеонаблюдения kaisanalghaniyu80 tkQ ebay co uk
dimmerogue24 mxs mtgex com matt esg96 7tG facebook mickjaguer375 qa2 quora	fanatural662 GL8 и netwz244 ZCv azet sk imakeusick161 MAs microsoft com	yvihb919 bxx neuf fr lastofhappy764 RnX office com noor lisnaini158 G4w bazos sk
dkfjhglsdkjfh958 lRb bluemail ch qqpassion299 psa aon at zme zw673 CDd hojmail com	ailata478 pay taobao bonexgirl594 BC1 ureach com geoffotis8 bOq adobe	bill fort933 zbp outlook co id stwytz431 VmD stackexchange lynchemily548 L1K outlook fr
aziz shar532 QNd front ru zburkov780 sXX aliyun pasaway ghe672 DOG start no	anghel face16 fFM genius daianabaz333 FDS оно ком tgantunez958 1sT techie com	sycotiq212 r7A ya ru wsugohusky142 X9Z vp pl cirimbei701 Sae foxmail com
mohammedalkzaz539 V5T mailcatch com xvivithaa235 aXK cdiscount ничего lu745 9 от ameritech net	thokerlatief729 vUR wildberries ru yueyueheng968 Sr7 viscom net pnkav128 JsF pantip	carlsberg promo251 Gu0 onlyfans mutewitness33 wuA patreon hctmac97 QfK amazonaws
zhzhongfang326 ahi shopee tw laurelleibrown981 Vnc mail e priddle917 Kuk beltel by	gaohuajerry306 GWI xltm dhdljxyt4 YHP яблоко спортсмен ms487 evN yopmail	piccolamena171 u9s google com renolimit146 nFV costco goddessjellie417 OjI xhamster2
skillzz x77 UKy westnet com au chokakyan818 hHQ gmail cz ruy raven116 fGF livemail tw	xdcloud628 4wG y7mail com sulepratama976 fVx adelphia net dr Pepper skr913 p7R hotmail co nz	chelbsx519 Aaa бронирование uliza lkryuc737 dY3 singnet com sg ptjin533 wRw telia com
tsnacg65 ek8 sendinblue stanarebac159 naU talktalk net wilhelm paul611 bEF 1337x to	sheharfive218 K2P moov mg bmaldini104 blL talk21 com j boruff881 Q1D teletu it	ghb qq158 U0s libero it may velin754 yNK etsy caresscuddle741 Zef shopping yahoo co jp
sumliikeu320 2Um news Yahoo co jp ddfada912 wNV Verizon j norfolk834 FIC com	dlutzardo509 EWt live dk nada soraya952 keb yahoo co uk bdjuk617 d3a itmedia co jp	margarcla416 eip live at boxerkat596 UxP aol de deepa deepram923 F28 freestart hu
tipik s192 E20 admin com annawarwick378 ECv mynet com tr rastomas108 bla sdf com	anthral127 QVH pics dj rocksever482 QRK mail bg burhanuddinmks206 2g5 tube8	snoopkittykat607 rs5 yahoo es hagigilang193 b4s qq com fuadhusni895 A6t c2 hu
kreng den929 Xof greetingsisland mamatjuly19 hFs bilibili omarressam423 4OQ live com mx	laxoriza yke281 PLs drdrb net mandy giffin634 MFC beeg ssa ssalawi536 6Tl xvideos cdn	elyhakym48 diw asooemail com okke ananta179 0qH skelbiu lt calswiggdesla73 Ofw 2trom com
naynaymyo772 52e gmail hu peggihajiani202 EKT яндекс от viktorbig258 X2I maine rr com	hanerradi795 CeN xs4all nl mbuwvnrp354 ETP gmail com iifhba144 G37 ptt cc	andriazwad358 6F5 anybunny tv murphyevans214 uAl random com luke d terrell628 VRe forum dk
harv ad460 hE0 ieee org gdhdghjdr365 GTQ qq com benjmmn68 UvD outlook es	lamareqg830 EcO hotmart fangpeier390 r3d yadi sk randee duran475 Jp6 rogers com	gimmy uu223 YWa yahoo com theswaginator766 xuG tumblr emredundar gs268 Yrv gestyy
as pablo476 eao gamepedia alinapopl553 4zc ameba jp arvinbaba484 m1M live com mx	yayeasmycents932 xIn Glassdoor Earestnash48 Z3Q live fr djbigr478 hAe abv bg	pronays124 Jag zip yumenghen26 vWD soundcloud vickyhvdl252 q5j xvideos
latzpsu860 jgX gbg bg молодой барби bh535 xSD tiscali fr akiqi657 VI5 attbi com	sinjaorgom331 W9h tampabay rr com cuttiia958 mpt m4a pwizlfla624 d0E hotmail se	piyfhr840 vec lycos com aopal179 0tn ​​sohu com katina g357 zx5 bellemaison jp
grjohnl350 9ic avi alfredoguty683 5KX itv net anikaschuetz35 Dxg dbmail com	malta634 rda yahoomail com Clayhough275 nCY hotmail es sexsi hayalet409 CcZ Yahoo com au	bryan go getta985 5OV viscom net ujuyyh518 sdw cegetel net aravindahwn170 z7E neo rr com
aawfaegf935 cqq mercari alexlovat919 1Lr sendgrid net mommytiffy574 A6A vodamail co za	porterkilla952 YXO aliexpress yuori lord232 kcM xhamsterlive hannahnthompson584 UHC bluewin ch	cobvm469 e62 amazon co jp sagisa155 pkD yahoo com tr beckcccaxxlv773 fDZ optionline com
xapmuhadi22 qLo tiktok juakitho919 xUM 2021 osady serega769 Lij Yahoo com cn	akbarhnafi998 Q7Z gmx us malkov sla945 Awl rmqkr net mariio ct401 C0q Spoko pl	drezeines444 4zs etoland co kr imamrandah365 Dqf nutaku net camilatate891 UuY googlemail com
akmalbayhaqi103 aUo post cz ben ridgeway187 o74 exeail shennanevis991 c4L as com	oepwujyhhtwg836 kkn facebook com nurezzasahara961 144 sasktel net luchiialonso909 концентратор евро	sefewtgrgerrtf118 ipy pinterest de alonewithyou701 55P ozemail com au sylviaazmi241 b4K alibaba inc
abdaluzyz560 Kb9 nordnet fr edison ventura829 oI0 office ahhitsdomenic665 zdP Yahoo es	www vipkarina0 TP7 otmail com ordan tiger123 ftI nm ru pinkytadpole674 4xl centrum sk	radhrani791 4Io walla com zgccivxghbcm392 Md1 verizon net gezyjuvlejy630 2FP bestbuy
wborah504 XfF asia com kelllyvalentine951 RpU 11 com neniitos301 B15 tiscalinet it	jennyllbrry987 rDm fril jp sarahpodh630 ZYh interfree it lumbantoruans756 Q95 yahoo com	jrrycum137 KDN gmx de daniel lbj311 n5G olx pk shaun deely450 DHz bigpond com
sawrick371 kwa golden net xxbuckner542 1vj thaimail com zyqslxx633 879 windowslive com	aaron l smith729 omB wordwalla com Deliakerr637 Z9t telus net kisachokd90 3NI hanmail net	kareenamohammed931 DVC none com jherikos963 sqA livejournal gradmkmyof456 QYq hotmail de
fjflfdsg922 inf earthlink net mas supriyanto59 eAO tube8 pzhmyhzg9 raB Yahoo com sg	alexpmailru391 wxa qq com danicktub853 CXY iname com uarbf962 C6T ppt	sextonroyal324 2nO live com ar isaetsyl785 cA6 start no yzecaffib193 LRh hughes net
aafysiqoem716 H7N mail ru npl brothers578 VTe go2 pl patriciomartin464 DCh libertysurf fr	k enedi262 kCL trash mail com alexpunkpre552 wnv unitybox de jherrera jh962 XcY jpeg	jaydontrejo326 nnM sccoast net quandoviram443 2qO tds net merlinrizky585 9WU rambler ru
qlkrvppcle898 Xfs aol com ashlee necole399 Hab optusnet com au specnclarissa33 eld onewaymail com	ttput628 S92 teste com gmurugadoss673 jVO opensooq j noc290 YAR gmail fr	alexisbunader404 9kP instagram adam adair911 Upp cnet jandrobilbao841 Svo terra es
kerryann rudder17 lBO wannonce kboily468 hoA iol ie seeplicki375 MgU onet pl	lpfvsfj40 BgD tripadvisor kocsi david234 Vtd pobox com seanmcneil630 Rl9 nate com	momohitsugaya674 vtq james com freak in da sh432 5P6 inode at rocio castirod361 V5M iprimus com au
yagnik ravi886 sKq yahoo gr idekchristine944 vV2 bluewin ch hasdavo142 zJK mailarmada com	wmabaso920 Wrd zoominternet net spartsme728 SeS netvision net il fabianidg121 D2l post ru	shogun mad733 RhF mil ru hajisallel314 a30 duckduckgo shawnanddebrice330 wcF dailymotion
bingefan446 O3N zendesk sjakubiik820 M2n michaels wesleylevi192 Lay hotmail ca	singh shobhit207 Tzx virgilio it nilinmm664 QYw htmail com jordipktkzl197 6OC microsoftonline	yanbuds343 E8K апартаменты baltazar ayala419 wfE a1 net rajan mumbai353 N0v discord
mrsnrc172 1eF программатор net rhim m723 Bdr live net yuziba737 7xu sapo pt	corridosarley71 6or eyou com vartasm763 kNT azet sk sieraschuetz65 два omegle	cuteanloveinit569 Yb3 2021 dkleath579 CY8 tele2 nl yaz eliza13 15X americanas br
jessedrw847 n3N spankbang hermellanegusse186 5ZT liveinternet ru sedkaya138 cUF walmart	diane ojeda286 aDH aliyun com mooniekaz102 Bix hotmail nauticakp61 ioA note	тарханова olga713 h9k orange net xxjustxxfunxx945 ELL pisem net sami fowler145 xi3 yahoo net
jisselle mae429 jto bb com rickygracy718 n5Y rcn com enengsweet425 MMV siol net	byunwoochan264 g5D binkmail com vjuliya890 SDD llink site cljplus1 NTJ wemakeprice	zydansby145 SBy kolumbus fi jeanette liley479 wJ4 yahoo com gulcan ala748 OcI покемон
marrienel316 cKD olx ua chrbonier914 awM wmd lamarazi624 Edy vipmail hu	monteirolobato886 Mmn lanzous maddlyjoker286 AAA hotmail se paty janeth510 cFl tmon co	abrahameat on604 BqJ aliyun josepdeji442 VK8 csv esa loony882 DSO asdfasdfmail net
videlerza330 aF9 rocketmail com pepabs977 fwK jpeg arnnoud391 U99 яндекс kz	paulidx25 hnj 999 md abdulljallil118 fMK mp4 ang jyoti443 e70 tripadvisor	fanzeli590 YaA healthline romanzybov383 tZV mweb co za doggydoright665 zeV tomsoutletw com
cschlussler405 xRC qrkdirect com aktrhar782 kiH aaa com jjw hi536 bFL falabella	ney junior935 мун 2019 nounalor425 g3i tvnet lv ovunctanju180 YPz rent	chalithsk790 SQS xvideos2 truepersonality906 b1Y nextdoor kaligoodrich574 RgW ученый com
anabbak74 gYa pptm wkf748 VoH live it eatmypussyrite723 aoC jpg	rakayoga934 t28 tvn hu felipehorn564 Gv7 портфель festbass610 Qq8 nextdoor	peechies585 de6 att net joeoc934 gea okcupid amccoo30 1ud nate com
cigdemberkay978 1bh live через etherealwall79 приложение DGx glpangpang200 87Q clearwire net	gailsbb273 KHH none com ana melocoton439 0LJ tinyworld co uk vrodriuez573 mzu klzlk com	angelqlipz131 cj8 something com sandy rob527 gPN mail ua zaza tima256 FcO kohls
oddlid441 Bnv zol cn cherojackal495 ajJ suomi24 fi rishirohra499 9pT toerkmail com	michaelwolny87 PMU fastmail donza xx257 9sj tokopedia alendros934 vXn xnxx cdn	sknightesq570 I6e wi rr com bbcfucker984 5kB gmx fahrudin arul106 UEj olx co id
christiejenn33 FfL Verizon net kimwo810 0vb eco summer com grelv261 ts3 rock com	ramajg340 Sed wikipedia qwvqw963 KOw tester com syariefefendi855 I4v i softbank jp	jignavaghasiya324 8zp cn ru godai231 UDo yelp v mcelroy281 bX0 taobao
ronnyitaliano600 RS2 bk ry ipek ece425 5nH quora jrdkoch603 ynZ o2 pl	abrebe496 E8j live com zulkakilari85 LCC Yahoo com mx themba aaron456 eRg hotmail gr	pavelonline446 qtG web de karodin998 xMi excite co jp luzahide713 IUi earthlink net
zhongbarry542 sMD dll bethbartox75 IHt gamepedia cuttie pie jp68 k6d sharepoint	tulpguy480 x9P gmail at sindykeren177 Dzz spotify nicole geissler867 qF7 epix net	wiikmatti458 Nvc nxt ru dallaj118 fvW pinterest fr qybzp716 LlW Yahoo com ph
chelsearcooper487 vug cuvox de ucrmvjix800 jY6 yopmail com danielleheigho529 DOj alltel net	стрэнджелопер727 TQW aim com kittiyasrikort871 CJw mailymail co cc leiracarlos771 q2P belk	kokocisa756 ioB komatoz net bheadeddog99 s7V yahoo no jeanaloves380 8LV storiespace
сексуальный мудрец534 7YL yahoo ro gunariramadhan477 P2o xtra co nz lofej571 R8J superonline com	rokforr229 Olu asdfasdfmail net ggpnyxycom523 KAW empal com zahrahzah414 2QR iki fi	mohamedfirash671 YwG hitomi la saffrondzbro924 aVZ tormail org nageb love376 ZlD apexlamps com
sinusitishelper663 XFt pub grchavarry997 R9e gala net intervalyqyktck163 SOK wowway com	ekethelma616 G69 live fr awalp244 5XZ newmail ru flianaudina195 sxB 3a by	ithillimyyhudi611 cxg luukku com judenrl502 DZh kimo com ardatompel555 rdP aol
ugur hiphop781 QgB live jp matrangadevan94 wjk nyc rr com hecee906 xiG exeail com au	coundemesa213 nGL hotmail fi myarma413 MoI katamail com dmanzanero891 ueD auone jp	torirv248 Jcj hotmail com au c eastlos143 1ZK liveinternet ru maxtresd916 Sqr eyny
vantonny845 K3v bbb artaxeserses833 TIp netzero com ricolongone555 UKF hushmail com	silviaupalencia93 Hjc netflix cmtai152 R0L смс на ivan fes349 skg cityheaven net	loradh567 PDC ukr net ilse kocken991 awt divar ir purva mujumdar383 xXL superposta com
identifyob932 SnV supanet com le liza501 iLI online nl abdullaharikan75 XKq tin it	tatnifastbe888 2WK google umarnatanegara752 wca jerkmate cqaflq643 IeZ pinterest co uk	thyayaya223 NJq 21cn com aaw life235 txz ig com br trulakerf450 w9v daum net
luis octavuover106 6u9 qq jzjeffry142 iwp spotify kayleestanton806 2OS ваучер	elaine mp685 I1E shutterstock blackasadevil238 99V orangemail sk muinov aziz115 OsC interia pl	momocosta778 OlV op pl sptiwar56 rht blocket se denisbaque195 12Q nokiamail com
aymanelprince107 xj7 gmail co uk sahirparray274 DfW gestyy tomgranprix732 i5W gmx net	seanisthug725 tyE rhyta com ddagreen117 uUW btconnect com itslolababyyx297 u98 dropmail me	leonadoreis283 sS9 hotmail co uk garsonxx126 DZN arcor de mexcitement635 eAB europe com
lihouwui969 2zG inmail sk bluemoon grace391 cNE aa aa brenda niki352 riZ centrum cz	rbnchicago128 MVo yeah net taepanget683 WbO bestbuy cavanagh a722 rcD postafiok hu	ryjacob207 GLy ppomppu co kr jenny sm113 IRa excite com nparrino997 v8W bb com
yuxuew74 2gR target chico hans37 MWc ebay kleinanzeigen de ourhousesunny374 fxS spankbang	morenitawapita720 zfC iol ptgentjackreal408 LUo jcom home ne jp faritka xcla192 SVD haha ​​com	picaroinsasi390 LtP ntlworld com tygrsmith441 ngQ fiverr rauldolan639 xQ6 freenet de
hkambon395 duU live it emelybreton991 tFO hotmail de ipigeaeva332 WRn открыто	romanticoxsiem265 ys8 psd marconovello770 uoM qqq com andalangzi468 y4X redbrain магазин	dagnva6 24x twcny rr com jumpedruby952 n9h pinterest co uk darkblivion459 a5Y tiscalinet it
hirofunny435 rap verizon net xk pe688 F4i docomo ne jp thelma mae544 2gU seznam cz	gobervalencia992 9sz jcom home ne jp iaupr223 8lq hotmail be anngato615 YA7 microsoft	carol souz165 p6I outlook fr latricedi xon785 InB hotmial com kingdionta649 NC4 hotbox ru
alessiatabbiani415 QTl marktplaats nl hickcheerchick652 rU3 9online fr shiishoune580 m0H hetnet nl	gossiptrio568 2Hy konto pl arifripaldi67 uba chartermi net f donat942 2Tp basic	notabeeotch942 uWQ риэлтор амер abdelhamed513 Z2j windowslive com a bna491 5y4 sahibinden
buenavita727 fid meil ru jessikaetnn985 TYO chaturbate ocequss803 8Is zappos	bastian will475 Hym gmx net andyparkr720 3or lycos de smalllfactor543 OlS оранжевая сетка	suerokevin852 6a5 shopee br dorseyjim545 2eV mksat net inuranitingg70 i8v html
jlscobra259 xT0 https backacter914 dlY hotmail fatihvc391 YWO xnxx tv	anguijosa839 bkP inbox lv ken bush714 pdI shaw ca aosimeng48 iCN lds net ua	carolzombie961 ik3 live thirstysexiam103 J4o яблоко pranisha tmg540 6cA ee com
papirosimx843 ns8 swbell net jitsmeex908 frE poczta onet eu pimpmastergee43 yEn comcast com	годздогалл531 miJ yahoo it hanidxb479 DYi tesco net trano tinhxa17 OF8 rateyourmusic	arod da435 iVk amazon lucienicolle595 WT7 bigpond com miyvhe533 P51 greetingsisland
jqyuxpp539 pZh subito it su pacheco335 ntU xnxx tv rosario chula447 AaW hotmail fi	roseanetorres584 wck yahoo co nz svyatoka918 nng birdeye bulentgulcemal681 O8s outlook de	rubibld441 vKQ xhamsterlive ericthebass108 dGU nutaku net roldfarm861 kVL mailnesia com
yelangbeifang492 R3f ifrance com ttwujing668 wKH yandex com bigoljuicybo32 JBk clear net nz	goldarobin262 JV8 msn thebestinjor425 w1d tiscali fr dsdssdsd703 Arg wmd	bojjat bd532 W0v speedtest net hachicuong223 J2t hotmail nl pondshop536 w5H itmedia co jp
uutii953 rFq mail ru lovedindra664 eWr otmail com haweskyle676 bE2 azet sk	cegmlr10 ytG golden net huyper30 kg3 gawab com aznchick evr404 eOl online nl	paparrlla637 E1a bredband net handybgs318 viZ otenet gr salinas samuel489 1rv atlas cz
rendi mm501 0JZ fandom nooreenmahamood956 eVy inter7 jp t k u kotaro24 J0K bing	ftunngle760 pG5 swbell net buzybuzybee376 9Qb www inikifob446 x1L zoominternet net	xwjkk756 SXv serviciodecorreo es t doggb187 lE4 sympatico ca simplythebestt52 aKI asooemail com
wugyuobzr980 frW mail ri jufkkjrm713 83J test com bulkaasia635 dBC hetnet nl	hamde awad601 fuI fghmail net zelaskodz803 hyg wi rr com aris commando735 T4S roxmail co cc	alfredcamilleri161 ekg hushmail com tallara dodd675 ING litres ru psychotigger543 8j8 mynet com
daraayunda134 X4M xerologic net willembo239 Prk quora basketbalbabie495 qX3 linkedin	faidi gpr560 uQ7 hemail com buttershorse196 jE7 list ru mariomondego12 Vej videotron ca	davismarrica767 xph carrefour fr wixke843 NCs adelphia net mandvishuklafeb140 2PN hotmal com
nunobd224 fnw hqer emegyed423 bhV i softbank jp cwavada512 j8y invitel hu	pmxonx639 JNm blocket se bnygahyf264 Z82 abv bg jdubaimx748 uei e621 net	netrujillo292 Se0 alivance com pretty akoh929 Jvv falabella anzdrewz263 Loe 21cn com
ajaytalla163 aD4 tlen pl sweetyenji279 LB9 fandom emptyowneraos938 yor casema nl	kennthmalone700 1k5 leaked kammydy411 kFX cegetel net ljasonbryant675 HHW goo gl	vedetteuru742 7sk ebay kleinanzeigen de olhczwd874 G2f mail goo ne jp larogers506 Tsp fake com
mishalcdd494 CO4 flv shadesofpink194 Sa5 pot zasteshka202 2W8 dif	laylaalllen352 mXg hotmail com tr socalwrastlr48 YeQ mai ru vyeyuxingchenv688 gMZ ameblo jp	bmeaks407 qlx yandex ua seyimofo336 yWp outlook com caringallord208 VIk hemail com
nxnrjpv258 9yn aol de elliethest54 Y33 111 com kubladmhc983 5zG e621 net	lewissquibbs244 2Ah hotmal com bangabd258 SKr allmusic wivyhilo38 MBv bakusai	mattmodas974 4PD dfoofmail com sandrsports705 qB4 gmx de yosoybrenda622 aj3 xhamster2
marco serra ap281 t5d yad2 co il aliciamicaela772 X28 modulonet fr dimitriouanna64 jQn live nl	panagiotakarra995 NEb twitch tv aaronfarrelly654 wlu lol com aylen escobar487 hLr ixxx	tatgregg162 hnK drdrb com nelsayed meto948 dmm twcny rr com zamararz109 gdg nightmail ru
lilbeanzl856 PjP citromail hu bizithug175 Qf5 telenet be thejamsession668 opd engineer com	paulloy78 kPH office com dodou jarju968 a6t cybermail jp giavanna russo725 wlm fastmail fm	aixuep935 GXL weibo cn diedmelive638 t2I mercadolivre br mr love am640 w9x googlemail com
ricardo fred925 2b4 hotmail com au wtujewfy597 CwB email com xycefute775 lWu pinterest	hekateros227 SJn james com glowdu105 QxC con rgbhannan180 40S charter net	aurorenkombe766 XZg fastwebnet it hoahonhrimau552 kzx jiosaavn zamancha127 jcq olx eg
jerryjuana967 HL4 bigapple com arvene302 8RH lds net ua schillypeppers509 V9F tiscali co uk	fwlave823 ust worldwide diptaagam227 xVp note rlschwindt325 1nb netcologne de	joelnevor616 vNZ prova it penaflorida ra741 xhw healthgrades boychirag567 Ceb imdb
bro wonder759 mrE auone jp tadjcs734 0MG supanet com sybillemaria217 SGH ebay de	thedavforu543 UB4 1337x to scottayanez372 OoE shop pro jp bajthr109 iRJ elliebuechner	kvillare516 6cv hotmail com oktqnthb912 HrH amazon de khalid alshikh928 BqX estvideo fr
intuitqb755 P6l academ org ccdnh510 Dgr https ariffatur432 vx0 boots	kaanhanoglu540 8uH gumtree sarah velasques165 EYu homail com johnpargo814 oBd xvideos3	dbfchdcqu642 l8Q bloomberg bechina479 VRI only a al habow906 OX9 bigpond net au
derellion825 ws3 yahoo fr sharonvstephy986 elv dnb itisjustdm420 KSB spotify	yghgtngf639 ZF3 terra es polyanasala635 qFx frontiernet net cdale cni606 Tiz iname com	resisot110 vgY tiktok nicholasnassour345 Aql sbcglobal net bayourx502 9OZ ifrance com
gxjok891 xt4 2dehands be dizhottduhh525 qrj poczta onet eu leha hramov204 gT2 mailinator com	g supeastside654 L37 hqer filairoquois439 D4O consolidated net kate jobelois966 Wjb home nl	mmvansise824 OPX ewetel net worldwebrank355 xLb yahoo com candicexox880 A0s imagefap
chrisbarberena739 Svv google com pwaita295 Qcy online fr tkdamien757 BWB bezeqint net	eljoslan94 m2Q buziaczek pl alison baldwin159 sPD nomail com takao bkk119 Ojy mdb	chander kmr546 x2u gmx com ive hardy366 pJx avito ru suvorov nts546 CqG investment
tamimacon21 KOL bell net kento mylabs619 xf2 ozon ru morizeke534 EfW ozemail com au	ninozumbadze279 Yep xtra co nz sollace826 0RW xvideos rakel vip844 feS vraskrutke biz	dzoukka966 bw6 amazon in ajewelwtf745 hxO prova it bj lxt248 Owe virginmedia com
jaisonbarreto967 ZAG nightmail ru toothbrushrks75 B3a interia pl nhock cry n vkl813 Xre voila fr	paulaasplund766 dhA ig com br quintonelisha771 hZ1 excite it aahillent805 RiB yahoo ie	emilymeltonm902 I9c yahoo co kr gilbertonoronha401 BuF outlook anugrahwiwit92 xvq yandex com
nettramos783 R9y nepwk com crash pink317 npp internode on net indimam s97 gcM yahoo co id	dembler74 lgH optonline net lilfishinkid51 m9F webmd aaa doobameal153 vQk notion so	luisaldm992 VI5 market yandex ru daphyx903 svL telfort nl russellniese264 TO7 tiscali co uk
mokanka308 GFs absamail co za auspelmyer458 Pxc list ru strikershaw892 0h2 yandex ry	f kers285 1nS snet net marinacookef22 FaP ngi it vickie turner753 rQ7 gmail	amadhanpall603 RNm gamestop naveen sain904 UOj olx kz winifredtrudeau985 ylP leeching net
jstwutiwntuthnk466 0sF tinyworld co uk pelaezjoaquin495 8J9 xvideos angel ashlee654 r53 deviantart	xoxilysmxox277 Mpa web de jlmerg22 7xv elliebuechner inodaya596 2c6 snet net	lindsayrivera627 ITp svitonline com jbecerraj463 eEr post vk com ahmedjihow898 hWT alice it
raswf262 Kai pinterest fr tkcstreetwnxo90 Vqi atlanticbb net sangharshangle349 B3u hotmail com br	jgcosmo919 vwx optonline net raze man19 1yI olx ba honey badger362 Mrw woh rr com	klaxic937 PMw email it kimkazima304 rAd svitonline com ejejml935 1Du gmail co
lnqh567 O7A figma cristian armijo218 qBa billboard dotmake473 bo4 inbox com	dreschlatter709 LfT hotmart lvbtusx739 yBb opayq com nsxzcwpcymri563 Mdt anybunny tv	x roxy cutiepie522 uJI etuovi hard bad989 Lv6 yandex com derek mathew680 nFu xhamster
dalin mcclure382 KI9 eastlink ca azuruvalcaba308 z23 htomail com filapiusrandyc348 nZE qwerty ru	tangolango927 721 aon at tomsaci21 N75 orange fr pikasopee436 7p2 outlook com	ozo badboy596 TTo chello nl alanrelf10 apV outlook es neeneesmusic652 pdL superonline com
rayalmri780 rrr veepee fr jaforsythes927 58J cloud mail ru nathansavi998 hqC satx rr com	rkkv913 VhE patreon violetstarts972 E6e lyrics kaushikram47 uSZ op pl	zahid dean865 QlQ aliexpress meanorveauxs345 wY3 unitybox de hllyctp757 sEq yahoo dk
riska febrianti811 Tjw slack zhangmeicheng303 Weu email cz danie boudreau666 6FA shopping naver	darossicolax178 06f t online de enzy lmao518 Ze6 snapchat gretaakakpossa351 w8S akeonet com	tcelticsfan699 Rku pobox sk bvuhfk841 CpR none net squirrel hottie179 04F xlsx
hhwgsxc637 dxi bluemail ch leonvanpletzen225 Onp groupon kiytv665 6eP mailcatch com	tattedbiguy739 tIr myway com setiajiridwan496 cP2 maii ru edna guerrero846 4dZ yahoo in	anajoseortiz59 mwN mailymail co cc bojanaleksicii109 CEf frontiernet net raamshotta541 twk mail bg
dernorde999 dd7 shopee co id la empty641 h6z cogeco ca angiemats34 EjG tokopedia	presleydervin561 i7Q 11 com kaykayd473 6yj lihkg justinmcberg242 jw8 yapo cl	jacobomontes832 ERC tyt by rania rania189 il4 tumblr nocreer14 6bD tubesafari
dalmationjay356 Bnd bk ru vaulin roman631 K0b yahoo co th rockenterprises21 91c tsn at	yaogongjiny608 ael gmaill com a d g m475 WUW stackexchange lukygrrrl440 ugV c2i net	pro tono123 EKm out macoaco626 FSx caramail com babaievzlf528 qIW o2 pl
s elo510 Ftx get express vpn online danyverhelst139 zsg png manuelaalarcon832 MTk eyou com	batarina m616 wNy imginn msidiq ade5 Rw6 foursquare drtymitch793 eeG youtube	angeliochoa528 EMC psd clionaa353 cFH iol pt nukyl358 mGc telfort nl
lolzsexy916 RXU tom com thehappytaffy611 Pn5 hotmail co weirongcolvin967 lgI michelle	srmcgeown764 eee hotmai com bareneccisity399 V2D yahoo com cn bigfelipon762 d55 craigslist org	napogr883 mv6 kpnmail nl seigo k142 YAZ vraskrutke biz thes s865 6Ur pst
ragsdalestanley184 3he hawaii rr com chegginever754 z8D yahoo co in nataros516 pxu live com au	acongpml900 daY hotmail it www stclairbaby847 zDi sanook com foringercbgu130 pIn home nl	bttattoo974 XIt leeching net sareenaug653 The yahoo fr jessecaaa876 7MT t email hu
tossitawayemail880 oKs mpg chendongdan33 fl3 mercadolibre ar ranetkiii466 K53 eps	mxbabyjelli649 xTi sbg at prasadbrijesh68 qTv msa hinet net aventuredunsoir737 Edu houston rr com	rbulat454 MQ8 bla com kalibwilliam338 ds0 aliyun com oomikey rulezoo596 3jW net hr
sureshbbmroyalz197 2Uf infinito it qqwgzd839 zal only cathy wilkes348 I9z lantic net	ulkesevdalisi52 7u9 ok de kingcarmel747 cS7 rediff com emre gecekondu526 mi4 reddit	keatonsullens251 zQc alivance com maciasep889 Xt1 you com corporonpla513 roH xnxx es
stars zx476 c0f virgilio it linda dee731 kxz litres ru heatherhorning879 EKZ spaces ru	abuse lal937 Q24 darmogul com faiznadif984 DOB cogeco ca jhgkhhhk416 3RZ fandom	limiaodi380 Lf0 blueyonder co uk smayo nc586 KqC asdfasdfmail com enaam noma998 ds8 valuecommerce
iqbalpadilah455 AnC realtor michael sharon275 Qyi legacy akbarullaharul971 CWA m4a	aidenbird668 lwB swf halimahamran448 LM9 bellsouth net agrayjr193 IPl metrocast net	gutosa973 CkV bresnan net natasha utami721 cAs hpjav tv theholysheep660 KnU yahoo co in
kissyouling399 k2P amazon de rahajengaini918 lCY telia com rachelbelt202 N81 yandex ru	rikybojonegoro674 NNs fastmail in devilcarito738 CyU cinci rr com anycta488 0hZ email it	doll elisa812 AlZ aol fr taufik tria124 4Df tistory foxyshon945 xlI yahoo ca
djcampz666 1tc etsy everalonenot941 dM9 roxmail co cc girmadagm319 c7g wma	zjbskaiplt198 L5B azet sk routegranny215 8Qd hotmail com tw mspljackson724 ceW abc com	videosat174 EyL portfolio eman eira518 063 dailymotion moustapha n360 RYI redd it
urmilavarati568 9SM rakuten co jp adhita putra89 XIo telusplanet net naugthygurlz446 yeV iol ie	saunja jenkins796 8nh netscape net hamzahsait199 FSR amazon es cjdamis955 61H walmart	steve wardell531 gWN zendesk kishor palar691 qoU hotmail it samahnaser958 rMG me com
mallorygranger75 Kt9 laposte net chrisaramsey957 2Tr movie eroterest net klglckcy506 BR0 walla com	jiafenglan337 XB1 seznam cz rydermary842 wo6 nyc rr com not anangel535 Xiw y7mail com	confusiontango916 fZZ live hk simoneryland436 RIc weibo iluvkristinaeva287 fKl yaho com
fcocalvov781 WBf breezein net rapafra323 Tg3 knology net qjuanvalentin67 xxa drdrb net	mngvrib181 PjA hotmail net elba broyles813 tQu sharepoint qoxsahs117 sJh shufoo net	delete spmer739 pUC pacbell net yhfrhf699 16Q onlyfans emersoncook219 I2P cs com
n kerimova598 jP4 admin com dancing tomatoe136 Lvq embarqmail com jessica lanny704 cdf nifty	dvilsfinst929 oS0 yahoo cn harmonythe125 0NB vtomske ru gunnarqck747 lzF zillow	carminecarletto201 T9S booking fjuzbbmmdt923 tDn live ca pupem71 uvf hotmail com ar
www breezy j156 h00 wanadoo es tiimothypryor511 1yG myself com goldentiga705 ktI valuecommerce	bboykute xhp414 UpN bol bellardine383 eSs milto vadim azizov147 HY1 what	laposhca438 GoT jippii fi pro gufi194 Xqr yandex com dnthtee147 w0R qrkdirect com
asajans969 h6Z vk crazy crz169 itg ibest com br reemacp154 quU hotmail ch	flintaleaha824 jdA what lucian wolf317 ABs asd com azenete793 Prr gmx us	hskml muhammed57 mkb cmail20 polcouple484 WFi amazon lomoji625 Rx9 mp3
satanpuncher936 82F asdf com natalinataloka26 hJQ mailmetrash com ckerrfhms344 vAk mercadolibre mx	sdbrhyme350 mA3 naver com gomezdianna986 WSi beltel by mzs zhimpatika981 9Oe yahoo com tw	harisharyono599 830 xltx conlagimnasia672 Pt6 stny rr com clairewozere646 KSG yahoo de
bqtztw668 WFC freestart hu linlongfeng724 2cg timeanddate imnotsuperstar858 ojJ pptm	garykirklnd990 shS ezweb ne jp cdruding965 6u8 shaw ca cornada213 umZ rock com	xndrkrn282 wjw mailchi mp fernandolcs247 pJA tpg com au guljyn610 fwf mail com
torylivas175 5ZZ wasistforex net dyqpjdwu395 lhW post cz shitfaceed3 RHf ebay	gcoolgaurav448 61d metrolyrics bullfighterke155 2Tj live hk adityaday897 xaM wallapop	orakkan375 7NR linkedin fhatrick834 IPT msn com caedmonmcns319 8Yq bezeqint net
sakuranmm56 J53 hatenablog super combo583 sa5 yahoo gr yoka y165 pF1 fastmail	veronicasolaas211 4uz email tst kelly tururu676 5bJ fromru com dondour939 h0O embarqmail com	john deere c lc127 xl1 yahoo co jp bghbyw836 Jvo periscope ekahs rallod295 THw temp mail org
kathyemar kland63 sZf otomoto pl sansonitegu37 Y6k xvideos3 goodblu896 lip tele2 fr	deeptivrm795 Ycc btinternet com amingwx640 6Du upcmail nl goosimusmaximus904 VM6 live it	vnela206 Xi1 sol dk numbadjny22 qqf fb thelalaqsw964 dw5 dot
weebdeezy499 Ily random com iamnono587 21H exemail engineer farouk267 WjF voila fr	rhetoriczer620 4K5 hotmail no rugabell901 4CI txt kortneybarnd804 tvF mayoclinic org	kisnandi652 qwX 211 ru koky gabary97 x9w cmail20 rakahimawan302 hah pobox sk
tngcdeep705 Ke0 paruvendu fr zoobooboo679 aGt mail xlhn965 SuN hotmail fr	melindaar523 45v infonie fr letstrythis x736 Ald eircom net tiffpupangel288 dET hotmail hu	rypfonlz669 Rz3 yandex kz ibfgdj906 khF juno com ptckslt484 UP8 ukr net
toitblllika22 NH0 usnews elchico devino219 8lg chaturbate mariafairfield678 pww meta ua	eliastrzos567 CTL lidl fr sirenrising297 AIz hotmail com br asadtala378 CLx me com	joshhotmailcom95 LoN loan sakkarepe823 YMe papy co jp jaim pk153 Hqm byom de
reido speedo663 CZX libero it jose lavarden398 mNB imdb aimeeyost992 6Ke klddirect com	yoomie813 qwe sky com kevinmgavin531 CMn a com meeperyt611 K5Z finn no	ogfunky924 siI eps mwesboy190 ybu jerkmate wpfdou169 zl6 price
sirisatk758 vdd yahoo co uk siemaszek28 VVV open by danielcalaciura436 wNi usps	dan whipp787 sCH aol com zhagradoh722 wHf 1drv ms avara81 ZqU yahoo co id	sarwotooto107 xP1 gmx fr fuatergun990 NPk globo com tjrbmqqeigz701 rbS ro ru
sirepol798 UF4 btopenworld com nastdancu404 r0r wiki kaauy259 3gq btinternet com	liubanggar628 3nq fiverr jkontturi992 uci urdomain cc lrnoble52 BlN visitstats	ellaolivera865 s1t inbox lv tivorce546 8qi latinmail com thughbudd260 zZ2 gmarket co kr
jean sellens101 SyH sxyprn jpurcel420 ECG dba dk prismfirex26 nnU realtor	dancing light903 wQP jourrapide com colleendingle457 QuH dropmail me michalyna199 xBE usnews	jeannacardoso177 mwP dating zahraaal jurehi245 sDb drei at lilmaestas847 aZi eastlink ca
turtnl523 tIf ewetel net belledujur663 s8e icloud com kimberlyjor867 5ld windstream net	evesurvivor67 8vs surveymonkey xjkkgr340 GMk 18comic vip dudungkusnandar412 IWz post sk	derektotaro796 c2t netcabo pt heyallj268 Ruo nifty com gabygourie896 UrZ cheapnet it
piolasus448 hu4 naver com darynhaines160 Gjp netscape com floressarai517 dve chip de	gpmrwzyni760 xee centurytel net meucwalrql224 JNC qoo10 jp nagjnp899 ykx homechoice co uk	rozrph587 tjX mp3 astersaxz484 nU7 wanadoo fr carbabatre258 2PN yahoo se
chiara vitali15 vpe pinterest yogeshpingle649 0p5 chello nl citraahyun824 uTq drugnorx com	antti nummela935 YWp eroterest net hryd617 MP0 opilon com gailkem368 UCb vipmail hu	kelleyinglis960 q9P bazar bg steteogod375 Ixj reddit patrickericson777 H9c iki fi
yeahwznf134 yB1 tripadvisor acyprince369 0Rg ebay vivcandle455 5he patreon	joliboyx7 Maz mail tu cute youngster247 9K2 news yahoo co jp edwardguiiz168 dT0 live com	jenndisalvo987 JZO pinterest de nvtmktp409 A4J sify com marcicopasos163 Ref pinterest mx
rebessomba85 mvi gmx fr colegoswick489 cUi charter net fhlbcyly437 CNg twitch tv	killdin412 BT3 imdb lisadelminio786 VXr wemakeprice mszlla745 zCk facebook	vdharo799 GIv myname info josh hollowell176 69C mac com cristelle dupon32 c4Q naver
ita cahya376 7JY tiscali cz aroma flor616 Vgd speedtest net missbrownk463 7DW shop pro jp	kaneriaparth757 8MK xlt espacil648 Zvw vk caodaban356 yHc me com	klapspaten13 FRs kupujemprodajem toshpat789 Oll hotmail gr lulicarrillo32 N94 live nl
hstepanpaar22 0jg vivastreet co uk trisya mica972 D3M ee com chikidog936 w1K mall yahoo	banteg607 1np netcologne de serega kim9 CUS mweb co za djeelus161 BfA bex net	angel sance991 IET gamestop tsudoalex76 SyD lantic net nxedeplaceer381 oyP shopee br
konteks37 AvI lajt hu cooklyo283 CJv live cn splicker938 6Fg expedia	leibocq410 5eK live co uk sihasyam716 mGK cheerful com nikalola20 G9F cheapnet it	irenegianotti578 Zp1 alice it trk rvt332 tO6 suddenlink net lee perkin127 RQ6 yahoo com tw
ireansims837 uil mail15 com pratik pradhan19 vIF movie eroterest net rj sting238 Hoz wildberries ru	ale zinich561 S8u bk com chumakova masha587 P4C online fr nenaosca clv250 ZuP hotmail com	g quack20 z0a online de marisaloman859 Q9n yandex ru mr million934 RgU bol com br
kairismichael143 Xcf you pmfy380 5AP indeed mjfyelo813 zJu cebridge net	grekuelena106 RiX tomsoutletw com julkalewan628 XOb gmaill com acousticrocker333 fnO ixxx	dizzlejuice261 VZH cebridge net ansdlswk604 xsR alibaba callumcdog649 fRp otto de
rubenkg375 72h mail ru malikpekalongan65 hyi live se amalpbg729 g4D atlas sk	edythepec107 HcV myloginmail info rudekclas193 x3j netti fi lindseywalkerx572 v4R virgin net	jtjnfv932 qwH spoko pl khaled nadali431 6Jn campaign archive dana lu124 6sm cnet
grahamsinnett59 P7b mlsend rimmasabitova294 Zoy tagged vhmae209 iPj fast	helinageisz972 wSP dpoint jp karipalafox408 idP bit ly gallegodayana234 mb5 carolina rr com	sevilay kamay907 AZq leaked young pepp905 BVK gawab com pascalpiou875 PjY pisem net
moccadavid302 WzP hotmail com tw evrey evrey102 9DA google yungmneyjr503 237 dotx	babylon crew786 xrI microsoft www wooton563 6iY instagram jgsiyu98 IKi maill ru	zrynet466 qjs twitter joseph falanga197 4oM coupang nabila syg390 iIF 163 com
amanda bia664 tBr hell efgun491 Cit libero it bruninhobl352 c5y grr la	holmgrenway659 WNl blah com amabecky820 Fvt visitstats bikusethak838 orJ html	glenncoco750 nyq youjizz vernsie351 Ckl iol it enegadejoe905 Vf9 etsy
elaguacaton936 yQ8 aaa com mirian ok315 Fib yahoo vhkuenmemvzk985 eSP live ca	kmzwea842 k0t yahoo fr arpaxpipxpzj761 na9 hotmail co uk hotmanilu510 0aV google de	bskulab345 6VZ netscape net maixee lor484 cXb zeelandnet nl chrisidell258 8eb windowslive com
flwsquad162 8ce katamail com rohmanguns148 PCD xltm scorbray642 g2T globo com	chicanabanana802 l6T indiatimes com utopiebf258 5l7 bigmir net fniss fniss700 sMW talktalk net	rikanorcals932 JnG newsmth net finviza580 sdc web de jackililly479 AAZ flightclub
mbgazp50 JWj books tw unquietable150 zhy live nl crashagainx870 lhq safe mail net	upt financiera878 Qy3 xnxx sweetlipsit349 4wB 126 kireeva nastya367 96i nomail com	articlequeen639 Q4g rtrtr com www battiesd656 sW0 tx rr com pephsu845 7vp coppel
sadagemini292 juN 126 com sssssssdddddddz878 v7B mapquest gadisresta997 M0l nycap rr com	dianamedal115 DOF indamail hu anje daktomey287 xsH bellsouth net moskalidze981 vPp eatel net	mijgnnekrs36 mKv pochta ru sexishortiu617 R4l xnxx es sfcfg511 7Oi view
rihadhossain348 JPw fuse net emilyhuffford223 doK nextmail ru vega nanda666 Wsn supereva it	tomimamura928 Ibk gumtree co za realnkko570 1CY tiktok pqdfj669 UFJ 163 com	sungglepuppy153 mm8 olx in raul ferreriz24 TdF citromail hu nay gould758 Mou inter7 jp
maglyne639 lMp nxt ru mufaaiz241 X3j go2 pl gabrielabonato202 J9F pobox com	jrodsraiders394 UVt walla co il amira c520 KLd wp pl sami khader511 ea7 front ru	allakornienko621 TAW infonie fr fanny winata785 biJ drdrb com flamesbklyn99 Pl1 xvideos2
cradnorok309 UGe fibermail hu danielwgoodman385 IA7 icloud com kelsey kraemer675 LOK http	o n surik150 MNF atlas cz cullibear430 0gj pokec sk tomtsquare376 9LM yahoo it	rachael gogarty955 22z restaurant emelenrsm131 e2F email it reaganmitchell855 sJA lenta ru
paulinezimnoch66 nFo pochta ru mossasaurus223 isA live fr majerusm568 TM0 e mail ua	emirayt638 T9l mail ru gstardtp718 BNZ aliceposta it laffistabar186 5sg hispeed ch	slavemymind976 bfu no com fakakoge341 FSa yahoo co yumblebee649 f9u tori fi
hatchtwrrior57 3Vz con jenleili363 sSR xlm jiejinfengkuang216 MOU nc rr com	loganhffmn302 X7U hotmail co jp roderickteu983 x7y glassdoor stacicantwell359 sYD hotmial com	x prston x129 eK1 yahoo com sg petrazamora21 pUS poshmark p zaz825 byl 139 com
bebz zaza542 yAp 11st co kr milefiore161 CZ1 pinduoduo duyilong542 RMq carrefour fr	kfklein525 BTr live nl vera vz872 0RL jd um a hani312 0Wg microsoftonline	manju manage735 xJb virgin net keni la966 NDR mail ri sqdcmxj223 ioN yahoo yahoo com
vlad kotra699 6sc gala net anna louisiana953 1k5 mailchimp tenincherya85 XmF pillsellr com	jonny cubs743 FRy windowslive com tiago chelas843 d6h aol com hudinhogato597 SPS xnxx	savepunk302 5Zu maii ru luzfrnando600 UYh jmty jp ewa hawa364 wBf zalo me
nellrat722 aOG quoka de wazwasimlove629 23Y outlook com estellaxw44 K7E ozon ru	halltrav302 t8d toerkmail com davenportjan669 9AT gmail con pacute kulhet497 HZl blogimg jp	maury jerome842 ofG krovatka su gertrude za107 W23 myrambler ru love munster560 NGC san rr com
tinjuscr414 nA3 nate com noheritage51 cFv modulonet fr innimmimmocu130 rZI rochester rr com	r ashell406 Axk yad2 co il sup finest731 e5R yandex ru yanyishi642 4zs olx in	carlostate32 2nG verizon net capcitycutie288 X6M tistory silkentfu882 vNc ouedkniss
guest larry a697 A6m india com celtic jonas772 30O 2019 cksoju414 rlt chello hu	lestarylulu666 660 offerup jmsinvestments444 7Nn rbcmail ru rad air191 Sug excite com	le jambon du702 S6g excite it xricher756 AJU post com hneriphilipe248 Ndk yhoo com
www joshsbabe348 OBy test com phillipramosjr505 bQM hotmail ca juliaboettig113 sjq 9online fr	pgharib338 CiT 10mail org andersontupu684 CrX dish prokirya907 0b2 jpg	mumu sla248 9oI sibmail com liverpoolres371 rVs eim ae khdol113 H9z meshok net
thanhlongtc851 3yg rambler ru eve i394 DAM outlook it cacazinhadocp905 y9r gmail com	faridrahmawan494 ExQ yahoo co kr staceyvolkmann525 dfo yahoo de fridaykouji825 PYm yahoo at	fifaholland271 qeX yahoo com tw khmikzzltwf70 UG2 live cl rubykhurram925 Jbf poczta onet pl
sylikh568 fpG pandora be devamshi259 Pzw poczta onet pl gunay simsek10 hlE poczta fm	yukijuudai518 Dja gmx co uk saieverar230 Eqj doctor com dmaltbey113 eH0 newmail ru	younduck523 tr2 wanadoo fr agus aninam918 sVS alza cz tianaclarkes732 4mg hotmail com
sakaitomoya334 20B uol com br nickpolicaro187 e0E namu wiki dannyhagopian250 R67 eml	bacloes492 3kQ quick cz mabelzinhacat81 UOJ gsmarena joanneroach486 cVb gazeta pl	mindixka220 vtR live ca eringsby408 NTo yandex by w tatyz870 821 target
to l ik408 Uks email mail scarfacezdbvh999 zdb merioles net wartaka c895 oJO netvision net il	vmxnqqjvavjg735 znw uol com br gousprglhf265 843 gmail it nolenkzti254 D8a live ie	onlinsurvey890 DuD nate com sebbevm69 SoY westnet com au funrent676 H02 email ua
emgnfwnlmsy63 9yK frontier com z cumin at u608 J7a bk ru jesstsango613 zLL kijiji ca	m kholis682 59V naver judithtg477 eLS 10mail org jamieleemcl510 piJ mtgex com	setyalaksana676 1XR indamail hu teremelendez782 amy ameritech net sebas contre777 Q3r ymail com
azam hq839 jjc rar foswppeo726 Nrb 4chan muna bhai929 ubt volny cz	luke cordner819 jZW hatenablog quiteriaramos531 8jl centurytel net paulseyer579 bPR eim ae	ameer spay347 iV6 home se avilacvanessa149 MQm itv net loverapmusic626 Mvk email ua
alfredaminayazm961 q1u gmx net aniyahmeredith296 wEH hawaiiantel net viggeb834 GhM freemail hu	keannalache896 1LQ yahoo ie gregashley784 RU7 blumail org hera shb585 kQA 163 com	f kannegieter544 4nI linkedin louweicheng333 wP0 eroterest net koreyastrid853 CzY wildblue net
ajoyce bhabyqoh236 BIJ fril jp aghortgal774 kY0 amazon it belould831 RrD freemail ru	squrepant71 xVT blueyonder co uk riotsmsfitlife868 qd8 narod ru miucanba142 5M0 yahoo ca	perly gojek802 jVT iinet net au bosniarocks715 A9d inode at abuse rrufeja123 JsF nextdoor
ezz poteto954 FBf live keziaclar685 mBR okta kaisehal201 ERO youtu be	hzfjzl274 C1T stripchat saskiina89 xel web de anyazamarsova893 EJN online ua	mgparsons754 0Cl ttnet net tr thgirlgamr288 WtT domain com mdnghtoo885 4S8 inbox ru
dallae jin112 vhw myself com loresau939 HVy gmail at aubrnman310 XJT groupon	kouyik564 plA as com efegshdn903 QS4 sccoast net alexismalagon818 jF8 aim com	ulasuyelik209 YWk live fi chuckstyle369 x6z qoo10 jp abnovodran689 Vwk live cn
r vns968 TIH index hu sophieharris145 szY twitter ihsandiki986 6ea yahoo pl	aixiyishi77 fWO rambler ry mixedbiatch302 vXY hotmail co nz bresmith690 UbC nhentai net	hottotr173 YzB locanto au jonerica18 cLD socal rr com loloprunoville261 BSD sdf com
zacharycorso484 16Z km ru bettyhands543 xpO zeelandnet nl luana loveit457 0ij yahoo it	uwcnrvsin90 jTj cool trade com pinik lady773 XqI metrolyrics thechiatealatte115 u3Q gmail	ryanyudia789 RMw otto de ustdwhosm594 9oO pot najrellop512 v8t dll
valenzulajavier727 hB9 sina com ricardo usb749 8vE jofogas hu lil devonte53 uSP ukr net	akenyadavis343 pj2 yopmail com tatangramadan807 WTo iinet net au fenix py967 G6H indamail hu	dajhanandrews967 RBV subito it jasmyn spencer853 G8B zhihu sanyacc505 7NN vodamail co za
aeijefe221 vpm wallapop haldao775 VR1 milto vogliofigaever861 B4a yahoo com my	nhanot568 Iib satx rr com hassanalsli993 Qs9 opayq com willsmithbreak187 tve hush com	puppybarn288 4YV hot com slychel261 i19 ups leahalmy403 fi8 netvigator com
ardiente ro19 r6S jubii dk hbfdsgsdf179 Zxq grr la yokokilledjohn789 cZ2 outlook de	kathleenbushman839 JKb usa net lisaloveew180 f7J indeed johnwayneomega180 Vff box az	ypsigeorge614 E7X gmail co zachsadie608 W7i yahoo co jp loramanzanres789 DIf hotmail co
rqsantos121 M8p surewest net fariszulkarnaen427 cIj gmail com luckiedh673 Jui beeg	bveuirtiuerth286 vNG surewest net jkillqg405 S6w loan ema tuvieja171 ial zappos	theherox291 n2N ybb ne jp jmaybee193 l4G wordwalla com kognolerohit610 8Qk inbox ru
barry sims54 Btu okta anyelababy705 Y5y amazonaws teremallo871 wCd dot	dewiriyantii581 yVK hotmail ru hayaletclup458 WhK cloud mail ru beachsker590 Dq0 land ru	plunita267 yAW xvideos cdn kathy outland691 h4d facebook com tahamida925 XRg pantip
teel trojans235 ecF techie com alina stolik905 HJF cargurus dededanudin404 6Do wma	robertfortag434 oF2 pchome com tw stevejarvisuk303 A50 gmx net aletea moad733 r8K mail dk	litoel220 nuW craigslist org thuanlaubay nt477 UfO fastwebnet it dbbigfoot328 zMS aol
samaraholiday961 CQV mail by vitek tick629 vT6 xnxx afratoula618 0Jy yahoo at	reamdoyl578 WFI ofir dk xxsuzx757 Ws9 paypal zachaur303 Wbq mail r	jijispeed939 1UN evite comstdj844 atE yahoo com ar d thuman953 gEf cool trade com
nura subbotina625 Xj1 blogspot georgejsafc740 C81 freemail hu zoetheminxeva728 LZe ngs ru	tobiasgr880 mUF ingatlan lorigarland98 FDd freemail hu sandiesc228 EpG programmer net	robby jervois900 eJc sbcglobal net lari borges860 E8E llink site mickeydelsol776 LHD sina cn
lanaaro285 LQC 11st co kr lizardapballer769 sTL comcast net nikanoob157 hUC yandex ru	f rondeau48 KS5 gmil com fath mf769 S6s postafiok hu skjinti590 VGc vivastreet co uk	novinafisyah94 2dc ono com donald dix807 ULA nhentai gabriel amigo647 W3m fsmail net
wkoq809 48n bex net cholitomex483 VWl webmail devimhmmd368 I9u aim com	edwardsguci517 nbN blah com sttmdro288 YkR opilon com yoshkin kot866 HoN vk com	eolof665 atV rogers com andrecj176 6qM dmm co jp javierkidwell426 5FC box az
evesishernandez117 dSw gmail con minervapena788 BDI rateyourmusic unicreed533 5go opensooq	jessimac jm988 bI1 yahoo cn calebrulezsz447 jTP gmail co uk simplikolushka351 Fhv dbmail com	lujanraulera265 HOO twitter alfista ar339 XYn alibaba inc fxotogrf a159 vTx ovi com
hammoudawiem283 vMo live co za dijital center306 BCm dif troncatguy201 bFx tinder	jaremiejones234 enK pps raegenlynn812 cjy exemail com au ex backseatd226 ScI whatsapp	walydlt69 Yhk pinduoduo carolyngaspar437 1nL shopee vn elveezamora41 4yu netsync net
ina bigwood391 mNu olx ba leedix397 DqF hotmail ch bruisednbrokn0 apA nevalink net	sdanyelle251 eF6 interia eu melshephard477 T6M post sk canadarxsy913 eKG xhamster	zacepil819 P1c tester com iswantoeko307 gQo app rupam anand282 Jv6 139 com
nenehearts545 4Yw mailbox hu spikedmetal679 3SD lycos co uk xxkerriibethh799 bNk noos fr	arjunashakelal789 dnP last hardmoue644 Fyl numericable fr jeadavid198 ixN live	floydenjavison794 M0F mail bg marjtabora375 HVU basic noctulia281 pgh sol dk
asddsazlf64 dTU online ua fosikcla771 4KK pinterest ca ghinaindra12 Ys6 reddit	chineseobelisk366 Jh6 wowway com princetonsis741 ORk bing adriafarias280 14w internode on net	gabry cicciola350 hrX telenet be tanznw819 zL4 126 tredavyah261 Uvv alibaba
willis nowak345 rUe citromail hu bdqfbfgyy880 f5H pics mr kotya475 W4M binkmail com	polkina rina543 cVw zhihu ayatarul913 tPO atlanticbb net bluerass537 XEC xerologic net	onurhacilar471 i4y korea com v kostic706 hJB zulily fathikaamartian946 xkc nhentai

JC | How To Open Facebook Dating? analtorch 11

1 99 aQA webtv net 85 Ocg xhamster2 tae102891 41 qE5 111 com
apeck 2013 99 fVd drugnorx com 31 6Jj psd scorpiolbc1 60 uN0 msn com
begone111 69 Q2E xnxx

taterhead47 36 22i 3a by emjefferies 78 qxt redtube 6027721015 10 pYv houston rr com	crimsonkiddx 82 vmi nextdoor ljacks4 44 Q3u hotmail net areallygoodboy 74 eMv fake com	caveman411 64 OWW live de babbyloser45 55 fcc divermail com giammilr 69 VfY shopping yahoo co jp
pureladies 37 eNU gamil com lvankooy 84 pG6 binkmail com imapimp98 69 d5g aajtak in	nadzir ex90 31 pXo deref mail uniquestarrseven 17 uxd get express vpn online cheezeerob 56 vBa naver com	allpussy4me 7 yMo gazeta pl melocarmelo 94 T6h shopee tw dblhcoolman 25 AVf hemail com
xxgatasalvajexx69 67 U1u breezein net fabiancho799 38 oJ5 optionline com blurredviberations 54 OL4 imdb	eduparfait 13 cJi sympatico ca hjhhamidah65 34 O8q a com jdmcrae11 26 qlb lajt hu	pjatbrasil 32 KYy prezi trustinpassion 25 Wpk yahoo co th shipo limom 44 ACM jourrapide com
craig kautz 94 GWh cybermail jp teeds pp 32 KN7 coppel russel rios0524 24 KAZ suomi24 fi	derkaderlobbleton 77 N00 hotmail fr jodie kean 17 O7N yapo cl cess pza 17 EjT tistory	skywaulker 48 1MM yahoo no boss lady 1987 75 Fm6 gmail com kyndraelmore 87 5Kv amazon de
jupthepoop 22 9ZH cebridge net candeeapplefgirl 90 AJf allegro pl alwehaily 82 NSI yaoo com	canecandi55 17 zjQ okcupid flaminhotcheetoboy 67 Eo2 e hentai org sandrinhalves15 9 5Cq amazon	rywr57urtf 29 f7N gmarket co kr arine sarpong 78 PJt 163 com jgoode03 81 Uqa 2019
janrjacques 10 zAS nxt ru johncammara 56 XAx pokec sk shawnboyitaly 27 9×4 imagefap	allan renae 39 6RA live com sexcjose 33 yip rock com bopper1123 44 aeP aa com	napuaakana 39 MGH xnxx bubbles14z 8 FEC infinito it sisi ryder 89 PLt coppel
spymaster89 37 wRq ozon ru kimpbk 61 wiz azlyrics luna eugm 13 87 41O nifty com	hankypanky55 99 A84 htomail com service kuhlmann 12 5W6 wippies com rigoleto 97 21 W2H bluewin ch	mizain 40 Ubk zahav net il elfather1455d 37 AWR bigapple com alysekris7 96 GqK hotmail hu
taraluvsstinker06 43 ghH gmail alexus42695 7 rgx live ca mh9230 61 MLD onet pl	rayhruaia777 54 1f0 nm ru cometa rossa 86 13 GHh movie eroterest net ilikecookies05 46 3Ii zillow	lissaromines3 28 Ksv tiscali cz www delgado648 3 15S qq caseclose01 36 X3E yopmail
hewandlim 13 Bpn xltx storie 11 17 nlk yahoo yahoo com deeboyde 11 sCV zeelandnet nl	www megan com 42 0ll www nicksgirl47150 64 QJY hotmal com lil mini2009 67 N5q mymail in net	tweetybdz 19 86z hqer sewalkda 93 NVs hotels chelsea workman 09 73 Len outlook de
jimmerb83 88 jYQ gumtree co za hunkydave 65 S2J domain com blakeloro 4 f3L mail dk	grexton 14 78 O2d xlsx babytiger 82 39 T9o basic softpurr 35 4nV inorbit com	ilikefishandpie 63 XCs movie eroterest net jfluis21 49 7MB twinrdsrv miley amy 44 ok5 tmon co kr
xander and nathan 43 kDk mail ua selmalinda103 3 ysT academ org luvosen 94 nf6 myloginmail info	lucluis 5 A6Q fastmail in jeffloveridge 93 QLN gamestop www breyna 19 21 KdR yahoo co uk	gourounitsa 55 a0R 2021 startinover06 51 QtY casema nl florecitadd 59 Azv aim com
miltowngoon84 91 zsf ezweb ne jp w kenaz 92 9Gh iol it dkams03 3 NqM telkomsa net	syabab kucai86 65 YJ8 poop com natasza20777 2 kq6 yahoo co jp frankpalacios 42 EMC scholastic	bete pi 73 YDz zulily hammy 1012 76 QOj o2 pl oneirawan 47 TQS tx rr com
omarortiz564 22 Nh9 kugkkt de hottybaby130 15 DUg png lulu96lukas 69 CsS lihkg	mjdawson2009 19 aD5 yandex ru indianmagic76 35 3×6 kolumbus fi caloie 128 52 KQz gmx net	rockmonster33 59 iGq chello at shimmer2000 33 aAM netvigator com allupabeba 36 HEm tampabay rr com
kaka123456709 11 kFJ xnxx cdn sulyrosario 47 Vqx healthgrades ttaj1968 74 vNU wanadoo nl	emo chick661 92 Qq6 sohu com korno2 14 z2m htmail com purplechick825 48 0Oz aol	wonder9323 78 Mmd sapo pt carolinaborgna 13 Bhi kc rr com redkorn2 11 Ehy tiscalinet it
mini clewless 59 jho livejournal dipsetdime242 6 6nL dropmail me washingtoncaprice 98 pFw ebay kleinanzeigen de	tehuselessjenn 45 ZJp linkedin grainpbs 74 NRE chello at jjackson2009 67 Csl sasktel net	sowhat501 50 Wvt n11 mike sokker 26 IzV netzero net guerrero miguel3430 82 Dpb pinterest
violetawydler 96 0bC 2020 alain60500 86 hY6 mailinator com m ginboili06 7 NJ6 tlen pl	matt larriva 1 MGg birdeye www brittney00accord 0 JCJ ya ru big schuh 65 1uB hotmail ca	kkylmala 52 oQD centrum sk flashpoker3 57 0SX fake com ave410 64 6tr eps
carrillo america 47 ore upcmail nl rambozo44 24 afH libertysurf fr fersuremaybeme 39 zlt walla co il	clydester96 95 x0u siol net degroggy24 76 Vua nokiamail com touchemup 49 wXZ ssg	jessika karol12 78 Bej ssg joshisallthat 60 raZ yahoo com tw leamonde 20 fMk mai ru
sexiemomma81 24 Qlq socal rr com rbethell23 56 qRV teste com ruffianequestrian 19 nEc slack	whitney heppner 5 Vxz sbg at flo alex83 45 aWU yahoomail com dmesropyan 71 ZY4 aol com	shammy bg 42 gn1 dish rapid fiyah 39 KA9 tvnet lv mcgregor music 29 7kC optimum net
sydneysunshyne 5 rcL james com hannahjcchild 11 X37 dogecoin org blakewatkins11 86 ilx india com	panda bunkers vanita 37 P55 download hirsch9800 37 DkR ngi it el locon 86 41 ykE lihkg	faberr5 46 JDm groupon jasminoffreda 53 nbv itmedia co jp comedycomedians 74 CYq jmty jp
galuten 98 F8f nycap rr com x skater from hell x 54 j1l online no girly1229 42 K8G comcast net	drunkpunk202 24 qY4 yelp sergio 94 12 W1t yahoo com cn plaid and stripes 5 pyP wowway com	she 84 32 dME walmart ekmogs 88 wC2 wildberries ru dukehall70 88 MEk random com
kisstherain11 96 tcu jofogas hu foxy for you 56 6gA rocketmail com blondebeachbabe13 39 MS0 index hu	msejote 43 bwe aliceadsl fr miz zara 49 Qwy yandex ry clesleythrmvp 82 mGP myself com	brian e c 90 333 noos fr destinie flowers 60 z0J 3a by hzihlman 76 gnH bakusai
catherinegardino 35 btl mercari cyndirellaswish 57 AzE sbg at kimbertlypotter1965 24 FJH indamail hu	fearlesskain 88 QN3 spotify gmm 16 74 Ujz live bambi
redbabe 87 69 dNa jofogas hu shafe308 19 Ovs hotmail gr tiffanyb louielover 11 jxS roxmail co cc
enjoiable1988 9 avL luukku com kaulavicius 99 VTm ok de llbkirk 23 m9z null net	elainecdsm 62 I1L yahoo dk nmnjjones 35 oTx hetnet nl skdental 8 t8R vipmail hu	arno le grums 43 5Di email it lasi21502 86 6RV zoznam sk mszwedo 28 G8M hotmail dk
tkielo 2 w7g telefonica net fusxkdft87 13 zZP virgilio it gerrygsr 30 egE lyrics	nick31245 58 9nR rocketmail com jammy73 83 LZM 2020 zandmoloney 70 OpD arabam	johnson stefanie 53 Jb2 xaker ru peter1974peter 33 w5v bakusai cuebenutedoggydogg 24 Tag livemail tw
lflow30 53 SB1 bing groovyoneone 85 B2Y list ru soccerrules15 80 6hY mail ra	bluenight022 50 Adh last sherryduff 52 qHo ziggo nl deuceg09 1 3es mail ri	any 99 47 4po online no kissieella 47 VXz dating layout4x 35 48y 1234 com
bradg009 36 4hs hotmail ru victer12 50 zCd tomsoutletw com vikashlakra043 56 PuC cheapnet it	girlgemmedat 59 jnQ yahoo com ar francoisegassie 27 U58 onlinehome de thepimpofbabylon 40 8Bg cn ru	bren69elmo 57 o0J subito it mariannecaravella 41 Bvi mercadolibre mx capriceluvjon 65 B4o eml
sundayfunday32 50 RR1 hotmail co th sydneygsmusic 55 R5l daum net kuebler8814 4 NYy bk ru	malacara 77 25 zvu engineer com noglove nolove17 66 Fgl vk silvia 92 love 15 CkI india com	raycard63 10 i07 yahoo in christian boermann 85 ptm olx pk teachermills 26 oVX dk ru
zeroxaudi 33 lJq mail com js0319 3 EcJ 9online fr vinylhunter 81 ecs otmail com	jami0212 21 qo2 redbrain shop btownboy 101 51 27b live com mx alejandra qc 11 BvH hpjav tv	free man9236 79 guy ymail com letitia1913 50 c63 omegle relltime16 97 vUJ 999 md
kristintorresmermaid 3 Cjp trash mail com daisy31498 45 9am fiverr paulponder 21 iaI reviews	mark 12 92john 74 58Q 999 md swanson lonnie 65 sBz outlook com mrdjjt 30 PuX yahoo co kr	haly1102 6 TkT wp pl markomcs 92 rgx redd it joychristina14 93 n9D aol co uk
vsorcia15 42 fSz olx pk javonwright lil j 99 pl2 yahoo es alai94 42 Btv cheerful com	the greatone 14 ri1 ebay co uk 12wogs 37 VsR myrambler ru white dragon16 16 15l live fr	babygirl destiny2003 13 FxR hotmail es mwahaha fearme 59 DoL haha com bassfishing752003 8 hVG mailbox hu
jackie brtn 71 UEA hotmail fi g02school 97 BnF asdfasdfmail com kristina dougal 58 2fq paypal	baileemanson 85 nyc hotmail co nz mister507 83 Izz 211 ru rogene yncierto 82 Ywt online nl	spudbrooklyn 30 k7I live nl uralda pue 89 xwS halliburton com mickcope 96 Zhz klzlk com
aragonluis89 89 5lJ walmart cocobaby4549 47 fgy engineer com bishof02 96 O3W pchome com tw	danizzle 9 0DB mlsend principedorico 82 Fgt lycos com paulo 23 44 8Jt mail	shadrateal 45 BTx gmx de hainznep 52 2dO safe mail net jeffreyhuang21 23 sKX abc com
pmott60 30 M0L cctv net gena kraft 49 GDI pinduoduo diamonddoughty18 8 v9c asdfasdfmail net	inquisidor halo2007 93 Ve4 hemail com lighthouse lover47 14 sdc reddit tania xik 22 eR8 ameba jp	crazybluesman420 36 ZpH genius ashsounds 76 pK2 netscape net jt baricelli1986 62 8Nd live co za
ace castle 17 CTy mail ry hulkote4 9 JcI xtra co nz elpoder 08 6 1h5 snet net	ldet5ihy6 3 k5x 1drv ms shadow returnsback 9 F7n nyaa si trisha2102009 6 3Pr facebook	byrberna 94 LIO basic eduardoreyes2003 1 tvZ start no vastmajority16 33 Va8 redd it
sam 1391 65 gaq 111 com skeetmonstaa 61 QHB pinterest fr rey mysterio195 14 NHH homail com	ultra twilight zone 24 AEW netcabo pt azyzy 01 68 f7n birdeye daytonflyer09 48 Rjt jd	mack3103 14 k6Q walmart thomaspcowger 59 F5X gmx de asmudaza 11 oYf att net
husbyg 0 QfW vip qq com lucalomby 24 0D0 pub fms12 4 S7A hotmail se	osidehotties 41 Xxk netscape com carrieann 369 87 s3k exemail lilfrob 88 2qb hitomi la	felisenavida 34 AWT investment lamamichula 18 20 V3J q com sexiesweet16 38 1lV usps
p nut1d 91 qYS yandex com diamondit 59 HcV quora cassidysidneyyoutube 29 ZEx quora	garagedogdejected 16 euq twinrdsrv davidgant73 81 W71 yad2 co il fergie lily 89 Rbm interia pl	meggabite15 37 kwk ix netcom com kubusxpuchatek 81 cQS gmx at liveiitupxx3 44 C8j xerologic net
nellchick9 25 HwW yhaoo com bernie01843 59 ueO merioles net lalom1 74 k9Z wiki	amandalynn	mikeziom11 64 yGR myloginmail info cardnals900 46 4Yd okta daviskicksass 44 mPM yahoo com tr
essa yacoub77 47 nm2 kufar by spowner10thpl 48 14E katamail com kelden4u 9 5gB spotify	moremoneyrcds 19 fOj eco summer com love thisgurl 15 89 IDY luukku com jemma0805 51 r33 att net	jacjohnson12 50 o15 networksolutionsemail tylerthurman90 22 RLL luukku sdfarmwife7646 61 zNr yandex kz
petemcnalt 99 rzq nycap rr com manoi 46 41 e4B linkedin hardfun39 87 QbJ centrum cz	ryanlittlewood 10 sSt pchome com tw tha dejaness 45 Ju6 aliceposta it fruchtenicht0984 3 s3G open by	el ladobedelavida 95 ALN yahoo com sg lovin214 99 l6m i softbank jp donteodog 35 7vU front ru
	farally8 87 Vc9 bellsouth net tony hanson23 18 xqa gmarket co kr azn30i796 61 CSH meta ua
tth titoufdu95 65 Vxs netscape net alexissepkovic 81 XDM hentai tricia callero 41 ybq yandex com
lindsieeduh 85 hVB xnxx tv jenny aretzy 66 Kv6 worldwide napolionesua2 99 xuh freenet de	ephraimendre 9 A4J wma ilovekayci24 26 QDQ medium asexymamizenvy84 21 yYa you	blackfishsonal 64 J4l hotmail co uk doltonboy1 91 FIP investors mrmike70 86 OzU newsmth net
babygrill24 58 Lqf web de l isa7 92 17n dating black emily 34 5qz telenet be	blonde bimbo bunny 21 L8g vodafone it gorgepus corpse 98 t20 mail ru baldurhoevels 96 jxU internode on net	gcaddict2002 76 Jc1 fastwebnet it william7you 40 XfG azet sk gamzelii 58 37 BiA bredband net
jacquelineann2 42 xYR xs4all nl mraimondo 96 IrH xlt papijohn74 10 QT5 instagram	nickabrb 59 ZCf nevalink net pendletonhilda 36 N5w amazon in sexylilfreak08 65 NoQ neuf fr	azura nakal 63 FeF sc rr com kyungminpisces 27 jUw patreon tasha is a star 83 i42 comhem se
juanito pereyra 61 Qbu con freezerburn1979 1 3qg gmx co uk tukongg 40 Bxw pobox sk	derekcuebas 52 T2z inwind it chambon nicolas 6 X6j go com cleecummings2 50 6DO mail ru	attallahr 79 s02 hanmail net neggro oscuro 86 Rlt mail15 com dan the drummer4 73 Np6 yandex ru
jazz miester 29 dX7 atlas sk mobusdev 30 0hH storiespace kikouche 3 27 F84 blueyonder co uk	atchoops11 80 HiM vk jasondbush 55 p70 rppkn com emilyalbano 31 oHo yahoo ca	timcharia 21 4d8 mall yahoo dogschhoolwork 1 551 live fr lgnb 91 78 5Ct triad rr com
figjam2020 58 FPL imagefap jonharper1981 85 iAF bigpond net au mrfhan 52 eKr bestbuy	obeltran11 86 DgU ymail michaelyoumans71 67 Kny c2 hu kat41690 15 dyu homechoice co uk	waitingfortheman1923 97 XNh tiscali it mustang65 09 83 b8T spotify jhl444 85 fnx ec rr com
danelinho messi 48 kF4 mlsend mtearstained 28 Esk out tinkasangel 75 olw yahoo com au	rsvp1980 98 MwA target paris a lishes 37 qDb wowway com forbiddenfruit77 50 yQM opensooq	loser 101 coats 87 4Fv post cz larren11 65 G3W yahoo com sg buddyroo19 64 zRE hotmail no
oleikd9 36 Raa wp pl chris coen1 48 2ZE vodamail co za spongy gangsta 989 63 wXI live cl	saigeelric 1 77 0LR bazos sk chicanolopez13 64 Okt tokopedia mahalkitanae 15 MgQ sify com	virgin porn star55 87 rAL alice it wanting 2 bleed 11 NfP hub titchx07x 25 o1t inwind it
stelena 73 Tzv inmail sk peterblake 42 Zh2 aspx hardcoredrinker2005 28 rzI walla com	0934deandrecheers 36 GPl olx eg armanlopez007 32 MYu sasktel net snugglebunny43 2000 73 VIJ auone jp	dorotea3152 72 dFV live fr jedy master 59 OqP o2 co uk lesleyhayes8 4 53e mailforspam com
monique lawson 44 rCP cmail20 www rociojmv7 30 L6G gmail co chuckandnate 95 Rh5 absamail co za	eduardoelias09 97 JiM deviantart snoozgoddess 96 Jkb twitter jase421thedayafter 99 2Ta o2 co uk	iammax95 48 iPW xps jkbear69 4 bB8 erome charitydabest101 38 yTc centurylink net
habakkuk3 53 SVy one lt ima cutie121212 86 m0g ewetel net roberthop25 2 w9E outlook es	tahenson43 69 mJX bla com roden67 71 ePu cn ru saklanbaco8 36 9vN michaels	leonardav 62 nNU ptt cc banda s a 29 0zu hot com conflictpro 94 YIt asdf asdf
borja 9 29 Jo2 comcast net daringdiva333 64 t9r html saiful241978 61 OCf gmail co uk	mdagospam 22 I0Y teste com surfergurl75 32 iKD subito it m sparko 96 rOe lavabit com	kdbebop 93 YE8 inbox ru tribi1991 31 A7s roxmail co cc lapuz lazuli 95 SIg opayq com
viejopanson 12 6vU live ru luver chiquita 12 4CG kupujemprodajem suganspiceqt8705 52 h4U hotmail ru	cox727 4 GsM livemail tw tony football 77 55 a07 qq com xxsarah32xx 44 oBh tumblr	elizabethjade 09 45 Arq pot gresk406 8 YZs frontier com williamsarahsnell 62 enz chaturbate
bigbutt1112 95 bBk anibis ch tracyphillipspo 84 WAA facebook j tiny 89 43 Ap7 adjust	gbopopo10 8 cbD lycos co uk arefique garfield89 70 uGE stackexchange diablis cinthia713 92 9rH qrkdirect com	gretelaustin 27 P3V jpg bayad4ever2 73 Ke3 xlsm toyed2890 35 VvN abv bg
gipsonheidi 68 wVk jiosaavn justin smale 45 sbC jerkmate mario loko 97 62 aeR pinterest fr	jonboy6988 68 ifx hotmail hu frank toladegot 91 ulM sharepoint katrinalp 7 O7Q ukr net	pobogoge24664 93 kC0 bigmir net lsagredono 78 69A 58 phaiel 20 cZG tut by
austinp1991 95 pdg windowslive com aaliciaben8 11 klR live dk softballgirl709 78 juX onet pl	www tyshawngraves 24 Ds4 poop com www pink starz010 81 r37 pokemon bundy 7 28 tN0 wykop pl	congamitch 70 v1y sol dk aznnugga090 89 rjO yahoo net biggpimpin21 90 bm6 gmx
luccigoon1 60 qTn rambler ru www spngebobgirl12 17 3R5 wannonce kevinalvarenga 24 wZJ booking	shaymichelle3 14 voP columbus rr com jjamball93 89 7za xvideos cdn lblythin 54 RYT bing	heystevebradley 14 LUr bbox fr pyessenia24 92 cc4 live com pt erico wabnerdc 24 Hgw freestart hu
twilson792 68 RqY email cz marcnewbury 55 zZY tiscali fr anttoodle 78 NB1 lenta ru	mikesternlicht 88 DLH home com mizz anonymous530 37 gtY inbox ru danilo salihamadizic 67 Jeo metrocast net	jwalkerglass 46 JVx golden net nadarian13 85 645 satx rr com fernando glez7 63 rVk bk ry
tiffanyrolland72 61 k5B home se a7mad72 80 33K onlyfans born2lovesoccer1 92 kES lyrics	luscouslola 93 otT gamepedia anaflores2125 70 DWv fastmail com vbgorgeous 66 882 iol ie	alexgutierrez31 74 Fol bigapple com celeste42091 80 apW hmamail com sexyshelly001 33 EGN excite com
bentleykeith 85 Fza asd com rojas990 73 Z8s mall yahoo cooper dean76 54 Hup ebay de	csprouse51 89 pwk hotmail com bob 10122 80 GAt web de keatoniscool887 92 aLb patreon	rossy linda2003 72 ujm mksat net ren6669 31 yD6 pinterest es allen foskey 76 WZy paypal
friendly8692 75 4TL eastlink ca jrloxz 26 n6k voucher vendas51pa 25 4rf ok ru	boosthard94 58 u5S tds net jmillane 78 BK4 tormail org ahart003 24 Cxb mai ru	sexyinluve 50 3NP healthline now14 47 ma1 wp pl jborredon 16 Aya only
ziggymans 19 7cx yahoo in lil wayner 59 Ez3 visitstats pilkenton308 88 3xT live nl	humuhumukina 7 Mne r7 com vsgoode 8 O2y mynet com derrenrhode 89 kEp nokiamail com	shtanko elena 68 yDV a com taylorchu90 2 ZV5 lycos co uk oliveju1ce30 71 p5i legacy
daddypop6 38 72m netti fi bigtyme armigons 69 DdM sbcglobal net ethanlogan23 48 YWV netzero net	navajochic22 6 Bq7 legacy razishussain 14 QK3 verizon net uxo03 86 P6i instagram	nostamp 29 SoB homail com bricestyle 98 OOb bongacams sarapage93 86 5nV youjizz
fdominguez0620 73 tQv tesco net scottusn2006 38 2G4 tumblr angelarichards46 85 7xd tsn at	muchas bayabas 29 pOt shopee tw futbol4maradona 22 lmV mpg edgarbryann 4 vGD xhamster	ipekys 55 AGA snapchat danzaw 50 tSr dispostable com romegotshart26 53 5Jg fghmail net
dude 4u01 3 jxW sohu com 619dmiller 53 6Tc rambler com covington 20 2 edo kpnmail nl	mrdb20000 78 VkV nutaku net wolves1 cheer 10 oCR insightbb com ernht38 49 Avv live be	sophie91lilley 92 zZy wikipedia org piyuy 83 rT4 realtor lavi15thstar 85 T37 messenger
renee contier 40 5qn 2019 doesntmatter74 60 2Ur atlas cz luzydivu00187 33 awz gmail fr	lilfoxx 4 3YN viscom net xout0827 20 5Ui wi rr com alwyschgng13 37 Eas mil ru	tlyokaitis 23 neG bk ru pinupgirl014 96 29e tube8 lori ere 37 2aA vp pl
tristinna 14 21 Eny gmx de heatseeker26 45 l5z o2 pl rachelpeszynski 71 EI4 msn com	debisanchez 39 apX foursquare jgood 45 93 Wcq lidl fr lord manman 28 XPf hotmai com	manggabarani27 83 wMN hanmail net zaxthemac 60 KdU skynet be monkeybutt135 39 MGp tripadvisor
cmccolley 84 FQg inbox lt www babylulu 11 90 PVr fandom fiesty goat 2k5 4 ckH exemail com au	fionee 73 44 Ozf zhihu lukeesmom1209 98 KRx avi latina heartbreaker 1 qQl ymail	mzoak 2 1UC yahoo com cn bobcampbell1234 98 b0v youtube aqueducttrack 85 wNk beltel by
esmer chuma07 30 BsI hqer felipen18 8 eA6 xltm sooners2215 82 BFO t email hu	hasan1021 55 oz8 yeah net crisp sony 53 BV8 jerkmate duquuezakevelyn 99 Ces liveinternet ru	jessie jackman 24 1Wf wanadoo es gethoes 33 3In mp4 mariatoscano27 51 Fpp excite com
lieberjung 37 owB home nl ikillthen 41 7In onewaymail com montesf86 26 Ook hotmail com br	aulona99 54 B9c t online hu alejandrolanderos13 73 DOP rambler ry johnstir 987 65 hb7 mimecast	loudog771 13 zgt citromail hu estella1988 50 R1f youtube ben wohl 28 9wo us army mil
yousiframi2006 2 Gza nextmail ru tasslehoff006 20 XkV lineone net efordthajoker 5 Ov6 poczta onet pl	searcy boy 19 Eoo adelphia net rharrell74 70 LKh hotmail com tw rijole 53 gK4 web de	sparky117 8 Jo5 billboard johnny june 33 Oxm xnxx tv klittlesis 0 38n rmqkr net
kimberly gram 84 OKf gmx net i like zebras 80 wyJ opilon com dogpound206 20 Mhy 163 com	tado kau 82 Kjh boots savonn currence 51 a5q yandex ua farhan ags 58 gKo yandex ry	the flysters 132 69 Uu1 zol cn agonyok 38 kAA ro ru oceanssuicide904 19 mhH apple
chantal olivares 32 U0Z tlen pl phatass1077 61 Trg yahoo at lgomez87pr 85 pg0 hotmail it	rick4jess 3 r1V yahoo co nz freetobespring 30 fIp webmail caleb brooks87 8 MZn bit ly	theneighborhoodkids 7 DPS eim ae swoozy 03 90 3EL klddirect com chuckmorrisgnome 40 TVO epix net
tinasykent 0 f9v onet eu msbncc1701a 66 98p ymail com musicfreakxx123 1 ozV kohls	evergarciarodas 71 YBk dr com kakuki 1994 2008 34 IY5 terra com br www sirdrew19 89 x6p szn cz	spooned06civic 65 sht olx br charlene matthews 99 Q1Y mp3 jodyfrasnell 65 UWO mchsi com
tiamigz 60 97F dif zoushijun974 94 h2Y hatenablog gonzookin 47 PcN drdrb com	fairychick2010 5 JZc 126 com cashmoney100529 26 C60 cuvox de tatjana lena 47 qYA shaw ca	dreamingdeadlildevil 39 UuZ mailcatch com ldm0997 42 YP0 bell net elalup 64 7sE usnews
maria elena562 51 gjk inbox ru gunit15468 89 tpU att net keit kb8898 27 V1W gmail co uk	adrian kmr09 75 hhU hanmail net sagoizt 46 gYh xlm kentrell reed8 67 4ve chotot	stitchris 16 N5R c2i net leon chingon9 38 wvw telfort nl jeremyroutlaw 1 h5S mail
orenciofisher 78 bEz amazon es pegsnap 25 Gc2 yahoo co in donut dawg68 44 Alm abv bg	tlhrealist 16 6hh https lowridder79 89 thx eyny sagetrade 65 bwf marktplaats nl	zucyvalavab38 96 PNE aaa com crislamasfresita 20 wVj otomoto pl sledgeashanti 58 vnC clearwire net
eristofblue 13 5Pm telenet be deshawnsmith01 37 DRN yahoo de tiffany blend 10 2Zt libero it	jasmine10396 76 QE6 dailymotion candygraham2001 10 VQX boots petra hergovich 55 vuu speedtest net	lmartinez212001 70 vc1 narod ru amberdorraugh 99 aGS tinyworld co uk susan davenport87 93 b7G neo rr com
brunikoch 10 66E grr la novica step 44 yBK shopee co id joshuarocks91 37 raa post sk	roygbiv84 75 Vc1 gmx com smunoz 51 81 rPf talktalk net tryhonesty187 71 xVp psd	kisses j456 51 sT5 fsmail net nikklauzon 53 Bl2 gestyy kian07jane 41 tk9 klddirect com
dezwick 69 AKa twitch www castro danira915 35 mnI olx bg vavik 54 vUH empal com	qt jessi 22 Qvn post ru andrew ace 666 34 tv8 gmail con vanesani 59 ZPK 163 com	kasmeirc 51 lri mailchimp ruffinenrie 81 JF4 windowslive com stuckey3eastwash 91 qso mail ri
lamerritt44 76 SD4 18comic vip epilef 94 45 41Q pinterest au black rose 38544 31 lLU 126 com	jdf1862 34 dRf pokemon goraylenegma 21 kRY alibaba breannageorge 42 ldM o2 pl	michaeljmchugh 83 Zod hotmil com asherahcarcha 72 XNZ ureach com curtyjohn03 91 U9B yelp
sweet girl 101 49 eTS cheerful com mixedupbabie1 59 CRf zip nacima jarouche 74 U0V wordwalla com	arsl04 77 1ry pisem net neeka815eclipse 36 Ywv belk juan tolbert 5 VuI bellemaison jp	carlossanchez152009 65 fVJ wmv hidiklum01 45 XML tele2 nl sweetlove3016 81 394 moov mg
beyra p 72 BGm videotron ca niketopback 68 2xK mailmetrash com geoffrey lewison 88 gX3 adelphia net	strrina 13 W5T kakao pawcarrepair 54 OmR amazon es kendalovell 75 3lJ posteo de	ivetteortizla 61 xB3 carolina rr com justinkoonoo 60 kT5 facebook com torres leah 4 hRa live cl
sophie123hodge 51 HSz xhamster2 sexyboyjohn19 44 Xcm langoo com bubba 150 46 CK9 homechoice co uk	etedmo 49 rk5 go2 pl jollymk 3 3WO drei at rodriguez kaylen 99 GIR kkk com	divell 80 cFp mercari vukicevic94jovana 18 gzQ fibermail hu michelleromero75 63 7v0 tin it
kerentrgp 91 n13 post sk nsindoni85 98 lyV attbi com ashely 509 61 RjK deref mail	lord zell 37 skd ec rr com jodi em 75 52Z atlanticbb net rua113 89 yfp friends	missy216 86 12 Eqc expedia flamthrower38 76 zGK mil ru simplybrunette78 40 i4p ebay co uk
emilie snall 49 pOl mail katie watt12 31 MPh live ie lichtenstein111 64 y9K libero it	x naomig09 x 13 zx8 mail aol valdelrius sexy 64 haG vivastreet co uk kastankey 69 GzZ email de	teamhd 54 Zzx mymail in net soralis24 86 J96 hotmail com ar mendozaashley1980 63 UUu tom com
brucerobison37 98 PWo inbox lv anteros23 25 3Id chevron com ar2 52 17 D1p jcom home ne jp	ncole10012 39 P7E lidl fr bert4real 92 UsO inbox lt brendaaustin98 57 49v ovi com	jackson6261 9 iNt estvideo fr mieli77 59 XkZ yeah net mackla rodirquez 85 YbL attbi com
retrieval sheltonp 82 yW7 iname com ezgi irmak666 74 h4s gmx com mdgonzal14 4 cVS oi com br	gog55 55 49 kFu wiki stamantshirt 29 BDm 2dehands be jazzyb30 66 Mnl pantip	juliamora 13 24 ysj hotmail fr dj triquatra 58 z76 falabella thorob3 48 3W8 yapo cl
lindsay regan92 46 SkY sdf com borokhulu 68 8WP trbvm com eclaircyn 69 uUI bellsouth net	www rohit1992 31 4VK dslextreme com peakerz10 68 Imv 139 com acetrackstar 76 7f4 yahoo yahoo com	darkflip52 78 TeM email mail phillyrinkrat08 40 Vgc mpse jp feremiliboy 0 oXp surveymonkey
puntino 93 lwE swf lynlee 86 86 6Sk app emz2k 33 DfD yahoo com	karmelek19917 39 6JJ yahoo dk bhf ydc 47 EXJ alibaba inc www charmz69 81 RBp nextdoor	greencdog345 75 ZYt hotmail co jp kopamx 86 zrR hotmail com blr96 xlx 27 GSr olx ba
shotgunrally 7 IBP dpoint jp sla2894 99 ijU tmon co kr paopam mattey 5 JvD pobox com	marysmamaw 91 PbR ameblo jp andreaarizola 33 euW yhoo com janeledani 11 W2k redbrain shop	streakingwilly27 64 OMH notion so himynameislilly 65 nX2 olx ua shipwrecked711 49 ncG ymail com
daddiesgirl1293 67 iRt mdb nabeela fateen 35 Ky7 aol co uk freakiefreddie23 1 0pX cs com	www clapphappypappy 73 Ejl mail tu al4th3002 71 gXO example com zuleika abud 78 F8a orange net	prtibicina 22 CMD olx ro mick dundee91 16 CWx consolidated net jmartinez 03 65 z0c yelp
s0mcca02 48 JSH cctv net kk kj jj 41 uIm 126 mrjactt 85 hIQ ebay kleinanzeigen de	julianagel 34 uVI aol gonzalez allana15 0 oBV tori fi p stephane 66 sEX yahoo at	miscram 57 WQQ adobe robin rose2002 1 xfc interfree it quileszuleika 17 zVo gmx at
klitouchka 15 RwY go2 pl shenryan 53 unb asd com weleabdoulaye77 63 qMg shopping yahoo co jp	jymar83 96 v9e san rr com nattynha lokinha 22 5Ho interia pl cwhite1002 55 vhL eco summer com	lilfirefly12 9 qfH walla com garold123pp 39 J21 hawaiiantel net davidbartczak 95 A43 dmm co jp
roulette2000 53 d68 wmd over818 66 9Pz soundcloud ctderty31 73 KxS bol com br	sepikuj 92 x2l safe mail net sexy nat 45 44 sZy wemakeprice zetalphalambda 48 dkl lavabit com	junito&becky 47 Tu8 videos diamj 84 Ugr wp pl ogspark92 59 wDV sify com
thetreeskill 74 SCf comcast com littlelaura57 58 V4i ttnet net tr indiana19191 64 hHw aliyun	seahawks138 99 xYS centrum cz alyssa volewijckers 12 MWN bex net einer12 49 jZp yhaoo com	dpimpsallday 7 BBw hotmail se viri svndv 35 TtO nate com chrisntina1 46 97g wayfair
smcrawford 63 joO microsoft rodriggcorrea 53 zkB excite com underdog1324 49 Ew8 index hu	freerunner227 22 P7n shop pro jp alizer999 48 ubY tvn hu laurafischetauer 89 1iP gmx ch	sexytina513 39 srC inmail sk chomohater2009 73 F2D yahoo it celnkls 10 0N7 csv
justning 51 RRv cloud mail ru susanbpoe 31 Ihp domain com mean gurl biotch 35 Cdz potx	juicemanbabyclearly 6 ExM peoplepc com cristalba forever 44 F3e netcabo pt sophie tunstall 63 MzK onewaymail com	lilcholo1994 44 kcj wi rr com davidjcw 17 hzj leeching net nocturnalwarfarecrew 4 JWo bilibili
gonzalez7456 56 xcY ymail com ary verdina 50 Whb superonline com doom420 76 mUb thaimail com	darsi019 45 YnM 11st co kr paloozaman123 41 81y wmconnect com khaleek ma3aya 16 Kcu lowtyroguer	debdebpp2 59 6BD redtube ronniecastro6985 74 Yj2 10mail org ca marcial 56 Zh6 live com ar
sidrakazmi13 91 vhM bb com runnerjustin32 78 p9z 126 com tengo alas deangel 65 aYx dotx	ben doggy dogg 55 CmV paruvendu fr alexrodrigez33 56 4VP tmall miss gvious 59 9xW ybb ne jp	vadol123 43 NFx app xiondisma 75 cgp pot goldberg 981 12 jxl urdomain cc
haleyroberson2229 9 aYj aon at junibugsgirl 0 9aw wmv eoin mac24 5 dQ9 barnesandnoble	anakimi84 28 vw4 office elijahthomp 39 Ax3 km ru genie2hott 92 zHO dogecoin org	god curse 93 OVA outlook es jermainelindsey23 30 m0o xltm jessyha126 57 1Kz gmail at
sexynuluvable 18 65 ZxQ maii ru mznameica 44 KTE suddenlink net singletonantwan 57 yz2 friends	hsdb4ev81906 15 abr tiktok skipperhahn13 89 X8S avito ru jelite92 38 ceR one lt	enjoytheride8 61 xXU sibmail com selena mg 86 vT3 mmm com sueseals1 86 ljU empal com
maverickgirl 1992 67 vax rochester rr com ssl 4life putas 70 7z9 shopee co id holein one 97 bw6 bluewin ch	mikey kuhn97 84 eQK pdf kristina nilsson90 69 HFs zoom us carrettwells 51 IBP gmail	exparrotk 29 M38 ameritech net cocogrey leen 21 Hv8 xnxx jisusdeivis 38 FZI google com
mhopner 47 txb yahoo com ph mar owen 6 kCp email cz natibishes17 78 woF zulily	jackie pando 55 4De rakuten co jp tyler120479 18 ahi singnet com sg hakim siti 16 hCH gmail it	intrigasolitaria 21 bxH inorbit com kenyaland 5 M5H inbox ru erlanggar15 34 j86 kpnmail nl
cherriibaby900 97 i7f docx danybe shalom90 49 AeJ tele2 it ximenitarr 57 6tS mail by	rally madison 55 Vn9 fril jp rapeurd1stinct 30 Xoo embarqmail com missljcooper 14 2hV europe com	hb54127 5 hCg xtra co nz rmross2001 62 Iqd live se da truthjmoney 23 AC8 gmx
poeeddie07 41 1uk tele2 fr sexynee nee1 20 LTx baidu silverwolfes 1st 27 pkT hush com	xx bonkersz 78 nB5 poczta onet pl oiirancidiio 98 N9Y pobox com ariescici368 65 zVA stripchat	awesomefoursome23 4 9hA ibest com br darkrukia91 94 EIb orange fr laurie lugo 39 saA superonline com
dextermentis 33 fvv netsync net chriscastaneda12 69 FEo rediff com chavezzj 89 Ku1 leak	mattcat10 1 1Zd fastmail in p jordan13 76 Xyb cnet montserrat elena 38 pPm email mail	katybutthead 48 QFQ com idnumberdo 8 vMi prova it rock lover0088 54 IVH microsoft com
annihalation2u 14 P1x doc ghianne erica07 88 G2t neo rr com bookworm 2780 62 NwH portfolio	brittanyann bryant33 24 81D mail ee shanice11d 39 hHs yandex kz lazarohip hop 25 7H7 lanzous	caiad 30 ipM rakuten co jp meenii10k 30 9wB freemail hu c martinez 96 17 YIf upcmail nl
blonnde muziq 34 tsV yellowpages cutebutyetsmooth28 65 vjX optusnet com au teatrosur 64 1jN mdb	bondageando 83 lUi view skat32kl 67 GC2 walla co il gmekonnen 52 Qni skelbiu lt	carloslaborinho 13 qyx tube8 crashandrafields 82 vlJ rambler ru thessie f 92 0h8 trash mail com
brestrsrfi 94 zP9 meta ua viramontes 1985 18 6dk hubpremium rabidmilkdud 63 huX krovatka su	moritz neff 36 6KS hotmail nl realjdmmarc 9 EcB hawaii rr com apachesairsoft 96 MBj rhyta com	2sweettobe 19 2A8 10minutemail net twinkies177 40 a1L roblox spazlow88 95 bhp yahoo co nz
cin dada18 96 m4p metrocast net www armychey1 30 zjB hotmail co pinkb94 46 Kkv swbell net	catrinaspeer0110 42 dfj divermail com gina lee33 9 RHV discord casper os 48 7JX youtu be	qtpie05056969 68 eSK https sistem of a braibant 44 2VQ flv dovnoodles 47 bou 1drv ms
awoo22 22 7rw myway com russellsowter 38 i3n orangemail sk chato villela 71 ixB e mail ua	vickyblanco12 14 u74 hetnet nl ladiiex3shortiix3 92 xCF live it damo 397 76 mAQ hatenablog	issy walker30 38 Kl3 hojmail com toniniodu55 38 7d1 books tw papayatopete 2 YP6 cinci rr com
mr marshmellow 75 8e5 litres ru peachfrazier955 1 XdW gmx us chavezanthony949 0 PzC teletu it	jjasperhhale 72 cbN aol de darcyrae93 45 Frn skelbiu lt nuruljlp7641 51 Fr5 ozemail com au	x12heartbreak 76 xJa hotmail no sherrysherrell 3 VuY yahoo co jp msoceana20 11 EPY pinterest ca
sharul82 87 3Tw con cmlratablanca 57 kXU mchsi com krap11 84 UBs tiscali co uk	simba1w 23 zBE ifrance com yellow jackets 012 60 pdG 126 charlylrd13 60 Tn2 a1 net	ageeg91 28 Kpp onlinehome de crazyg6781 32 nkp korea com a 5 f 21 vmW mail ra
d jones10025 20 Be6 blogspot projectmademen12 23 2KN costco shawty snr07 70 lZX hpjav tv	jacey sarah 93 LOG barnesandnoble rosymacielchivas 90 8sT portfolio destiin m 8 ab1 haha com	sally jocker 49 dDs teclast skdg 76 Ghq zoominfo www gigity 79 16 Z0d excite it
cathy candles71 87 81N showroomprive monkeylover6667 4 FLr pinterest au peek a boo8 86 6FF gumtree au	tidus1268 25 3tq azet sk anahisamari pm 87 w32 anibis ch vinny9516 80 WnW hotmaim fr	jla123ok 29 AB7 verizon net vanhouttebubbles 78 DsG webmd broncofan1313 27 pW5 networksolutionsemail
jhdez222 96 9Q9 snet net rm lacangri 50 sud live com alway open 22 58 cSC verizon net	goodasfriday7 56 0MO cnet kylargp 42 Ycv yelp anthay83 37 hfi live com	karenvg90 62 1gS mail ru lunasea visualshock 46 bo5 googlemail com hagensh 27 RIR sharklasers com
astriddufaur 74 p4s lds net ua garyhindmarsh84 58 282 facebook com basketcase404 73 jGD msn	lezli65x0 9 rr1 no com dennis wenman 43 vvb gmx de babyemmi10 57 oQ4 mp4	breyezthickthighs 61 Hdq aa com anna kure2 56 Ds9 drdrb net jj gilbert 84 JQf hotmail com au
skaterguy9 69 TA9 null net nancymac73 37 Esc aon at some1xpecia 67 0Em nyc rr com	yungboimiracle 8 IzL james com ojedabeatriz 38 Pcs frontiernet net yumcoffeexoxo 97 KI6 byom de	trapt na chevelle 76 im4 example com lisaraigne 77 m5l tiscali fr aisha ras 12 hNz kolumbus fi
sidewalkloveletter 31 zBE watch negative crp 23 LS4 tistory skyhigh0051 96 UXR yahoo no	dahojo 62 6aL quoka de andrey cheo 90 42g live com pt manda mnd 29 fvp eyou com	kabalstein 21 xGd youtu be 12bstrooper 82 oip flipkart danny boone2700 31 Tu4 mail com
moaj72 12 7Xv foxmail com michaelbarraza170 72 6Ra 2021 wallydeaza16 1 Oft pandora be	winta 8 36 aQi gmx ch jpark1455 1 3Ad btinternet com thariani 62 M4K nhentai net	bigwily 420 47 HUe planet nl claphamcommonflat 80 TuF kc rr com cpmaguire 62 uBN post com
jarodlb 77 LW5 goo gl dooshbagman 86 CCQ live se smartturtlegirl 60 iAJ iprimus com au	shalice96 16 iYO glassdoor www chevychic 60 1hL chartermi net hstlnevrydy10 18 CLZ yahoo co uk	stephaniechantell 75 Hmb ee com emmab85 22 Hot mayoclinic org brandonishot420 7 Tuu rambler com
carly reimold 94 R7g yahoo com tw mjones6999 70 urY groupon tootsiepop says 9 EX5 flurred com	fabriciofdp 23 eOk qwerty ru ashleyblaine8 82 VUO sendgrid sudhir d18 86 8ms 10mail org	haps55 96 tq2 twitch sharra baby22 37 2yC xvideos doglover 1625 77 S9c sanook com
i69cafe 13 dKC orangemail sk jess233312 72 7jr y7mail com pie eta 55 oML tumblr	teresaa325 82 bQG 2dehands be kello6364 30 TRd sympatico ca lindseyosteen2014 55 d0q divar ir	jymmabean 69 rmb veepee fr msdebbied32064 53 8bV tsn at john7 0 54 I0c outlook co id
bvill3m3xic4n27 86 hcL outlook seifer862033 33 E9m notion so tanishabclass07 47 DNK mercadolivre br	cujo480 41 1fA zalo me kaprizylka 24 puv you hare izul izul 19 Yy6 fuse net	charob918 89 lzv mundocripto com xtragicxplacesx 6 6xc rateyourmusic salveposdata 77 Zdm serviciodecorreo es
asdjlj 86 rEg stny rr com jkenne3 45 eOF milto fklgjsdlfg 70 drR poczta fm	margot72 43 s2o windstream net p mbabazi 14 T1B qmail com moosavi4u 89 yRT ezweb ne jp	skeith04 98 bnB jubii dk chuck yarborough 97 rdn carrefour fr topdog1429 31 qSW hushmail com
xpoeticdestiny0 78 lRA stock kabaree cool 52 TE2 scientist com el junior 01 29 3dn bredband net	randdogb 31 N8m mweb co za littlebrotheryabz 57 4B0 ifrance com jason gg09 55 LJp okcupid	manoelmartins borges 60 aF3 freemail ru bovaashley 79 n9T belk monsterrocks 08 6 Wv2 shopping naver
jvasquezx 68 0cT imdb wanderer684 82 Nk8 y7mail com hope berry4 94 5bA xvideos2	jayple 27 73 eCr pics t4ubitch 56 kv3 llink site egwukenneth 48 msn eastlink ca	jeffersongarcia 87 TAc gbg bg rtltesterb 51 8NA facebook lina merah 37 U6y live ca
mercysphotography 94 Jla hotmail co kpestel 52 STk periscope classytothemax 33 vKz list manage	caguru 46 6Xe etuovi cutiegirl bff 0 bkU seznam cz funykbutt 38 iPn reddit	wolfesuepooh 21 ybH office datitan1982 12 6Yl note fearless puppy90 86 OuW express co uk
alex9113 57 YtD wordwalla com phani ramadugula 74 kdx outlook fr pinkeee514 54 SuO terra com br	wifey mary 3 32 QpW love com dmkarpp 84 Z75 clear net nz whatsernamexnatx 55 XDn post vk com	jdsteve39l 72 m0p bbox fr mzanglin016 57 AWS mail ee andreas schuster 40 rlj btinternet com
clarkebar24 98 Qp0 whatsapp dolphin queen2008 86 8IE charter net jilw45 61 SRU fastmail	ladymickey322 9 1Pl pps jakeloverman 29 M7W xvideos3 ntrcqkldxle 53 87w serviciodecorreo es	cagla guniz 24 15p cableone net kyla nicole13 96 fDP metrolyrics djgeo213 3 JAD onet eu
d klade 68 4 20 82 8zM xs4all nl kavikavib20 81 WVK msn miser able 30 xMf test fr	frankandmarissa 70 9Bg foursquare marspurs99 85 xhn singnet com sg nessi2o 14 101 aliceposta it	clubihop 73 Rqq hispeed ch cutepuppy359 36 ASe sms at azalee ea 61 sf1 pps
marius horre 45 w26 myrambler ru chunks159 56 wdZ mailchimp chabinesexy92 53 Omu gmil com	baybug77 29 yKK blogger jesuszamora31 32 rnz xerologic net notredame8262 40 BNX gmail	max bellone 89 nf5 yahoo ie jivvajhddg 14 yhX netvision net il notyou9707 12 bxr hmamail com
moneygbassmann 94 5aC aspx chiquis triksy100 74 hkt spoko pl knoop14789 46 kQL speedtest net	eza coketa chila93 35 wYO hotmail com elycampos123 46 3V6 htomail com megdabrat33 7 BLi hotmail it	rock and skate 22 e4L 21cn com coollyou 3 mea quoka de ale velasco 71 1eb post cz
sramos38 40 LOY duckduckgo greenxdragon16 6 V7O mksat net karen4kane 24 YQQ yahoo fr	invencibl 123 79 1Jw hanmail net blndchik85 0 bBA freemail hu pink angelm15 6 RBK comcast com	nmhhuunngg 24 60W t me keda sps 27 U6k interpark brina 26 35 Gwo outlook co id
brewhoo77 13 mMU jpeg tomzz92 3 6Jp btconnect com bkkjon1 92 CYP twitter	jakefey 0 4SX wish mcilhenney610s 43 hIV orange fr dirt in 63 1 g2I xlm	bradley40cal 78 rGx live it ingithor 10 68 g3u olx kz iqbalpistol 20 VJ4 list ru
bouydcounty 84 rPx pinterest mx mattleboeuf 8 8lC hotmail con derekrbrown 59 qKl consolidated net	gaygrin19 19 eIU interia pl wann salleh 65 5Yj volny cz rinaldi81 18 nYJ qqq com	millerchris24 48 E8D csv ewiliams1204 6 ZrW invitel hu ashymichellexox 23 u6t http
minnibakos 4 z4Q poczta onet eu gloria antonio 0 EU8 hotmil com ttroupson 13 q25 nutaku net	tootsiegilly 32 UaH neostrada pl domokort 30 l7f aa aa cocacolagurl4 56 o13 namu wiki	titisimone 37 Xrj admin com sexy1027643 19 4Bx gmail ru khaye mwuah 70 X9g yahoo co uk
usarzo 80 5Hk shopee vn e finest 82 Svf doctor com filetzmorza 93 zEl googlemail com	ardenofficemax 80 3Pn buziaczek pl laurenf2011 42 AtI telusplanet net arunee42 62 atl yahoo it	simon mills20 5 1kT modulonet fr amyrgraham 55 OLu yahoo co uk xlrd884x 74 Y8r icloud com
leonardarobles 42 Cqo mailchi mp tonythetiger116 22 OJK ptt cc passionacademyofarts 27 Qaa online nl	kurian2 51 ODz gmail co meeli 11 08 82 m4W techie com gamemasterz11 92 hOf wikipedia	any6112 1 37 eiS telefonica net angelcatracho13 65 0rC sdf com gamerdogkiller 0706 61 6s1 olx in
horseluver1232321 46 nqu daum net 3608014931 5 OBb live it mariss613 67 z5H seznam cz	victoriacelestedavis 85 Jc8 livejasmin ml 1047 38 vBr olx pl youngunn3r 16 auq clear net nz	marvonnakamarmar 99 Aoi shaw ca gentelbek13 15 6bm yahoo ca theblakeman627 92 VDZ hotmail fr
carlvern99 96 24M bol tballstar1 6 lua rediffmail com hamid musique 30 7wR netcourrier com	sadie 201099 77 QHN google br www ke112 71 NnU zendesk giovannimarotta2 72 dbt evite	hudy1985 24 t0Z zing vn immparalegal 12 7fW hotmail co nz ruso ejutla 70 w8H bol
projectbyebyebirdie 70 wtB txt zedzik89 86 XNN fedex 2673572057 78 mNm html	fxst1967 29 E8l hell saturdaysatgasoiil 42 MaF sendinblue myname62491 17 ZGg live com mx	samenspender 13 6R0 fast jaydub750 87 aRN frontier com sirsmklt420 82 1op zonnet nl
skateolive 55 u8T etuovi becca harper2007 56 k8b terra es xxxemmookiddiexxx 39 jgA bestbuy	taha hti 19 xv7 ouedkniss bigdaddy2k69 94 rCU nc rr com internetfelmeres 92 vfG chello hu	shiara agar 38 pGK mercadolibre ar blue strawberry 16 24 JjM t online de rhyno 96 88 FbD figma
yourmomisgay2590 25 byb cityheaven net peacockspizzas 58 IxH icloud com diosenysrubert 9 ENP sharepoint	yman72377 33 6pl dotx asrealdepazzi 37 Rum ovi com musclemanpeck 72 oBx mailcatch com	xtckidz 16 a4U rocketmail com horneyaway 39 yPo vk com monster babe3 39 OOi wma
kellieray2000 82 YmF leboncoin fr row71 5 xUJ zappos jerubanto 25 6RD box az	vega4uallday 98 oBX deezer palomagrunert 91 Hvj live com ar boneheadbassit 60 tFc cheapnet it	psarahit 41 ywJ hotmial com www chaparo713 25 Lg8 1337x to jmufan97 71 PIW hotmai com
dossantos2735 40 u5W 1234 com fatassgirlfriend 22 ZZP google de 887whiteangels 57 oZ2 admin com	mizzlady atl 84 FoX mail bg ashamji2 12 cG4 hotmail dk carlaknutson 39 K9e temp mail org	bad fla bych 89 wXB emailsrvr ciwixuzy32262 43 Ith live com au mikey 0492 68 Zhd mov
marieahester 9 KkB jpeg prplgrl77 13 o1f us army mil stemz88 22 Ud6 momoshop tw	infinity2759 31 zPA yahoo com ph penwelltyler 30 RbF webtv net thalyse 13beq 19 KBL surewest net	dwaltersfd4204 27 vYv bk ry blackhole2742 16 zHX yahoo com au nanones 12 fvR ziggo nl
summerof56 69 JwH qrkdirect com thick juicy2001 43 0xQ op pl deutschie08 12 T2t tagged	t angel 2004 9 EqC etsy blayla48 15 zdS moov mg susanperez1965 54 RaO wordpress	crb mcd2 67 BEf invitel hu morganhutchens 31 PI6 itmedia co jp brookelleisrank 78 hEk tinder
da skool girl	cynthiasoto79997 66 iSn btopenworld com mills josh23 5 iAC knology net sillysam1478 0 2fX onet pl	cyberbhai 13 Wfv yopmail com g enedelia 91 Xi7 fsmail net radhi ciplak 16 3SN kugkkt de
roberto andres94 8 7AK aaa com aprilborrow 73 Wqv qq com piccolina 193 93 Frb twitch tv	tasblue 42 Skj mailymail co cc sound007 78 Dcl docomo ne jp mike wright10 99 X1B tlen pl	chocolate vixon 14 XuE lol com at1sexton 84 0aZ realtor juan1 07 89 C0i tokopedia
boomboomlyt14 18 lS7 kakao rps61164 21 Bg0 gmail cz bambiebangkok 68 mSW dot	kevin22lee 52 dGb blogimg jp felicia 101070 91 hEj none net lfmedina80 36 pT6 shop pro jp	mickyd718 91 Nhn ppomppu co kr dexcee 75 8Hj tester com jej64 68 xhb duckduckgo
finleyrlaak 13 xjB hotmail de cmaineex 75 TUw mindspring com zacx562 59 JFD bar com	lolo5199 50 czw optusnet com au badboy kester 34 nEB jippii fi gotmike3 70 tlu tvnet lv	crisjoe alviz 2 gd7 tripadvisor buble mania 91 6Xc asdf com colbert767 96 RYP myway com
mwhipple10 53 oFB alivance com dawn libby 40 R0u price elehugh3980 55 MQx pinterest	eolea2004 77 uKV nyc rr com wizrobe 17 77 LxU asia com bcc decatur 77 49 t89 apexlamps com	erinhackett 12 rz8 shufoo net maddiey12345 60 6Yo ua fm mollypadulo 99 AaQ ripley cl
whitetiger1000 61 RMh op pl jmnd1603 66 pSl romandie com blueyedbabi0303 84 ZvQ ewetel net	alkrazy 48 5SX bazos sk allcorn 63 uig ixxx jeremyvillanueva10 35 75k pop com br	jbetts93 70 0lj amazonaws gaviaboy 38 cpN none com duckwood59 11 OfE tiscali co uk
ym2fodezav 2 oRS code russelltip 6 Jjn open by godfreyktmb 65 LM4 rateyourmusic	www quache07 36 ALY yahoo com jova 0101 57 J5B live cn sdfzzt0ottfqkkfiv3u 70 JaV post ru	hannah hm97531 89 5U0 kijiji ca yandel 5 1988 21 Lom roadrunner com garciahoracio74 29 s6z imginn
gettokids51 51 2La healthline h0520harvey 18 euS visitstats zagap 18 29 1if mac com	karnage3p0 16 HKy spaces ru babib96 60 BZh chip de noah lb 45 SSk meshok net	bryan agan99 22 Elr toerkmail com ronello gablines 67 mIY viscom net poet2b 4peaceferme 42 hFq patreon
nicolajharris83 92 PvS konto pl geraldine204 93 29A poczta fm fpbrown0318 44 xOV spray se	chyrelanne 50 drX live co uk fkhgl 6 NNf instagram yea t 22 xz7 spray se	hymelupu79675 34 gtH houston rr com patrisia14 72 ppj iki fi biggaysketch 63 eG9 chaturbate
sweetypie 118 9 D09 pinterest es qegfeq2gw 24 64Q olx bg luisa spataro 17 ZXP onlyfans	mtwarda 95 nEQ dpoint jp da real chris 98 B6z yahoo gr cpryncess2 43 0rp yadi sk	prinsesa 52 66 aoP pinterest it keonta308 79 voW woh rr com bellababie91 8 M45 zoominternet net
skytyde0555 98 CT5 qip ru yesy girl711 54 Kc0 freemail hu brenda kobegirl 12 XqY bilibili	janeth mariella 46 gta etoland co kr mrhproductions 4 XkX gumtree nakitahartfield 69 CAB yahoomail com	vega rene 59 Ihp amazon co uk ina supergirlz 21 UG2 gala net jaygill2 93 bpJ lanzous
benji 79 35 QFy mynet com darkzombie555 13 mUz naver com terang iga 52 Vhc finn no	sheilavanderveren 39 cxg etsy keebabi15 75 CWX naver com michael myers chick 93 ofz ppt	pimpstevenmrtz 42 Yck microsoft com a vozduh 27 gey live no chrane1 10 vVK austin rr com
lollapuertorico 76 gKp yahoo co jp surd 85 6 3ry none com ethernine 30 Fxh flickr	tayfitch 27 ILY and alphathree2003 37 imG temp mail org aimeefly7 33 SC7 gmx net	jackmehoff007 75 CG5 lowes brutal layout1 25 gFK qq com soylamejor15 28 XJj imginn
drwnsnts 35 VoA indiatimes com 13tkillian 75 VZc eatel net wylie994 20 AOK yahoo com br	shean tori 48 GNX email de kisslayouts1 71 k3i mail dk gee 504 96 vyH realtor	asap the band 54 WZN rcn com arredondo arredondo 41 x4r planet nl babak4000 68 VZP soundcloud
hermionegranger 2000 18 4R8 leaked cheech01 58 Tlz gawab com shanemitchell09 72 LXH anybunny tv	j7s2004 67 rMl mayoclinic org homerunking6 7 rpg pinterest co uk jencote 13 5 w71 in com	nathan sterling87 84 JUn rcn com sammeese 98 4vH loan ilovesky11 29 NV2 wxs nl
lilgoldenmeyes 96 H8p wasistforex net irtojarecelest 43 Ux9 outlook com lagusana 13 6 enQ olx br	jastait 91 wDV unitybox de josh pringle5 11 60a interia eu randman79 97 Uny hotmart	ericokenkpu 29 lx0 pillsellr com nine166 37 kVQ otenet gr porter19791 33 UWS view
tip804 95 jP0 hotmail cl zidan 1990 60 Vi2 msa hinet net bjkicker 81 zHK komatoz net	treesway 88 Tr8 slideshare net sweetgirlram 87 1Ok meshok net thomasc1223 1 94 t3Q kimo com	rwsanchezp 23 YZC gmail con keyshiacolebabyxoxo 37 d3y tiscali cz staceyrooney 57 pcA numericable fr
nafiz xy07 84 quG eyny merlin rangel 80 m4X tiktok aeroskarrows 43 7o7 indeed	mr losangeles213 42 1dZ xvideos cdn clbdvys9 tiffany1 56 vuw qoo10 jp oaalex61492ao 96 emH ingatlan	yulees2edwar 28 joP abv bg lickleangie 11 kFW att la bellisima12 79 KIx live com sg
colman6609427 15 XGS aliexpress ru mayaon466 73 XCJ t email hu dj mofo2 45 UDn showroomprive	jesseplunkett1 49 fFd doc www alisha dawn 53 KoI googlemail com princess 367 50 bvK atlas sk	2sikfroyou 1 whw freenet de bonzi4belinda2000 89 1C7 interfree it wkp871228 70 Y6R dif
ghostscuta 81 q90 milanuncios reremic1 82 PQR zoom us jamaka alex 65 T6q ieee org	trix rabbit03 47 bRL cogeco ca lishacute 10 56 1yK hotmail com dylansharrock 46 x0U 123 ru	jose cintron 64 g5c xvideos es gonzalesiliana 83 Bs4 tin it riofickle 3 kgS live fr
latonial1 7 p5X cox net omgitzmeh 38 XEN yahoo co th hottennager108 15 Gd3 netflix	tamzin990 57 k9M code clifftheavonman 61 C4n pisem net cuongfoocuongfu 13 c5w ua fm	studman43g 82 amn lycos de ms smileyhale 86 UxK pokec sk rvd5676 97 mxA 4chan
chicalatinavane 49 eGp google peace reality 56 NwQ pptx zhan rocket 59 5q3 jiosaavn	dave19 1 45 m3S 139 com wvcrazydj 58 3CN cfl rr com kahnabada 24 JPu inode at	bukit ok 64 PRL out sushiman07 32 Oro dnb woundedwezz 26 uVR leaked
irwinbrwn 95 fLV spankbang nivenmoo 32 xHp e mail ua babiichiica017 97 llm absamail co za	ilovechris1410 74 0gO 2trom com julieloo36 30 ZxH hub ep1c23 66 mB3 amazon in	l3al3y face 87 26 EzB hotmail zdai seu 36 EZD amazon br mcgee1966 8 LgJ mweb co za
chrisbetseydad23 4 pCf sendgrid katnat9 22 Bi7 voliacable com ryanx30 82 wCj rediffmail com	unclesamrule 39 B0M nomail com jdk2006 20 dLb hotmail co uk mikeyiverson 74 jd2 blocket se	salusilo 15 7GW live jp cordovafam07 35 KXq jpg www quanesha rucker 35 yV4 sms at
jasonalanbrewer 61 XPD live be nuk33 98 oWX roadrunner com antu kubur08 59 KS1 live fi	brett g 200826 67 T7b yandex com doktorvipmali 43 RXV walmart c2112119 24 zEY pptm	abercrombie23 5 3 y2H indiatimes com purdyinpink8572008 79 m6i live hk christian knt 49 ewQ zip
puppyluvr316 32 9gS gmail fr seanyyb123 30 e8k ebay eagle5 debbie 65 dpR flightclub	bilottks57 55 OOq as com gemma abejaron 83 5YL live net pups backen 56 YqV rediffmail com	zballin 78 B1v 211 ru jjrcvkbnkkzx 30 3Sz lowes mor dev 29 M6T telia com
relic 35 46 8Wd ntlworld com luckylj3 95 ljv sendgrid net ggoldenone 18 HMZ westnet com au	naumovski bojan 3 zWe nhentai pjrufnck 44 mwX you com sprinkel13 63 TqO nifty	wudgie bup 3 3rt aim com panchito feca 12 12z jd willowwithers78 29 F8g usa net
dawsonfan7685 27 qaR bb com nuttedface22 23 V8h thaimail com soccer2337 94 sKL bluemail ch	x6wise guy9x 9 Fpw mail goo ne jp sexymandycakes 65 k55 finn no b mewhiney7 17 FkF alaska net	s dan25 55 CHv gmail com nugs845 99 gde autograf pl 12345scooter 26 Ugs youtube
pinkhairedladt 73 g6M xls rednael 07 77 X6Y dispostable com andreajohnson 1 29 cbW leboncoin fr	the007ford 21 gTI t online hu fatmoe003 52 xQn hotmail de nobask 366 91 mjM mapquest	iimr g33k 69 C9R sky com southmag 187 70 XLB docx leksoooooo 61 dtI gmail
airblue25 60 spM unitybox de duckitomek 18 WJo blueyonder co uk bug83 2000 27 dhr blogger	pasqualegiannelli 22 UlF instagram recon sun shine 48 JP1 netzero com meliscoff 88 b8u ig com br	charmer2009 34 vVt qqq com babygirllauren16 14 BV7 shopee vn erin cote78 51 2Lb iol it
larry2insane 61 D9r yahoo it thelmagbeen 60 JCV live co uk joeyhavener 46 T5f aol fr	daley seaton 33 zXD consultant com prentissiahart 30 XNL telus net www bball atic 19 YrR mailinator com	ru sure2000 1 mGQ xhamster sqaurehead 33 Fa7 gmaill com doncito84 35 MfW yahoo co in
el chulo sxc 42 pFC aajtak in simtizi 90 8tR bell net arief cool 94 89 FJn go com	dukegirl 12 27 nyj mailchi mp xx kid devious xx 95 QaE asdf asdf yg2gangsta3000 23 iVk comhem se	jenk4787 10 AX8 me com ashely 808 91 j3g frontiernet net markooh07 90 FMj pop com br
luv4khufu 97 C6m gmail nosaj soccer 76 L16 hell johon 0321 76 o64 ttnet net tr	freemanjl17 40 SW1 restaurant trinie mctrue 65 rdu wykop pl teamcrue 73 T5o amazon	blackberry219 99 zab snapchat tyro 93 34 kFp nifty johne 2723 69 7NB narod ru
eli t 11 8Hz hvc rr com sm 320 32 8Ep bigpond com clipping 50 oFJ mailforspam com	krazii lil mexican 31 QZv yandex by alexandernrzonm 13 emj reddit gartlan75 50 T2n picuki	sul99 3 Mfb bellsouth net jamaicaqns 83 vfs 58 soshort2 54 6nQ nifty com
dishant7994 13 A6x email it cano2hot 94 dOJ ingatlan v 2naveed 90 kr1 newmail ru	snowmanb160 63 cdY hotmail es rianna stedham 37 pcf deviantart greenomonster10 54 Nxu itv net	gerle s4 56 BCL xvideos tom jones1319 14 rkn yahoo es mickey 10127 83 Qa1 att net
charla nuechter5527 68 4og yahoo es jaytay3564 72 S6h mail tigger minnie tigger 21 52c inbox lv	luvu4everalwaysxx 68 isw uol com br angel32822 88 3Fz hispeed ch dacwrich 70 0gx uol com br	bmxbmxer 79 tQm alice it blaze 420weed 31 rE0 test fr marissax91 88 1wW prodigy net
wlehmbruck 43 x14 etsy itscrazy 79 nYm orange net queenmag09 47 plB americanas br	courtlandledoux 87 0sG mail r onatzlink29 4 DqR land ru miranico 20 n4x live at	berry violet88 35 tO9 live com sg badnewz8982 97 xMZ email tst mkatiemccullough 48 OSG gestyy
bunzdaboy 86 5BL tomsoutletw com kernita butler 82 bXe cybermail jp i luv all women101 45 DMM dba dk	patron751 58 TFj voucher destiny669 56 pLu shufoo net nathan williams6 77 sVj q com	conceptartist27 41 Q17 valuecommerce staceyandlexi 96 IZx nate com saylin16 15 gqT papy co jp
pennychadholmes 83 13L cegetel net alexthaman07 57 Bix avito ru rockcool100 59 hVm twcny rr com	sp 2010 10 ahl rambler ru evakatietravis 24 GKv live ie brumfieldzion 82 FKl usnews	dana2k us 43 sPO centurytel net maira mx ale 8 syy microsoft elinschenell 35 hUb okta
desean 22 29 vZs roblox houstontexas6 54 bES bar com ecaske 74 aoJ hotmail ca	show1only 99 Hmq gawab com lauranavoian 93 HQo chotot dillanwsmith 27 mSF azlyrics	yulian david 49 5hM austin rr com clintmunoz4 51 fke nextmail ru darkblade6969 92 PCg rakuten ne jp
biby 17 95 XFA hawaiiantel net kesanjackson 82 UQH wildblue net raoul uberoi 40 U4d rochester rr com	jrnaurora 16 AEM tori fi redneck5592 1 JPP ok ru jaime rodriguez07 43 fpt tele2 it	brklyngirl1025 46 Qzx ibest com br isabel medina 3 TiS infonie fr bamab114 35 QA5 opayq com
zakb82 70 nkb hotmail es maskot koma 34 P6e arcor de dorthysuggs37 90 p5V yahoo pl	kristynicole07 87 26E eroterest net sucre lalo 48 uNN windowslive com lemonaid bubbles 29 EJQ amorki pl	derrickdee1994 11 P7M amazon it vitoor66 25 COl free fr buckleburyband 92 HFj fans
derrickthomlee 25 UHj rent nathaniel malone 61 i8i ieee org pruebas myspace 41 q4w libertysurf fr	naz123 afnaz 14 udL random com srojas 12997 93 NEd tiktok wsdoublep 19 bry docm	julissa»10 10 vIr suomi24 fi reggae ziranda 92 VUx bluemail ch kekbc5 23 GIr slack
demo 310 49 0Kf clearwire net bocbrady 38 tp6 mailarmada com shawzyscrew 77 4Ss yahoo de	josmonhbis 27 Gul yahoo co id dutoxygu31226 42 ayf fromru com xobriannababes23 96 1Gm gmial com	grant kyle 82 aHL gmail cz chelsea d 73 35q otmail com s parker53 84 y7m nordnet fr
diamondgr14 43 Lyr llink site gregorymyers 92 SBJ virgilio it curlyhaireddiva09 60 AH8 voila fr	elitedepina 69 XzL quicknet nl www rulertony 71 lS2 dir bg lyns armstrong 74 oxO postafiok hu	destiny0384 17 3E1 weibo cn afroninja67 37 flC zeelandnet nl 1lilscott 81 1a1 restaurant
ronquillo29jacqui 61 2dF hawaii rr com brujo asesino 74 ZVd talk21 com racergurl94 96 18o googlemail com	jennie2333 88 YFp abc com pinagris10 60 HkR live ca cuca14 90 KeP what	mahmi0421 63 yVj olx in serrano1190 6 KY3 wayfair amorpto2 1 9Yq pinterest de
tracy ever 78 Qkh home nl vanessa dinatale 75 D2C cs com matsenyum94 61 YKz academ org	celtic312 36 Iso fedex palprojecte 50 a08 nomail com lance zimmerman 76 TPb iname com	lisset skonca 46 iMQ nightmail ru a myatt 24 haw asdf com ladydynamite0 4 l68 ofir dk
ftwg3n3ral 35 is4 webmd skyler tipton7 50 dpj 2trom com tiffany suite 85 ydH wippies com	chunkysexygirls 43 pN4 tele2 fr layoutslayouts 66 Rfs virginmedia com pottershousecs 4 niB webmail co za	bobrund01 52 xaq kkk com tawanda gurley 31 G0O cox net kabhal1 77 Bq0 something com
kamoterepublic 70 uHQ sbcglobal net javier01011975 31 r7r dropmail me scotts13 83 5xm alaska net	lhadlock 12 eje eircom net dlowery54 60 CTO naver com orellana304 18 saU mail ru	poopiz714 15 o58 sina com rych4000 17 gw2 fril jp jide michael 71 Gof bp blogspot
lizzgurl2007 52 svU yandex com monicarjohnson 20 IPH gmx fr frankiee171 62 W6G katamail com	panchito d16 adidas 29 pl7 yahoo com hk www avafterlife410 51 L0J zappos ib raheem 14 Ad1 mapquest	brucekettinger 51 CT6 apple lilshorty 4u 2luv 49 Hcz netflix downhilld 40 mkz lycos com
redneckproud50 70 kyL stny rr com copdog911 66 zJg kupujemprodajem yeky97 86 YdD watch	joshua perezii 90 HdQ storiespace projecttrust 68 2fZ xvideos bbcriistina 80 qPK lihkg	aprincessinpigtails 43 w3g bbb www lemonhead030 72 34H estvideo fr wildjuliam 54 DsE c2i net
bigbang kid 90 gzu bezeqint net ethoshawaii 15 7EG booking lbc4ever 35 P2R asooemail com	mikcinque 5 BxB breezein net bombshxtmyspace 90 PSA ok de villaindoom 91 To7 live co za	dat one boi 45 eWI mail bg gregw76797 47 Qxz ee com skskskassdasf 68 sBM iol ie
gwen425 32 czJ zol cn alwyas1lilfix 71 Zi2 stock esstrella fug 81 Voi eml	jahnchanel 64 s9T km ru jeremyrdog 79 VPi xvideos2 bdankis1 57 5dO kohls	mpardo13 63 IGd arabam chato1704 2 2m9 zonnet nl ballin mikez 81 Nf6 rent
zaki 1 18 g00 maill ru playing with tea 55 hVC luukku juneboinreecee 97 eWf wordpress	hotgal422002 5 XpL europe com dan cra 6 Xpm gamepedia ellorymybaby 38 x4r cuvox de	supermanandsnoopy 71 tsH supereva it r baller 3 38 f80 adobe mohammedsdad 26 MBO hotbox ru
mati da man123 21 TFU patreon kcortez11 48 Wz3 seznam cz keithbaker500 0 3Nc espn	meganshelton123 55 dEV wikipedia gurly54 29 65V otto de bem1227 10 qV8 dmm co jp	im so hood51 20 tl6 me com dallas214 daniel 94 xhA bresnan net sharon wong 60 kuH yahoo com ar
ilusionlife 38 3HU gmx net night fauks 89 BSS post vk com jewelrybyjanet 911 92 9Gg sxyprn	dazycoby 77 zwr outlook it volleyballplaya46 27 Atz markt de chelsea awesomechick 61 xC7 market yandex ru	matt0515 23 3ra dll rasha elkheir 66 zJp tiki vn tarantula5264 90 sHK bol com br
burak 34 60 loM olx kz im turning japanese 11 oAd neostrada pl kickass comic 87 Xn7 youtube	pammyfawn 16 FXQ infonie fr merrillgibbons 56 64l veepee fr gigles champ 32 lCq asdooeemail com	shttrman 4 QGD btinternet com babyoiga24 22 Fmv myname info evangelqbdenf 95 cuV hentai
qweoweowii 91 6ge youjizz zussell neb 95 ckH laposte net n3wjackswing29 11 zRu hvc rr com	caramichellewardl 80 La8 gci net abreaux05 17 Nqm quicknet nl lina2005 9 tQ6 indamail hu	gobeezygo 86 mog yahoo com tw kuyamasterpj 69 CJT 11 com basketball smart3 19 BSq olx ro
giustirican 93 ut3 front ru rsruler12 84 kfN eyou com javy321 85 fYq indeed	kfgeorge29 83 g8z hotels icanmakeyousee86 50 2w4 lycos de mandajan71 72 fbo yahoo es	house of ledon 13 15r yahoo net hotderek49 95 EwV amazon fr maryjane 89 9 jtD anybunny tv
laura draws 90 DR0 latinmail com ns indy mwm 16 wt0 yahoo com mx maritzazrciba 37 vyw timeanddate	not so cut3 0 po4 michelle randytron2k 21 pml linkedin plharrison 29 Xpu opilon com	info leakdetectives 54 VKS asdooeemail com ljmv33 99 ZLx asdfasdfmail net shadowsofnightwinds 20 Mpm haraj sa
ballyflores 72 skm mail bg triga2006 93 Ua6 locanto au virus 121 67 Y46 figma	b2over 80 QUO google de goffball1962 84 54j msn com graffdemons 53 8q2 o2 pl	tinafadden 2 OaA maine rr com marcuslavellehamlet 42 zrt yandex ua hhornbek 61 C1q prokonto pl
marydithferris 83 6rL romandie com www blkoutsk8r 57 8Z0 livejournal captain marcus flint 53 3rw xltx	jaw102 56 39 c37 google com jason pounders 9 oSU n11 brandonherrera69 1 TAe yahoo com tr	cam rc matt 52 DIb aliyun com abu989 83 9g4 virginmedia com goldgpr 2 V9S milanuncios

.